一种用于结直肠II期高危人群筛查的标志物及其应用

摘要

本发明属于生物标志物技术领域，公开了一种用于结直肠II期高危人群筛查的标志物及其应用，用于结直肠II期高危人群筛查的标志物为FPR。FPR为循环纤维蛋白原与前白蛋白比。本发明纤维蛋白原与前白蛋白比值预测鉴定II期高危人群价值效能显著高于临床特征参数。本发明首次公开纤维蛋白原与前白蛋白比值作为鉴别结直肠癌II期复发高危人群标志物价值。本发明解决了临床特征进行筛选患者的效率低下问题，可明显提高鉴别真正高危复发患者效率，降低真正高危人群接受化疗救治后复发和远处转移发病率，同时极大降低真正低危患者临床治疗费用以及减少不必要的辅助化疗毒副作用。

说明书

技术领域

本发明属于生物标志物技术领域，尤其涉及一种用于结直肠II期高危人群筛查的标志物及其应用。

背景技术

目前，II期结直肠癌术后部分患者易于复发或远处转移，这部分患者本发明称为II期复发高危患者。目前临床上常根据患者是否存在以下临床特征：组织学分化差(3～4级)、T4期、血管淋巴管浸润、术前肠梗阻或肠穿孔、手术标本检出淋巴结不足(少于12枚)，确定其为高危人群。高危人群术后接受辅助化疗后其复发率或远处转移率以及无疾病生存期可明显延长。

临床上除了上述临床特征之外，尚无其他有效标志物筛选II期复发高危人群。临床特征进行筛选患者的效率低下，其并不能有效筛选真正复发高危患者，最终导致真正高危人群并未接受术后化疗，导致其复发或远处转移，而术后接受辅助化疗低危患者不但未能从辅助化疗中获益，同时还要承受辅助化疗引发的毒副作用和高昂临床治疗费用。

高危人群术后接受辅助化疗后其复发率或远处转移率以及无疾病生存期可明显延长，然而临床上除了上述临床特征之外，尚无其他有效标志物筛选II期复发高危人群。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术没有能够筛选II期复发高危人群以及化疗适用人群的有效标志物；且现有利用临床特征进行筛选患者的方法效率低下。

解决以上问题及缺陷的难度为：II期高危人群精准化疗人群的鉴定是临床结直肠癌救治的难点，目前全世界都有效标志物进行分类筛选，针对此类人群都存在化疗不宜或过度现象，探寻和发现临床经济实用高效并易于推广的标志物是解决该临床问题的主要难点。

解决以上问题及缺陷的意义为：通过本发明发现一种新型炎症标志物FPR，该指标可以有效筛选II复发高危人群，同时该指标有助于寻找II期化疗适用患者，降低低危患者不必要化疗过度救治，减轻患者经济负担和降低化疗毒副作用。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于结直肠II期高危人群筛查的标志物及其应用。

本发明是这样实现的，一种用于结直肠II期高危人群筛查的标志物，所述用于结直肠II期高危人群筛查的标志物为FPR。

标志物本质是两个临床常用蛋白：血清前白蛋白和血浆纤维蛋白原两个蛋白的比值，比值截断值为16.5。

进一步，所述FPR为循环纤维蛋白原与前白蛋白比。

进一步，所述FPR计算公式如下：

FPR＝(血浆纤维蛋白原/前白蛋白)*1000。

本发明的另一目的在于提供一种所述用于结直肠II期高危人群筛查的标志物在制备用于结直肠II期高危人群筛查试剂盒中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种所述用于结直肠II期高危人群筛查的标志物在制备用于结直肠II期复发高危人群筛查试剂盒中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种所述用于结直肠II期高危人群筛查的标志物在制备用于结直肠II期高危化疗适用人群筛查试剂盒中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种所述用于结直肠II期高危人群筛查的标志物在制备用于癌症治疗方案的选择的试剂盒中的应用。

