治疗线粒体功能障碍的方法

摘要

本公开涉及治疗或预防受试者的线粒体功能障碍或线粒体疾病的方法，所述方法包括施用普罗布考或其药学上可接受的盐。本公开还涉及在所述治疗或预防之前和与其相关地诊断受试者的遗传性线粒体疾病的方法。本公开还涉及使用复合测量结果来评估和管理患有线粒体功能障碍或线粒体疾病的受试者的方法。

说明书

技术领域

本文公开了治疗或预防受试者的线粒体功能障碍或线粒体疾病的方法，所述方法包括施用普罗布考(probucol)或其药学上可接受的盐。本文还公开了在所述治疗或预防之前和与其相关地诊断受试者的遗传性线粒体疾病的方法。本文还公开了管理患有线粒体功能障碍或线粒体疾病的患者并通过使用组合来自两个或更多个子仪器的结果的复合测量结果来评估患者对治疗性干预的反应的方法。本文还公开了计算所述复合测量结果的方法。本文进一步公开了用于诊断和治疗患有线粒体功能障碍或线粒体疾病的人类受试者并使用复合测量结果评估患者的反应的集成方法。

背景技术

原发性线粒体疾病包括一组削弱产生细胞能量能力的异质遗传条件。Kremer等人,“线粒体疾病遗传学(Mitochondrial Disease Genetics)”,《线粒体病症的诊断和管理(Diagnosis and Management of Mitochondrial Disorders)》；Mancuso和Klopstock(编辑)；施普林格出版公司(Springer)2019；第41-62页。所述疾病至少影响1/4,300的个体，所述个体具有高度可变但经常是渐进性多系统性表现阵列。Gorman等人,《神经病学年鉴(Ann.Neurol.)》2015；77:753-9。更严重的表现可能会导致显著的发病率和死亡率。对受影响儿童的两项研究发现，在其儿童时期的死亡率分别为35％和36％。Scaglia等人,《儿科学(Pediatrics.)》2004；114:925-31.Verity等人,《发育医学和儿童神经病学(Dev.Med.Child Neurol.)》2010；52:434-40。在对2007年到2011年加利福尼亚州所有非军事住院治疗的纵向研究中，在五年的随访期间，因线粒体疾病至少住院一次的所有参与者(9％的成人，10％的儿童)中的9.9％的参与者在住院期间死亡。McCormack等人,《分子遗传学和新陈代谢(Mol.Genet.Metab.)》2017；121(2):119-126。对于潜在的疾病过程，没有经证明的治疗选项。Pfeffer等人,《自然综述：神经病学(Nat.Rev.Neurol.)》2013；9:474-81。

临床前研究已经表明，普罗布考可能具有作为用于调查患有原发性线粒体疾病的个体的治疗剂的潜力，但所述化合物先前尚未用于线粒体疾病的治疗。Zhang等人,《分子遗传学和新陈代谢》2010；99(3):309-18。Falk等人,《EMBO分子医学(EMBO Mol.Med.)》2011；3(7):410-27。Peng等人,《人类分子遗传学(Hum.Mol.Genet.)》2015；24(17):4829-47。Byrnes等人,《国际神经化学(Neurochem.Int.)》2018；117:23-34。普罗布考在治疗高脂血症方面具有已知的安全特性和功效特性，但其在患有线粒体疾病的患者中的安全性和功效尚未确定。Yamashita等人,《当代血脂学意见(Curr.Opin.Lipidol.)》2015；26(4):304-16。目前，治疗患有线粒体疾病的患者的医疗需求明显未得到满足。Gorman等人,《自然综述：疾病导论(Nat.Rev.Dis.Prim.)》2016；2:16080。所公开方法涉及此重要需求和其它重要需求。

对普罗布考在人体内的已报告的临床研究中的大多数临床研究采用口服施用片剂调配物以进行脂质管理和相关的心血管应用。Yamashita等人,《当代血脂学意见》2015；26(4):304-16。已经报道了普罗布考的液体调配物在人体内用于降脂的用途。国际申请第WO9210996号。普罗布考还用于涂覆支架以防止再狭窄。Kim等人,《导管插入术和心血管介入(Catheterization and Cardiovascular Interventions)》2002；57(4):424-8。

