公开/公告号CN114958665A
专利类型发明专利
公开/公告日2022-08-30
原文格式PDF
申请/专利权人 海南大学;
申请/专利号CN202210570633.0
申请日2022-05-24
分类号C12N1/20(2006.01);A01N63/22(2020.01);A01P1/00(2006.01);A01P3/00(2006.01);A01G13/00(2006.01);C12R1/07(2006.01);
代理机构广州三环专利商标代理有限公司 44202;
代理人文小花
地址 570228 海南省海口市美兰区人民大道58号
入库时间 2023-06-19 16:33:23
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2022-09-16
实质审查的生效 IPC(主分类):C12N 1/20 专利申请号:2022105706330 申请日:20220524
实质审查的生效
技术领域
本发明涉及生防菌剂领域,特别涉及一株防治瓜类细菌性果斑病的沙福芽孢杆菌S21及其应用。
背景技术
西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli)引起的瓜类细菌性果斑病,常见于西瓜(Citrulluslanatus)、甜瓜、厚皮甜瓜(Cucuumis melo var.cantalupensis,包括哈密瓜,伽师瓜)、南瓜(cucurbita pepo)、黄瓜(Cucumis sativus L.)、西葫芦(CuCurbita pepo)、蜜瓜(Cucuumis melo var..inodorus)和苦瓜等。发病后容易导致大量减产,商品瓜得率低,损失惨重。
目前已报道的防治瓜类细菌性果斑病的芽孢杆菌类产品的防效欠佳。如武芳等报道的用于防治瓜类细菌性果斑病的芽孢杆菌类产品“蔬得康”的防效只有40.8%,李乐书等报道的枯草芽孢杆菌TS86的防效只有67-69%。
发明内容
鉴于此,本发明提出一株沙福芽孢杆菌S21及其应用,应用于防治瓜类细菌性果斑病,防效优于现有芽孢杆菌类产品。
本发明的技术方案是这样实现的:
一种沙福芽孢杆菌,所述沙福芽孢杆菌为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21,保藏编号为CCTCCM 2022467。
一种含有本发明所述的沙福芽孢杆菌的菌液。
进一步的,所述菌液由菌株沙福芽孢杆菌S21接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基中,经培养制得。
更进一步的,所述菌液的制备方法包括以下步骤:
(1)将菌株沙福芽孢杆菌S21挑取单个菌落,接种至80-120mL牛肉膏蛋白胨液体培养基中,在26-30℃、160-200rpm条件下振荡培养10-15小时,得种子菌液;
(2)将步骤(1)制得的种子菌液按1.8-2.2%(v/v)的量接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基,在26-30℃、160-200rpm条件下振荡培养45-50小时,得到目标菌剂。
优选地,所述菌剂的制备方法包括以下步骤:
(1)将菌株沙福芽孢杆菌S21挑取单个菌落,接种至100mL牛肉膏蛋白胨液体培养基中,28℃下振荡培养12小时,得种子菌液;
(2)将步骤(1)制得的种子菌液按2%(v/v)的量接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基,在28℃、180rpm条件下振荡培养48小时,得到目标菌液。
将上述沙福芽孢杆菌及其菌液应用于防治瓜类细菌性果斑病,尤其用于防治哈密瓜的瓜类细菌性果斑病。
进一步的,采用沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21浓度为(0.8-1.2)×10
进一步的,将所述菌液喷施于叶片。
进一步的,所述叶片为哈密瓜苗叶片。
沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21应用于抑制西瓜噬酸菌Acidovoraxcitrulli或/和荔枝霜疫霉病菌Peronophythora litchii。
沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21应用于制备西瓜噬酸菌Acidovoraxcitrulli或/和荔枝霜疫霉病菌Peronophythora litchii的抑制剂。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
本发明沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21,保藏编号为CCTCCM 2022467。本发明沙福芽孢杆菌S21应用于防治瓜类细菌性果斑病,其防效优于现有沙福芽孢杆菌产品,可较好地提高瓜类对西瓜噬酸菌Acidovoraxcitrulli的抗侵染能力,而且还可以同时抑制荔枝霜疫霉病菌Peronophythora litchii,可应用于制备同时抑制西瓜噬酸菌Acidovoraxcitrulli和荔枝霜疫霉病菌Peronophythora litchii的抑制剂,进一步提高沙福芽孢杆菌S21应用价值。
附图说明