进一步，所述癌症为于结直肠II期。

进一步，所述治疗方案为辅助化疗。

本发明的另一目的在于提供一种所述用于结直肠II期高危人群筛查的标志物在制备用于结直肠II期的预后评估试剂盒中的应用。

结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：本发明填补了目前尚无筛选II期高危化疗适用人群有效标志物空白，本发明首次公开纤维蛋白原与前白蛋白比值作为鉴别结直肠癌II期复发高危人群标志物价值。

本发明纤维蛋白原与前白蛋白比值预测鉴定II期高危人群价值效能显著高于临床特征参数。

本发明解决了临床特征进行筛选患者的效率低下问题，可明显提高鉴别真正高危复发患者效率，降低真正高危人群接受化疗救治后复发和远处转移发病率，同时极大降低真正低危患者临床治疗费用以及减少不必要的辅助化疗毒副作用。

本发明纤维蛋白原与前白蛋白比值简便、经济、实用，并易于在临床特别是基层医疗机构应用。

附图说明

图1是本发明实施例提供的FPR的预后和预测疗效以及临床共同特征在识别具有临床高复发风险的II期CRC示意图；A-B：化疗(CT)(a)或非CT治疗(b)临床高危患者和临床低危患者(c)的复发率/死亡率比较；C-D：非CT-(A)、CT治疗(B)临床高危患者和临床低危患者(C)的无复发生存期(RFS)和总生存期(OS)的Kaplan-Meier曲线E-H：临床高(a)和低FPR(b)高风险患者CT或不CT和临床低风险亚组(c)的RFS和OS的Kaplan-Meier曲线；I-J：接受CT治疗的H-(a)和L-FPR(b)临床高危患者，H-FPR(c)临床低风险患者与L-(d)和H-FPR(e)非CT治疗临床高危患者的复发率/死亡率比较；K-L：FPR的瞬态ROC与临床共同特征预测3年RFS和OS。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于结直肠II期高危人群筛查的标志物及其应用，下面结合附图对本发明作详细的描述。

本发明实施例提供的用于结直肠II期高危人群筛查的标志物为FPR。

本发明实施例提供的FPR为循环纤维蛋白原与前白蛋白比。

本发明实施例提供的FPR计算公式如下：FPR＝(血浆纤维蛋白原/前白蛋白)*1000。血清前白蛋白和血浆纤维蛋白原两个蛋白的比值，比值截断值为16.5。

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。

实施例1：

本发明依据本发明研究基础，确定慢性炎症与结直肠癌研究方向。在本发明体系中，本发明采用前瞻性和回顾性以及多中心的临床和应用基础研究，发现循环纤维蛋白原与前白蛋白比(FPR)是预测结直肠癌(CRC)预后的有效指标，但该指标是否可作为筛选II期高危人群化疗适用个体的有效标志物尚不知晓。

在本发明中，本发明纳入II期于2013年1月至2018年10月南昌大学第二附属医院首诊CRC患者604例，获取上述患者以下临床和病理特征资料：组织学分化差(3～4级)、T4期、血管淋巴管浸润、术前肠梗阻或肠穿孔、手术标本检出淋巴结不足(少于12枚)。根据上述临床特征，本发明将上述病人分类为临床高危组和临床低危组。收集上述患者术前外周血血清和枸橼酸钠抗凝的血浆样本各5mL，3000转离心后获取血清和血浆样本，采用免疫散射法和Clauss凝固法检测血清前白蛋白和血浆纤维蛋白原，通过FPR＝(血浆纤维蛋白原/前白蛋白)*1000公式，计算各患者FPR比值结果。

对上述604例患者进行为期3年的有效随访工作，前两年每3个月随访一次，第三年每半年随访一次，获得纳入患者三年复发率和死亡率以及无复发生存期和总生存期。采用时间依赖ROC曲线对标无复发生存期计算FPR的最佳cut-off值。按照FPR的cut-off值，将上述纳入患者分类为FPR高危组和FPR低危组。采用受适者操作特征曲线(ROC)、Kaplan-Meier曲线、COX回归分析和时间依赖性ROC分析探讨FPR和临床特征分类II期高低危患者的应用价值。