线粒体疾病通常影响多个器官。例如，常见的是胃肠道(GI)受累和营养缺乏。据报道，29％(Debray等人,《儿科学》2007；119(4):722-33)到48％(Skladal等人,《临床儿科学(Clin.Pediatr.)》2003；42(8):703-10)的患有线粒体疾病的小儿患者患有GI受累。主要的GI症状可以包含持续呕吐、发育停滞和咽下困难。吞咽困难常常会抑制足够的口服食物摄入并且可能会导致吸入性感染或胸部感染。Kisler等人,《发育医学与儿童神经病学(Dev.Med.Child.Neurol.)》2010；52(5):422-33。48％的患有线粒体疾病的成年患者经历吞咽问题。Read等人,《国际语言与沟通障碍杂志(Int.J.Lan.Commun.Disord.)》2012；47:106-11。

在一些患有此类神经症状的患者中指示肠内管饲。Braegger等人,《儿科胃肠病学和营养杂志(J Pediatr.Gastroenterol.Nutr.)》2010年7月；51(1):110-22。鼻胃管饲在至多几个月内是可行的，并且如果喂养问题持续存在，则胃造口术是适当的选项。研究表明，胃造口术在临床进展和生活质量方面对患有神经发育疾病的小儿患者有益。Kisler等人,《发育医学与儿童神经病学》2010；52(5):422-33。在一项对小儿线粒体疾病患者的研究中，患者中的大多数有GI症状，需要肠内管饲，其中口咽性咽下困难是最常见的指征，这在81％的患者中很明显。Choi和Lee,《科学报告(Scientific Reports)》2017；7:16909。

线粒体疾病的严重临床后果常常会抑制或阻止口服片剂的施用。因此，普罗布考的所公开的液体调配物将具有显著的医疗用途并且将增加可以通过鼻胃管、胃造口术管或空肠造口术管施用而用普罗布考进行治疗的患有线粒体疾病的患者的数量。此外，普罗布考的液体调配物能够向包含新生儿的小儿患者更准确且方便地进行普罗布考给药，所述小儿患者的体重范围很广，这为剂量计算和施用方法两者提出了挑战。

眼睛是线粒体疾病中最常受影响的器官之一，其中破坏性影响是可能可变地涉及眼眼外肌、提肌、晶状体、视网膜或视神经。Haas等人,《儿科学》2007；120(6):1326-33。许多原发性线粒体疾病具有眼科受累。在线粒体病症中看到的四种最常见的神经眼科异常是：(i)双侧视神经病变，如莱伯氏遗传性视神经病变(Leber's Hereditary OpticNeuropathy，LHON)；Fraser等人,《眼科调查(Surv.Ophthalmol.)》2010；55(4):299-334中；(ii)眼肌麻痹和上睑下垂，如慢性进行性眼外肌麻痹(CPEO)，包含卡恩斯-塞尔综合征(Kearns-Sayre Syndrome，KSS)；Gronlund等人,《英国眼科学报(Br.J.Ophthalmol.)》2010；94(1):121-127中；(iii)色素性视网膜病，如线粒体脑病、乳酸酸中毒和中风样发作(MELAS)、肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(MERRF)、神经源性虚弱、共济失调和色素性视网膜炎(NARP)、莱氏综合征(Leigh Syndrome)、CPEO和KSS；Gronlund等人,《英国眼科学报》2010；94(1):121-127中；以及(iv)后视交叉视力丧失(retro-chiasmal visual loss)，如MELAS.CPEO——与上睑下垂相关的损害眼外肌运动的复杂病症——是线粒体肌肉疾病的最常见的眼部表现；Schoser和Pongratz,《斜视(Strabismus.)》2006；14(2):107-13中。LHON的特征在于在数天到数月的期间内双眼连续出现急性且无痛性中心视力丧失。

传统上不被认为具有明显线粒体起源的某些眼科疾病愈加被认为部分是由线粒体功能受损、氧化应激增加和细胞凋亡增加引起的。Schrier和Falk,《当代眼科学意见(Curr.Opin.Ophthalmol.)》2011；22(5):325-331。作为高能量需求器官，眼睛特别容易受线粒体损伤后果的影响。Jarrett等人,《眼科研究(Ophthalmic Res.)》2010；44(3):179-90。涉及线粒体功能障碍的眼科病症包含糖尿病视网膜病和年龄相关的黄斑变性(AMD)。Mohammad等人,《实验室研究(Lab.Invest.)》2010；90(9):1365-1372。Kenney等人,《眼科研究与视觉科学(Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.)》2010；51(8):4289-4297。

