法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2022-05-20
公开
发明专利申请公布
技术领域
本发明属于动物医学和生殖医学技术领域，具体涉及促进雌性哺乳动物繁殖性能的产品和方法。
背景技术
在畜牧养殖业中，动物的繁殖性能直接关系着生产和养殖效益，动物在繁殖过程中出现的发情症状不明显、发情排卵不规律、排卵延迟等问题会导致动物受胎率降低、生育间隔延长、繁殖率下降，影响了规模化养殖的生产管理和经济效益。在母畜达到育龄或者在母畜分娩后一定时间进行药物处理，促进母畜繁殖性能发育，进行适时配种，是提高繁殖率的重要措施。
同期发情和定时输精技术是现代畜牧生产中重要的繁殖调控技术之一，通过调控母畜体内生殖激素的分泌情况调节母畜体内的卵泡发育，从而在某一固定时间内进行批次化的定时输精，能够降低对母畜的漏配率、提高母畜繁殖性能。其有利于规模化养殖场的批次生产，可以减少人工劳力、减少精液成本及高效使用优秀公畜的精液、减少母畜的非生产天数等。
国内外现行母畜定时输精程序普遍采用：饲喂烯丙孕素/同步断奶对母猪群体进行发情周期同步化，间隔40/24h后注射1000IU孕马血清促性腺激素(Pregnant Mare SerumGonadotropin，PMSG)促进卵泡同步发育，间隔80/72h后肌肉注射促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone,GnRH)及其类似物进行同步排卵，间隔24、16h后分别进行定时输精。但是，由于PMSG的来源受限，其品质受母马妊娠时间、体型大小、胎次、运动量、体况、遗传等多种因素的影响，导致批次之间的PMSG质量不稳定。另外，PMSG属于外源性蛋白，长期使用容易导致机体产生抗体，从而使机体对PMSG的应答能力降低，影响PMSG促进卵泡发育的效果。目前国内许可的促进同步排卵的GnRH分子结构不稳定，使用后同步排卵效果波动比较大。此外，在常规定时输精程序中，母畜5天内需要进行两次肌肉注射相关激素，该操作对母畜的应激较大，容易引起母畜机体生殖激素分泌紊乱，从而影响母畜卵泡发育、妊娠甚至导致卵泡囊肿的严重后果。因此，在母畜发情周期同步化处理后，通过减少肌肉注射次数，从而降低母畜应激，提高母畜福利，同时保证母畜断奶配种效果，是当前兽药企业积极开发探索的新方向。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种利用可以体外合成的、质量稳定、使用程序简化的激素有效促进雌性哺乳动物发情、提高雌性哺乳动物繁殖性能的方法。
影响雌性哺乳动物繁殖性能的激素种类繁多，不同激素发挥作用的时间和机制不同，本发明在对多种激素的深入研究和实验中发现，使用亲吻促动素(Kisspeptin，Kp)能够促进母畜卵泡发育，促进母畜发情和受胎，提高母畜繁殖性能。亲吻促动素(Kisspeptin，Kp)是KISS1基因合成的一种前体激素，研究表明Kp是一种有效的血管收缩剂和血管生成抑制剂，也可用于抑制肿瘤转移、诱导成骨细胞分化等功能，Kp/GPR54蛋白表达和调控系统也能够影响调节机体发育繁殖的激素分泌。
本发明首先提供亲吻促动素(Kisspeptin，Kp)在促进雌性哺乳动物卵泡发育中的应用。
本发明还提供Kp在促进雌性哺乳动物发情中的应用。
本发明还提供Kp在促进雌性哺乳动物同期发情和定时输精的应用。
本发明还提供Kp在制备用于促进雌性哺乳动物发情的试剂中的应用。
