一种聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体的应用

摘要

本发明属于生物医学技术领域，公开了一种聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体的应用，按照水热合成法合成聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子；利用透射电镜TEM观察合成的磁纳米粒子平均粒径的大小；筛选得到诊断乳腺癌MCF‑7细胞过表达的黏蛋白1的适配体S2.2；通过荧光分光光度计对FAM‑S2.2进行荧光检测；配制细胞样品，将细胞样品加入FAM‑适配体和Fe3O4‑PEI纳米粒子混合液，进行反应，观察荧光恢复值。本发明通过观察荧光恢复值对乳腺癌MCF‑7细胞进行定量，可作为一种新型的肿瘤细胞的检测方法，尚未有此方法去检测肿瘤细胞的报道，该方法操作简单，材料试剂获得简单。

说明书

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体的应用。

背景技术

目前，磁性四氧化三铁纳米粒子(Fe

核酸适配体是通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution ofligands by exponential enrichment，SELEX)，在随机寡核苷酸文库中筛选获得的短的寡核苷酸序列(RNA或ss DNA)，核酸适配体能够折叠形成特定的三维空间结构(如G-四链体、发夹和假结等)，与靶标发生高亲和力、高特异性的结合,因此被称为“化学抗体”，与蛋白质类抗体相比，核酸适配体具有靶物质广泛、相对分子质量小、稳定性高、免疫原性低、易于化学修饰、特异性与亲和力更高等优势。

癌症是一个环境因素与遗传因素相互作用引起的细胞的异常生长的过程，极大的影响了患者的生存期与生活质量，并将成为新世纪人类的第一杀手。为绝大多数癌症患者死亡是由于癌细胞发生远处器官转移扩散造成的，及时发现转移的的肿瘤细胞对癌症的诊断治疗预后都有重大作用，而目前尚未有利用聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒去检测肿瘤细胞的报道。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术中尚未有利用聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒去检测肿瘤细胞的报道。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体的应用。

本发明是这样实现的，一种聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体在肿瘤细胞检测中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体用于检测肿瘤细胞的方法，所述聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体用于检测肿瘤细胞的方法包括：

通过水热合成法合成聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒Fe

进一步，所述聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体用于检测肿瘤细胞的方法包括以下步骤：

步骤一，按照水热合成法合成聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子；

步骤二，利用透射电镜TEM观察合成的磁纳米粒子平均粒径的大小；

步骤三，筛选得到诊断乳腺癌MCF-7细胞过表达的黏蛋白1的适配体S2.2；

步骤四，通过荧光分光光度计对FAM-S2.2进行荧光检测；

步骤五，配制细胞样品，将细胞样品加入FAM-适配体和Fe

进一步，所述步骤一中的合成聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子包括：

将称取FeCl

进一步，所述FeCl

进一步，所述步骤二中，将合成的产物送透射电镜TEM观察合成的磁纳米粒子平均粒径大小为18.24nm，大小均匀，分散性好；X射线衍射图谱XRD观察2theta的晶格间距对于Fe

进一步，所述步骤三中，通过文献筛选得到诊断乳腺癌MCF-7细胞过表达的黏蛋白1的适配体S2.2，通过公司合成5’端标记5-羧基荧光素的适配体S2.2，用缓冲液溶解，避光保存。

进一步，所述诊断乳腺癌MCF-7细胞过表达的黏蛋白1为MUC1，所述合成的5’端标记5-羧基荧光素的适配体S2.2为FAM-S2.2。

进一步，所述步骤四中，通过荧光分光光度计对FAM-S2.2进行荧光检测，Ex＝494nm，狭缝均为5nm，FAM-S2.2加Fe

进一步，所述步骤五中，选取适合浓度体积的FAM-S2.2和Fe

结合上述的技术方案和解决的技术问题，请从以下几方面分析本发明所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：

第一、针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本发明的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本发明技术方案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下：

本发明通过水热合成法合成了聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒(Fe

第二，把技术方案看做一个整体或者从产品的角度，本发明所要保护的技术方案具备的技术效果和优点，具体描述如下：

本发明通过观察荧光恢复值对乳腺癌MCF-7细胞进行定量，是一种快速简单的检测方法。目前有基于肿瘤细胞物理特性的检测方法如密度梯度离心法、声波细胞分选法等，也有基于肿瘤细胞化学特性的检测方法如：免疫磁珠法、固载抗体微通道等，但这些方法存在一定的缺陷，如实用性低、重复性差、成本高、过程复杂。因此急需发明一种重复性高、成本低、操作简便的肿瘤细胞检测方法。聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒具有良好的荧光淬灭效果，适配体具有亲和力高、成本低等优点，将聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒和适配体结合起来有望成为肿瘤细胞检测的实用性方法。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例提供的聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体用于检测肿瘤细胞的方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体的应用，下面结合附图对本发明作详细的描述。

为了使本领域技术人员充分了解本发明如何具体实现，该部分是对权利要求技术方案进行展开说明的解释说明实施例。

如图1所示，本发明实施例提供的聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子淬灭荧光适配体用于检测肿瘤细胞的方法包括以下步骤：

S101，按照水热合成法合成聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子；

S102，利用透射电镜TEM观察合成的磁纳米粒子平均粒径的大小；

S103，筛选得到诊断乳腺癌MCF-7细胞过表达的黏蛋白1的适配体S2.2；

S104，通过荧光分光光度计对FAM-S2.2进行荧光检测；

S105，配制细胞样品，将细胞样品加入FAM-适配体和Fe

本发明通过水热合成法合成了聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒(Fe

1：按照文献水热合成法合成聚乙烯亚胺包被的磁纳米粒子，首先将称取1.25gFeCl 2.4H

2：合成的产物送透射电镜(TEM)观察合成的磁纳米粒子平均粒径大小为18.24nm，大小均匀，分散性好。X射线衍射图谱(XRD)观察2theta的晶格间距对于Fe

3：通过文献筛选得到诊断乳腺癌MCF-7细胞过表达的黏蛋白1(MUC1)的适配体S2.2，通过公司合成5’端标记5-羧基荧光素的适配体S2.2(FAM-S2.2)，用缓冲液溶解，避光保存。

4：通过荧光分光光度计对FAM-S2.2进行荧光检测，Ex＝494nm，狭缝都为5nm，FAM-S2.2加Fe

5：选取适合浓度体积的FAM-S2.2和Fe

本发明通过观察荧光恢复值对乳腺癌MCF-7细胞进行定量，是一种快速简单的检测方法。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。