针对眼科病状局部施用普罗布考比全身施用具有一定的优势。滴眼剂可以导致直接向眼睛递送更大的局部剂量并且可以减轻关于普罗布考跨血脑屏障转运的全身施用的挑战。普罗布考相对不溶于水并且已知优先地被高脂肪组织吸收，这种性质可以增强眼睛的临床相关成分的吸收。

普罗布考相对不溶于水。Hendler等人描述了普罗布考的水溶性磷酸酯，以便产生不同类型的调配物。国际申请第WO9924400号。这些权利要求提出使用此水溶性调配物治疗氧化损伤。氧化应激是由许多包含某些线粒体疾病的生理条件引起的，但这项工作没有描述普罗布考的水溶性磷酸酯用于治疗任何潜在的线粒体疾病的用途。

Yoshitaka提出了一种新颖抗糖尿病治疗和含有普罗布考或其盐或溶剂化物的预防性药物。日本专利申请第JP2000319441A号。本发明提出普罗布考通过保护胰腺β细胞免受氧化应激来预防糖尿病的用途。虽然一些患有线粒体疾病的患者经历糖尿病，但这种情况只是线粒体功能障碍的众多表现之一。在这项工作中，普罗布考被提出仅靶向胰腺β细胞，并且因此没有被提出作为多器官或广谱治疗剂。普罗布考作为糖尿病的预防剂呈现，而不是作为用于潜在的线粒体疾病或其其它症状的治疗呈现。

描述了用于调节细胞色素c从线粒体中释放以抑制细胞死亡的方法和化合物组合，作为用于预防和治疗患者在其它方面没有治疗指征的病症的手段(即不包含尤其患有症状性线粒体疾病的患者)。国际申请第WO 2007114948号。声称在细胞死亡相关病症的治疗中抑制细胞色素c释放的众多化合物之一是普罗布考。一些细胞死亡相关病症导致线粒体功能障碍，但是，在40种线粒体疾病分类中(www.umdf.org/types)，只有四种被归类为具有线粒体细胞色素c氧化酶缺乏症：良性婴儿线粒体型、法裔加拿大人型、婴儿线粒体肌病型和莱氏综合征。因此，细胞死亡和细胞色素c氧化酶缺乏症都未限定潜在的线粒体疾病。

描述了一种大分子结构，所述大分子结构包括能够形成水溶性胶束以将治疗剂递送到线粒体的两个支链型肽链。国际申请第WO 2019055988号。

已经描述了用于增加黑色化儿茶酚胺神经元的细胞呼吸的组合物和方法，并且描述了用于减轻症状或停止以黑质纹状体变性为特征的帕金森氏病和相关病状的症状的出现和/或进展的方法。美国专利申请第20020198231号。

(1-苯基-2-杂芳基)乙基胍化合物和其盐被描述为线粒体F1F0 ATP水解酶活性的抑制剂。美国专利6,916,813。

已经描述了一种使用多胺治疗由获得性线粒体损伤和遗传性线粒体缺陷引起的退行性疾病的方法。美国专利申请第20030013772号。

普罗布考被描述为要与线粒体激活剂(包含吡咯并喹啉醌和辅酶Q)结合使用以预防或治疗由线粒体功能障碍引起的疾病的许多潜在抗氧化剂之一。美国专利申请第20070259908号。

发明内容

本发明涉及一种治疗患有由线粒体功能障碍引起的疾病的人类受试者的方法，所述方法包括施用有效维持或改善线粒体功能的量的普罗布考。在一些实施例中，对所述线粒体功能障碍的诊断整体或部分地基于所述受试者的DNA中的至少一种突变或变体的存在。本发明还涉及一种治疗患有由线粒体功能障碍引起的疾病的人类受试者的方法，所述方法包括：(a)从所述人类受试者获得生物样品，(b)在来自所述样品的DNA中检测与线粒体功能障碍相关的至少一种突变或变体的存在，以及(c)向具有与线粒体功能障碍相关的所述DNA突变或变体的所述人类受试者施用有效维持或改善线粒体功能的量的普罗布考或其药学上可接受的盐。

