千金藤素在制备治疗炎症性肠病药物中的应用

摘要

本发明公开一种千金藤素在制备治疗炎症性肠病药物中的应用，千金藤素提取成本低、毒副作用小，可综合改善结肠炎症状、对结肠炎的炎症有抑制作用且对结肠炎的肠道屏障功能有保护作用，可应用于制备治疗炎症性肠病的药物。

说明书

技术领域

本发明涉及千金藤素的新用途，尤其是一种千金藤素在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。

背景技术

千金藤素是一种从千金藤属植物（主要是头花千金藤）中分离得到的双氯芬酸喹啉生物碱，目前主要用于治疗放化疗所致的白细胞减少症，还可治疗蛇毒引起的鼻过敏、脱发和溶血等，具有成本低、可获得性高以及副作用发生率低等优点。中国专利号为202110172158.7的发明专利，公开了一种“穿山甲冠状病毒xCoV及其应用和药物抗冠状病毒感染的应用”，具体公开了10微摩尔每升的千金藤素在感染复数0.01的xCoV感染细胞72小时后，能抑制病毒复制15393倍。说明书同时公开其作用机制是：“千金藤素主要通过干扰细胞应激反应，包括内质网应激/未折叠蛋白反应和热休克因子1(HSF1)介导的热休克反应来逆转受感染细胞中大多数失调的基因和通路，从而发挥抗冠状病毒效果”。

炎性肠病(IBD)作为典型的炎症驱动型自身免疫性疾病，包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)，其特征是疾病活动期和静止期的反复性，据统计全世界约有350多万人受到IBD病的影响。目前治疗IBD的药物主要有5-氨基水杨酸(5-ASA)，类固醇以及免疫抑制剂等，但疗效并不确定且有潜在的严重不良反应（如药物热、皮疹甚至神经毒性等）。另外，炎性肠病(IBD)高复发率和禁忌症也限制了目前药物的使用。

迄今为止，并没有关于千金藤素作为治疗炎症性肠病药物的相关报道。

发明内容

本发明是发现了千金藤素具有改善炎性肠病(IBD)症状的作用，进而发明了千金藤素在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。

本发明的技术解决方案是：一种千金藤素在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。

本发明的千金藤素提取成本低、毒副作用小，可综合改善结肠炎症状、对结肠炎的炎症有抑制作用且对结肠炎的肠道屏障功能有保护作用，可应用于制备治疗炎症性肠病的药物。

附图说明

图1为各组小鼠体重变化示意图。

图2为各组小鼠结肠长度及肠重量/长度比值示意图。

图3为各组小鼠疾病活动指数示意图。

图4为各组小鼠结肠切片HE染色图。

图5为各组小鼠组织组织学评分示意图。

图6为各组小鼠血清炎症因子IL-6表达量示意图。

图7为各组小鼠血清炎症因子IL-1β表达量示意图。

图8为各组小鼠血清炎症因子TNF-α表达量示意图。

图9为各组小鼠血清炎症蛋白iNOS表达量示意图。

图10为各组小鼠肠道屏障变化示意图。

具体实施方式

实验：

1. 实验材料来源

C57/BL6小鼠（雄性，6-8周龄）30只，由大连医科大学动物中心提供。

千金藤素由成都普什生物科技有限公司(中国成都)提供。

葡聚糖硫酸钠（DSS）购于大连美仑生物技术有限公司。

阳性药-柳氮磺吡啶（SASP）由天津西恩有限公司(中国上海)提供。

4kDa FITC-dextran（FD4）购于sigma–aldrich (St. Louis, MO, USA)。

2. 实验分组

随机将C57/BL6小鼠分成5组，每组6只，分别为空白对照组、模型组、阳性对照组及实验组。

3. 实验方法

3.1 模型建立及给药方法

空白对照组（sham）：不造模，自由饮用水，给予无菌水灌胃。

模型组（model）：自由饮用含有DSS (2.5% w/v)的饮用水7天。

阳性药组（SASP）：自由饮用含有DSS (2.5% w/v)的饮用水7天，在给予DSS饮用水的第二天起，给予SASP（500 mg/kg体重，溶于无菌水）灌胃，每天一次。

实验组（CEP5、CEP20）：自由饮用含有DSS (2.5% w/v)的饮用水7天，在给予DSS饮用水的第二天起，给予低剂量（5 mg/kg体重）和高剂量（20 mg/kg体重）CEP（将千金藤素溶于微量二甲基亚砜后，加无菌水配制）灌胃，每天一次。

3.2每天对实验小鼠进行称重并记录。

3.3每组取3只小鼠，从实验开始连续灌胃7天，第8天更换为自由饮用纯净水，第9天取小鼠血清，采用ELISA法测定促炎细胞因子(IL-6、IL-1β、TNF-α)的表达水平；取小鼠结肠测量其重量与长度，计算重量/长度；结肠切片HE染色；取小鼠结肠组织，提取结肠组织蛋白，采用western blotting法测定和炎症相关蛋白iNOS的表达水平。

3.4 每组取3只小鼠，从实验开始连续灌胃7天，第8天更换为自由饮用纯净水，第9天起禁食12小时，每只鼠灌胃150 µL 80 mg/mL FD4，4小时后，检测小鼠血清中FD4含量。

4. 实验结果

4.1千金藤素改善模型小鼠结肠炎症状 每组小鼠的体重平均值的差值如图1所示。从图1可以看出，模型组体重

减轻，CEP5组体重虽有减轻但优于模型组，阳性药组、CEP20组体重均优于模型组且CEP20组体重优于阳性药组。

每组小鼠结肠长度、重量与长度比如图2所示。图2中左图为各组结肠长度示意图，右图各组结肠重量与长度比示意图。从图2可以看出，模型组结肠结肠长度缩短，结肠重量与长度比增加；阳性药组、CEP5组和CEP20组结肠长度及结肠重量与长度比均优于模型组，CEP20组结肠长度及结肠重量与长度比均优于阳性药组。

每组小鼠疾病活动指数的影响如图3所示。从图3可以看出，模型组小鼠疾病活动指数升高，阳性药组、CEP5组和CEP20组小鼠疾病活动指数均低于模型组，CEP20组小鼠疾病活动指数低于阳性药组。

每组小鼠结肠切片HE染色图如图4所示。从图4可以看出，模型组粘膜上皮形态改变异常(黑圈)、炎性细胞浸润(红箭头)、粘膜下水肿(蓝圈)和肌层增厚(黑箭头)，而阳性药组、CEP5组和CEP20组相比模型组明显改善。

每组小鼠的结肠组织学评分如图5所示。从图5可以看出，模型组结肠组织学评分明显增高，阳性药组、CEP5组和CEP20组结肠组织学评分均低于模型组，CEP20组结肠组织学评分低于阳性药组。

图1-图5结果表明，模型组建模成功，实验组小鼠结肠炎症状明显缓解，说明千金藤素可改善模型小鼠结肠炎症状。

4.2千金藤素对结肠炎小鼠的炎症有抑制作用

各组小鼠血清炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α及炎症蛋白iNOS表达量分别如图6-9所示。从图6-9可以看出，模型组各项表达量显著增加，而在给予阳性药SASP和不同剂量千金藤素后，各项炎性指标均降低，说明千金藤素对结肠炎小鼠的炎症有抑制作用。

4.3 千金藤素对肠道屏障具有保护作用

各组小鼠肠道屏障变化如图10所示。从图10可以看出。模型组FD4的血清浓度显著升高，表明肠道屏障受损；而实验组FD4血清浓度较模型组减少，表明千金藤素对肠道屏障有一定保护作用。