图1为本发明沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21菌落照片。
图2为本发明沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21菌体显微图。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容,下面提供具体实施例,对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
本发明提供的沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21由海南大学植物病害生防研究团队分离获得,保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏中心地址为中国湖北省武汉市武昌区八一路299号,保藏编号为:CCTCCM2022467,保藏日期为2022年4月25日。
实施例1-沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21的分离与筛选
采用平板稀释法进行分离:称取5g土样,加入45mL无菌水中,振荡培养30min,静置5min后,吸取100μL的土壤悬浮液于900μL的无菌水中,依次进行梯度稀释(10
上述土样采集自海南省乐东县佛罗镇哈密瓜大棚的根际土壤,用密封袋密封后于4℃保存,48h内对土壤分离。
沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21生物学特性:杆状、产芽孢、G+,好氧,接触酶、氧化酶、明胶液化、淀粉水解、MR和V-P试验等生理生化测定结果均为阳性,可在2%-10%的NaCl培养液中生长。
实施例2-沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21生防菌液的制备方法
1.种子菌液制备
将菌株沙福芽孢杆菌S21挑取单个菌落,接种至100mL牛肉膏蛋白胨液体培养基中(配方如下),28℃下振荡(180rpm)培养12小时,得种子菌液。
牛肉膏蛋白胨培养基配方:蛋白胨5g,酵母提取物1g,牛肉浸膏3g,蔗糖15g,水1000mL,pH 7.0,灭菌(121.3℃、1kg/cm
2.菌体大量发酵
将制备好的种子菌液按2%(v/v)的量接种至牛肉膏、蛋白胨液体培养基中(配方同种子培养基),28℃、振荡(180rpm)培养48小时,获得菌液,即为沙福芽孢杆菌(Bacillussafensis)S21菌液,可直接用于瓜类细菌性果斑病的防治。
实施例3-沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21的平板拮抗试验
1.1沙福芽孢杆菌S21对西瓜噬酸菌Acidovoraxcitrulli的拮抗:采用对峙平板法测定。将1mL西瓜噬酸菌Acidovoraxcitrulli菌液加到溶化好的约45℃的牛肉膏蛋白胨培养基中,迅速混匀后倒平板,冷却凝固后用无菌接种针点接沙福芽孢杆菌S21在平板上,重复3点,点与点的距离相隔2cm。28℃恒温培养2天,观察沙福芽孢杆菌S21周围有无抑菌圈,用十字交叉法量取抑菌圈大小,取平均值。
1.2沙福芽孢杆菌S21对荔枝霜疫霉病菌Peronophythora litchii的拮抗采用对峙平板法测定。将培养好的荔枝霜疫霉病菌用无菌打孔器打成0.5cm的菌饼,将1块菌饼置于PDA(马铃薯、葡萄糖、琼脂)平板中间,在距菌饼1.5cm的地方点接沙福芽孢杆菌S21,接4个点每个平板。28℃恒温培养6天,测量抑菌带的宽度,取4个数据的平均值。
2.拮抗作用测定结果
沙福芽孢杆菌S21对西瓜噬酸菌Acidovoraxcitrulli的拮抗:抑菌圈直径平均为16.32±0.1mm。沙福芽孢杆菌S21对荔枝霜疫霉病菌Peronophythora litchii的拮抗:抑菌带宽度平均为15±0.1mm。
实施例4-沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21的防病试验
1.哈密瓜苗准备
将哈密瓜西州蜜25号的种子用水浸泡24小时,将浸泡好的种子用双层湿纱布包裹,保湿催芽。待种子发芽后,将出芽种子播种于营养土中,每天浇水,长至5片叶备用。
2.防病试验
将大量发酵获得的S21菌液稀释至浓度为1×10
分级标准如下:
分0、1、2、3、4、5、6共7个等级,
0级:不发病;
1级:病叶上有零星病斑,病斑占叶面积的10%以下;
2极:病叶上有少量病斑,病斑占叶面积的11%~25%;
3级:病叶上病斑数量中等,病斑占叶面积的26%~50%;
4级:病叶上病斑数量较多,病斑占叶面积的51%~75%;
5级:病叶上有许多病斑,病斑占叶面积的76%~90%;
6级:病叶上有大量病斑,病斑占叶面积90%以上。
3试验结果
经统计,本发明沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)S21对哈密瓜苗的瓜类细菌性果斑病的防效为75.3%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
机译: 一株控制细菌性疾病的芽孢杆菌菌株
机译: 诊断为检测酸单胞菌亚种。瓜瓜,瓜类细菌性水果斑的病因
机译: 诊断为检测酸单胞菌亚种。瓜瓜,瓜类细菌性水果斑的病因