在一些实施例中，所述人类受试者患有选自由以下组成的组的线粒体疾病：常染色体显性视神经萎缩(ADOA)；β-氧化缺陷；肉碱缺乏症；肉碱-酰基-肉碱缺乏症；慢性进行性眼外肌麻痹综合征(CPEO)；辅酶Q10缺乏症；复合物I缺乏症(NADH脱氢酶缺乏症)；复合物II缺乏症(琥珀酸脱氢酶缺乏症)；复合物III缺乏症(泛醌-细胞色素c氧化还原酶缺乏症)；复合物IV缺乏症(细胞色素c氧化酶缺乏症或COX缺乏症)；复合物V缺乏症(ATP合酶缺乏症)；多呼吸链复合物缺乏症；肉碱棕榈酰转移酶(CPT)I缺乏症；CPT II缺乏症；糖尿病和耳聋(DAD)；肌酸缺乏综合征；弗里德赖希氏共济失调(Friedreich's ataxia，FA)；卡恩斯-塞尔综合征(KSS)；乳酸酸中毒；莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)；莱氏综合征(莱氏病(Leighdisease))；致死性婴儿心肌病(LIC或巴氏综合征(Barth Syndrome))；脑白质营养不良；伴脑干和脊髓受累以及乳酸升高的脑白质病(LBSL)；长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(LCAD)；长链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)；拉夫特病(Luft disease)；中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCAD)；线粒体细胞病；线粒体DNA耗竭；一个或多个线粒体DNA缺失；线粒体脑病；线粒体肌病(MM)；线粒体肌病、脑肌病、乳酸酸中毒、中风样症状(MELAS)；线粒体烯酰辅酶A还原酶蛋白相关的神经退行性病变(MEPAN)；线粒体神经胃肠道脑肌病(MNGIE)；线粒体隐性共济失调综合征(MIRAS)；多酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MAD或戊二酸血症II型)；肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(MERRF)；神经病变、共济失调和色素性视网膜炎(NARP)；皮尔逊综合征(Pearson syndrome)；POLG突变；进行性婴儿灰白质萎缩症(progressive infantilepoliodystrophy)(阿尔珀氏病(Alper's disease))；上睑下垂；丙酮酸羧化酶缺乏症(PCD)；丙酮酸脱氢酶复合物缺乏症(PDCD或PDH)；短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(SCAD)；短链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(SCHAD)；以及极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCAD)。

在一些实施例中，所述至少一种突变或变体位于选自由以下组成的组的线粒体DNA编码的基因中：MT-ATP6、MT-ATP8、MT-CO1、MT-CO2、MT-CO3、MT-CYB、MT-ND1、MT-ND2、MT-ND3、MT-ND4、MT-ND4L、MT-ND5、MT-ND6、MT-RNR1、MT-RNR2、MT-TA、MT-TC、MT-TE、MT-TF、MT-TH、MT-TI、MT-TK、MT-TL1、MT-TL2、MT-TM、MT-TN、MT-TQ、MT-TS1、MT-TS2、MT-TV和MT-TW。