进一步，本发明提供一种促进雌性哺乳动物发情的方法，其特征在于，对所述雌性哺乳动物施用亲吻促动素(Kisspeptin，Kp)，所述Kp的剂量可以是10-1500μg，或200-800μg，例如可以是10μg、50μg、100μg、200μg、300μg、400μg、500μg、600μg、800μg、1000μg、1200μg、1500μg。
所述Kp的剂量优选为500μg。
优选地，在所述雌性哺乳动物发情周期开始24-96h施用所述Kp，例如可以是24h、36h、48h、60h、72h、84h、96h。
优选地，所述Kp的剂量为一次性施用200-800μg。
所述施用包括通过肌肉注射、静脉注射或黏膜给药等常规方式施用。
在雌性哺乳动物的发情周期早期即小卵泡发育时施用Kp。对于已分娩的雌性哺乳动物，所述发情周期自所述雌性哺乳动物断奶起算。对于不清楚雌性动物发情周期的情况，可以采用激素对发情周期进行调控，例如饲喂烯丙孕素诱发发情周期，自停喂激素时起算所述发情周期。
用于促进雌性哺乳动物发情时，Kp也可以与其他能够促进雌性哺乳动物发情的药物联用。优选地，对所述雌性哺乳动物施用Kp与PMSG或GnRH。
进一步，本发明提供一种促进雌性哺乳动物同期发情和定时输精的方法，包括以下步骤：
S1：采用上述方法促进雌性哺乳动物同期发情；
S2：间隔16-24h后对所述雌性哺乳动物进行至少一次人工输精。
优选地，在所述步骤S1前还包括步骤S0：使已分娩雌性哺乳动物同时断奶，或者对初胎雌性哺乳动物饲喂孕酮类似物；在断奶或者停喂孕酮类似物24-96h后再进行所述S1的步骤。
所述孕酮类似物包括烯丙孕素、甲孕酮、氯地孕酮等常规孕酮类似物。
在本发明中，所述雌性哺乳动物可以是人或者家畜，所述家畜包括但不限于猪、牛、羊或马。对于不同物种，其使用剂量和作用时间应根据物种自身按需调整。
本发明一种实施方式是，上述雌性哺乳动物同期发情和定时输精的方法中，仅使用Kp作为卵泡发育促进剂和促性腺激素释放剂。
本发明还提供Kp在促进雌性哺乳动物发情中的应用，所述应用是将Kp作为卵泡发育促进剂和促性腺激素释放剂用于哺乳动物发情。在本发明的一个实施例中，其用于促进母猪的发情，其使用量为10-1000μg，优选为500μg每头。
本发明还提供Kp在制备促进雌性哺乳动物发情制剂中的应用，所述应用是将Kp作为卵泡发育促进剂和促性腺激素释放剂。
本发明通过在合适的时间以合适的剂量施用Kp，能够有效促进雌性哺乳动物的卵泡发育，Kp结构和质量稳定，利于品生产、存储和运输。在定时输精技术中单次施用Kp即可促进母畜卵泡发育，促使母畜同步排卵，有效提高母畜发情率和受胎率，降低隐性发情母畜的漏配率。本发明方法相对于传统技术减少了对母畜注射激素的次数和数量，有效降低母畜应激，改善了母畜福利。
附图说明
图1为实施例1中各处理组母猪在断奶当天、断奶后第1天、第2天、第3天和第4天的卵泡直径。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到。
实施例1
选取健康、产仔性能相近的大白×长白二元杂交断奶母猪，在母猪断奶后24h，分别注射生理盐水、0.5mgKp、1mg Kp和1000IU PMSG，每组处理3头母猪。在断奶当天、断奶后第1天、第2天、第3天和第4天，分别采用B超腹部超声检测各处理组母猪的卵泡生长发育情况，检测结果如图1所示，母猪经Kp处理后能够促进卵泡生长。
实施例2
选取健康、产仔性能相近的大白×长白二元杂交断奶母猪，断奶当天记为“第0天”，断奶时间为16:00。
实验组母猪随机分为Kp10组、Kp500组、Kp1000组，断奶后24h、48h、72h、96h，分别肌肉注射10μg、500μg、1000μg Kp(Genscript，USA)，并于间隔16、24h后选取符合配种要求的精液进行人工输精，输精体积为80ml，有效精子数约30亿。