按照临床特征分类，本发明将上述患者分类为临床高危(572例)和临床低危(32例)患者。在临床高危(21.79％vs.15.73％,p＝0.211)和低危(21.79％vs.12.50％,p＝0.512)患者中，术后未接受化疗患者的复发率都明显高于接受化疗患者(Figure1A)，但临床高低危化疗个体和未化疗个体复发率无差异。在临床高危化疗人群和未化疗人群以及临床低危患者的死亡率也无显著差异(15.38％vs.8.75％vs.5.88％,p＝0.234)(Figure1B)。进一步分析发现临床高低危人群中，化疗人群和未化疗人群个体的无复发生存期和总生存期都无差异(Figure 1C-D)。

采用时间依赖ROC曲线对标无复发生存期计算FPR的最佳cut-off值。本人群FPR最佳cut-off值为16.5，为此将上述纳入患者分类为FPR(≥16.5)高危组和FPR(<16.5)低危组。在临床高危患者中，高FPR化疗患者的RFS(plog-rank＝0.006)和OS(plog-rank＝0.001)显著差于L-FPR低危组患者，高危FPR未化疗患者的RFS(plog-rank＝0.015)和OS(plog-rank＝0.002)显著差于L-FPR低危组患者(Figure 4E-H)，但化疗或非化疗的临床低危患者和低FPR临床高危患者的RFS和OS都无差异(Figure 4E-H)。

临床低危患者和高FPR临床高危非化疗患者的复发率都最高达33.33％，但低FPR临床高危化疗患者的复发率(10.53％)与低FPR未化疗患者的复发率(10.26％)基本一致(Figure 4I).在临床高危组中，高FPR接受化疗的患者复发率比非化疗患者更低(22.61％vs.33.33％,p<0.001),但高于低FPR化疗患者(22.61％vs.10.53％,p<0.001)(Figure4I)。低FPR临床高危患者接受化疗治疗后的死亡率最低(3.97％)，而高FPR临床低危患者(28.57％)和接受化疗治疗的高FPR临床高危患者的复发率(30.77％)最高(Figure 4J)。接受化疗治疗的高FPR临床高危患者的死亡率也明显低于高FPR临床高危非化疗救治患者(15.18％vs.30.77％,p<0.001)和高FPR临床低危患者(15.18％vs.28.57％,p<0.001)(Figure4J)。

临床特征参数预测上述患者三年无复发生存期和总生存期的时间依赖ROC曲线下面积分别为0.511和0.501，而FPR预测上述患者的无复发生存期和总生存期的曲线下面积是0.637和0.719，上述两曲线面积对比发现FPR的预测效能明显高于临床特征参数。为此，FPR区分临床高低危患者的效能明显高于临床特征参数(Figure 4K-L)。

图1中FPR的预后和预测疗效以及临床共同特征在识别具有临床高复发风险的II期CRC方面。A-B：化疗(CT)(a)或非CT治疗(b)临床高危患者和临床低危患者(c)的复发率/死亡率比较；C-D：非CT-(A)、CT治疗(B)临床高危患者和临床低危患者(C)的无复发生存期(RFS)和总生存期(OS)的Kaplan-Meier曲线E-H：临床高(a)和低FPR(b)高风险患者CT或不CT和临床低风险亚组(c)的RFS和OS的Kaplan-Meier曲线；I-J：接受CT治疗的H-(a)和L-FPR(b)临床高危患者，H-FPR(c)临床低风险患者与L-(d)和H-FPR(e)非CT治疗临床高危患者的复发率/死亡率比较；K-L：FPR的瞬态ROC与临床共同特征预测3年RFS和OS；**：p<0.01；ns：无意义。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。