在一些实施例中，所述至少一种突变或变体位于选自由以下组成的组的核DNA编码的基因中：AARS2、ABCC8、ACAD9、ACADM、ACADS、ACADVL、ACAT1、ACO2、ADCK3、ADRB2、ADRB3、AFG3L2、AGK、AGRP、AIFM1、AK2、AKT2、ALDH2、AMT、APOPT1、ATP5A1、ATP5E、ATP5F1A、ATP5F1D、ATP5F1E、ATPAF2、AUH、BCS1L、BOLA3、C10orf2、C12orf65、C19orf12、C1QBP、CAPN10、CARS2、CARTPT、CDH23、CDKAL1、CHCHD10、CHKB、CISD2、CLRN1、COA5、COA7、COQ2、COQ4、COQ6、COQ7、COQ8A、COQ9、COX10、COX14、COX15、COX20、COX6B1、COX8A、CPS1、CPT1A、CPT2、CYC1、DARS2、DFNB31、DGUOK、DLAT、DNA2、DNAJC19、DNM1L、EARS2、ECHS1、ELAC2、ENPP1、ETFA、ETFB、ETFDH、ETHE1、FARS2、FASTKD2、FBXL4、FOXRED1、FXN、GATM、GCGR、GCK、GCSH、GFER、GFM1、GHRL、GJB2、GJB3、GJB6、GLDC、GPD2、GPR98、GTPBP3、HADH、HADHA、HADHB、HARS2、HMGA1、HMGCS2、HNF1A、HNF1B、HNF4A、HSD17B10、HSPD1、IBA57、IDH2、IGF2BP2、IL6、INSR、IRS1、IRS2、ISCA1、ISCA2、ISCU、KANK1、KCNJ11、LARS2、LEPR、LIAS、LIPC、LRPPRC、LYRM4、LYRM7、MAPK8IP1、MARS2、MC4R、MFF、MFN2、MGME1、MIPEP、MPC1、MPV17、MRAP2、MRPL3、MRPL44、MRPS16、MRPS2、MRPS22、MRPS34、MRPS7、MSTO1、MTFMT、MTO1、MTPAP、MYO7A、NARS2、NDUFA1、NDUFA10、NDUFA11、NDUFA12、NDUFA13、NDUFA2、NDUFA6、NDUFA9、NDUFAF1、NDUFAF2、NDUFAF3、NDUFAF4、NDUFAF5、NDUFAF6、NDUFB11、NDUFB3、NDUFB8、NDUFB9、NDUFS1、NDUFS2、NDUFS3、NDUFS4、NDUFS6、NDUFS7、NDUFS8、NDUFV1、NDUFV2、NEUROD1、NF2、NFU1、NR0B2、NUBPL、NUP62、OPA1、OPA3、PAX4、PC、PCDH15、PCK2、PDHA1、PDHB、PDP1、PDSS1、PDSS2、PDX1、PET100、PMPCB、PNPLA8、PNPT1、POLG、POLG2、POMC、PPARG、PPARGC1B、PPP1R3A、PUS1、PYY、RARS2、RMND1、RNASEH1、RRM2B、SCO1、SCO2、SDC3、SDHA、SDHAF1、SDHD、SERAC1、SFXN4、SIM1、SLC22A5、SLC25A1、SLC25A12、SLC25A13、SLC25A15、SLC25A19、SLC25A20、SLC25A22、SLC25A26、SLC25A3、SLC25A4、SLC2A2、SLC2A4、SLC30A8、SPG7、SUCLA2、SUCLG1、SURF1、TACO1、TARS2、TAZ、TDF7L2、TFAM、TIMM8A、TIMMDC1、TK2、TMEM126B、TMEM70、TOP3A、TRIT1、TRMT10C、TRMT5、TRMU、TRNT1、TSFM、TTC19、TUFM、TWNK、TXN2、TYMP、UCP1、UCP3、UQCC2、UQCC3、UQCRB、UQCRC2、UQCRQ、USH1C、USH1G、USH2A、VARS2、WARS2、WFS1和YARS2。

在一些实施例中，所述至少一种突变或变体位于选自由以下组成的组的核DNA编码的基因中：ABCB7、ACADSB、AKAP10、ALAS2、ALDH4A1、ALDH6A1、AMACR、APTX、ARMS2、BAX、BCAT2、BCKDHA、BCKDHB、BCL2、C12orf62、C20orf7、C8orf38、COX4I2、CRAT、CYB5R3、CYCS、CYP11A1、CYP11B1、CYP11B2、CYP24A1、CYP27A1、CYP27B1、D2HGDH、DBT、DECR1、DHODH、DIABLO、DLD、DMGDH、FH、GDAP1、GK、GLRX5、GLUD1、HCCS、HIBCH、HK1、HLCS、HMGCL、HOGA1、HTRA2、IDH3B、IVD、KARS、KIF1B、L2HGDH、LRRK2、MAOA、MCCC1、MCCC2、MCEE、ME2、MLYCD、MMAA、MMAB、MMADHC、MUT、NAGS、NGLY1、OAT、OGDH、OTC、OXCT1、PANK2、PARK2、PARK7、PCCA、PCCB、PDHX、PINK1、PNKD、PPOX、PYCR1、REEP1、RMRP、SACS、SARDH、SARS2、SDHAF2、SDHB、SDHC、SOD2、SPG20、STAR、TMEM126、UCP2、USMG5、WWOX和XPNPEP3。