对照组母猪断奶后24h(n＝102头)肌肉注射1000IU PMSG(商品名：血促性素，宁波三生生物科技有限公司)，间隔72h肌肉注射GnRH 100μg，并于间隔16h、24h分别进行人工输精。GnRH组母猪断奶后96h(n＝34头)，肌肉注射GnRH 100μg，并于间隔16h、24h分别进行人工输精。
断奶后第3-7天，驱赶性欲旺盛、唾液丰富的成年公猪对母猪进行发情鉴定，并按照试验方案进行配种。配种后24天，采用B超腹部超声对配种母猪进行妊娠检测。
对母猪繁殖性能进行统计分析，结果表明在断奶后48h，单独采用10或500μg Kp可以达到96％以上静立发情率，500μg Kp组母猪参繁妊娠率达到92％以上。
不同浓度KP在断奶后不同时间处理对母猪发情率的影响
同列肩标字母不同表示差异显著。
不同浓度KP在断奶后不同时间处理对母猪妊娠率的影响
同列肩标字母不同表示差异显著。
实施例3
选取健康、产仔性能相近的大白×长白二元杂交断奶母猪，断奶当天记为“第0天”，断奶时间为16:00。
实验组母猪随机分为Kp10组(n＝47头)、Kp500组(n＝50头)、Kp1000组(n＝50头)，断奶后24h，Kp10组、Kp500组、Kp1000组母猪分别肌肉注射10、500、1000μg Kp(Genscript，USA)，间隔72h三组母猪统一肌肉注射100μg GnRH(商品名：戈那瑞林，宁波三生生物科技有限公司)，并于间隔16、24h后选取符合配种要求的精液进行人工输精，输精体积为80ml，有效精子数约30亿。
对照组母猪断奶后24h(n＝102头)肌肉注射1000IU PMSG(商品名：血促性素，宁波三生生物科技有限公司)，间隔72h肌肉注射GnRH 100μg，并于间隔16h、24h分别进行人工输精。GnRH组母猪断奶后96h(n＝34头)，肌肉注射GnRH 100μg，并于间隔16h、24h分别进行人工输精。
断奶后第3-7天，驱赶性欲旺盛、唾液丰富的成年公猪对母猪进行发情鉴定，并按照试验方案进行配种。配种后24天，采用B超腹部超声对配种母猪进行妊娠检测。
对母猪繁殖性能进行统计分析，结果如表1所示，Kp500+GnRH组母猪比PMSG+GnRH组母猪妊娠率显著提高11.69个百分点，比GnRH组母猪提高28.35个百分点。
表1不同激素处理的母猪的繁殖性能
同列肩标字母不同表示差异显著。
实施例4
选取健康、产仔性能相近的大白×长白二元杂交断奶母猪，断奶当天记为“第0天”，断奶时间为16:00。
实验组母猪共132头，断奶后24h分别肌肉注射1000IU PMSG，间隔72h后随机分为Kp10组(n＝32)、Kp500组(n＝50)、Kp1000组(n＝50)，三组母猪分别肌肉注射Kp10μg、500μg、1000μg，并于间隔16、24h后进行人工输精。
对照组(n＝98)母猪断奶24h后肌肉注射1000IU PMSG，间隔72h肌肉注射GnRH 100μg，间隔16h、24h分别进行人工输精。PMSG组(n＝26头)母猪断奶24h后肌肉注射PMSG1000IU，并于间隔88h、96h分别进行人工输精。
表2不同激素处理的母猪的繁殖性能
同列肩标字母不同表示差异显著；
母猪繁殖性能的检测方法同实施例1，对母猪繁殖性能进行统计分析，结果如表2所示，在经过PMSG对母猪进行同步发育的基础上，PMSG+Kp组母猪比PMSG组母猪妊娠率显著提高22.6个百分点，比PMSG+GnRH组母猪提高5.35个百分点。