在一些实施例中，所述疾病是肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(MERRF)，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：MT-ND5、MT-TF、MT-TH、MT-TS1、MT-TS2、MT-TL1和MT-TK。

在一些实施例中，所述疾病是线粒体脑病、乳酸酸中毒和中风样发作综合征(MELAS)，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：MT-ND1、MT-ND4、MT-ND5、MT-ND6、MT-TC、MT-TF、MT-TH、MT-TQ、MT-TS1、MT-TS2、MT-TL1和MT-TK。在一些实施例中，所述疾病是非综合征性感觉神经性听力丧失，并且所述DNA突变或变体位于选自由MT-RNR1和MT-RNR2组成的组的一个或多个基因中。

在一些实施例中，所述疾病是莱氏综合征，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：MT-ATP6、MT-TK、MT-TV、MT-TW、ATP5A1、ATP5E、BCS1L、COX10、COX15、CYC1、FOXRED1、LRPPRC、LYRM7、NDUFA10、NDUFA12、NDUFA2、NDUFA9、NDUFAF2、NDUFAF6、NDUFS3、NDUFS4、NDUFS7、NDUFS8、POLG、SCO1、SCO2、SDHA、SDHC、SDHC、SDHAF1、SDHAF2、SURF1、TMEM70、ATPAF2、UQCRB、UQCRQ、UQCRC2、UQCC2、UQCC3和USMG5。

在一些实施例中，所述疾病是脑白质病，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：DARS2、SDHA、SDHB、SDHC、SDHD、SDHAF1和SDHAF2。

在一些实施例中，所述疾病是阿尔珀斯-胡滕洛赫尔综合征(Alpers-Huttenlocher syndrome)，并且所述DNA突变或变体位于所述POLG基因中。

在一些实施例中，所述疾病是线粒体神经胃肠道脑肌病(MNGIE)综合征，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：TK2、DGUOK、SUCLG1、SUCLA2、ABAT、TYMP、RRM2B、MT-TK、POLG、SLC25A4、AGK和MPV17。

在一些实施例中，所述疾病是肝功能衰竭，并且所述DNA突变或变体位于所述TFAM基因中。

在一些实施例中，所述疾病是神经疾病或肝脏疾病，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：DARS2、RARS2、EARS2、MARS2、FARS2、YARS2、SARS2、AARS2和HARS2。

在一些实施例中，所述疾病是原发性线粒体疾病，并且所述DNA突变或变体位于选自由MRPS和MRPL组成的组的一个或多个基因中。

在一些实施例中，所述疾病是呼吸链缺乏症、神经疾病、视力丧失或肝脏疾病，并且所述DNA突变或变体位于选自由TACO1、GFM1和C12ORF65组成的组的一个或多个基因中。

在一些实施例中，所述疾病是周围神经病变或视神经病变，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：OPA1、MFN1、MFN2、DNM1L和MIEF2。

在一些实施例中，所述疾病是线粒体复合物缺乏症，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：MT-ATP6、MT-CO1、MT-CO2、MT-CO3、MT-ND1、MT-ND2、MT-ND3、MT-ND4、MT-TL1、MT-TN、MT-TK、MT-TV、MT-TW、APOPT1、ATPAF2、ATP5A1、ATP5E、ATP5F1A、ATP5F1D、ATP5F1E、BCS1L、COA5、COA7、COX6B1、COX8A、COX10、COX14、COX15、COX20、CYC1、FASTKD2、FOXRED1、MTFMT、NDUFA1、NDUFA2、NDUFA6、NDUFA9、NDUFA10、NDUFA11、NDUFA12、NDUFA13、NDUFAF1、NDUFAF2、NDUFAF3、NDUFAF4、NDUFAF5、NDUFAF6、NDUFB3、NDUFB8、NDUFB9、NDUFB11、NDUFS1、NDUFS2、NDUFS3、NDUFS4、NDUFS6、NDUFS7、NDUFS8、NDUFV1、NDUFV2、NUBPL、PET100、SCO1、SDHA、SDHAF1、SDHD、SURF1、TACO1、TIMMDC1、TMEM70、TMEM126B、LYRM4、TTC19、UQCC2、UQCC3、UQCRB、UQCRC2和UQCRQ。

在一些实施例中，所述疾病是辅酶Q10缺乏症，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：ADCK3、COQ2、COQ4、COQ6、COQ7、COQ8A、COQ9、PDSS1和PDSS2。

在一些实施例中，所述疾病是慢性进行性眼外肌麻痹(CPEO)，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：MT-TA、MT-TL2、MT-TM、MT-TW、C10orf2、DGUOK、DNA2、POLG、RNASEH1、RRM2B、SLC25A4、TK2、TOP3A和TWNK。

在一些实施例中，所述疾病是肉碱缺乏症，并且所述DNA突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：CPT1A、CPT2、SLC22A5和SLC22A20。

在一些实施例中，所述疾病是弗里德赖希氏共济失调，并且所述DNA突变或变体位于所述FXN基因中。

在一些实施例中，所述疾病是卡恩斯-塞尔综合征，并且所述DNA突变或变体位于所述MT-TL1基因中。

在一些实施例中，所述疾病是致死性婴儿心肌病(LIC)或巴氏综合征，并且所述DNA突变或变体位于所述TAZ基因中。

在一些实施例中，所述疾病是莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)，并且所述突变或变体位于选自由以下组成的组的一个或多个基因中：MT-ND1、MT-ND2、MT-ND3、MT-ND4、MT-ND5、MT-ND6、MT-ND4L、MT-CYB、MT-CO1、MT-CO2、MT-CO3、MT-ATP6和MT-ATP8。

在一些实施例中，线粒体功能障碍是通过包括以下的方法评估、监测或诊断的：(i)采用一组两个或更多个子仪器来测量受试者的线粒体功能障碍或线粒体疾病的一种或多种临床症状，(ii)将从所述两个或更多个子仪器获得的测量结果组合成单个复合测量结果，以及(iii)通过将所述复合测量结果与参考值或同一受试者的另一个复合测量结果进行比较来评估所述受试者的所述线粒体功能障碍或线粒体疾病的总体严重程度或变化。

在一些实施例中，(i)采用一个或多个复合测量结果来测量诊断、治疗或其它类型的医疗干预对所述受试者的临床效果；(ii)对于所述组中的所述子仪器中的每个子仪器，基于如使用所述子仪器测量的所述一种或多种临床症状的变化，将所述受试者归类为：(a)子仪器响应者或子仪器非响应者，(b)临床类别的成员，或者(c)度量范围的成员；以及(iii)通过以下中的任一项将从所述组中的所述子仪器获得的所述测量结果组合成单个复合测量结果：(a)单独评估从所述组子仪器获得的每个测量结果的变化，之后将每个测量结果组合成单个复合测量结果，或者(b)将在第一时间点从所述组子仪器获得的测量结果组合，并产生针对所述第一时间点的单个复合测量结果，并且然后将针对所述第一时间点的所述单个复合测量结果与从同一组子仪器产生的针对第二时间点的单个复合测量结果进行比较。

在一些实施例中，所述组子仪器包括以下中的一个或多个：运动功能量度、六分钟步行测试、两分钟步行测试、修订的疲劳影响量表、弗里德赖希氏共济失调评定量表、患者报告的结果测量信息系统胃肠道症状量表、30秒椅子站立测试、通过测压测试获得的肌肉力量(Muscle Strength by Myometry Test)、新城线粒体疾病成人量表、新城线粒体疾病小儿量表、36项调查简表、临床总体印象、患者的总体印象、患者报告的初始MitoPC症状、患者报告的MitoPC症状变化、哥伦比亚自杀严重程度评定量表、神经病变损伤评分、偏头痛残疾评估测试、抑郁症状学快速清单——自我报告、蒙特利尔认知评估、纽约心脏学会功能分类、糖尿病健康概况、眼球运动评估、边缘反射距离、8个凝视方向上的眼球运动和注视、眼球扫视程度、视觉功能测试、最小分辨角对数、佩里-罗布森评分(Pelli-Robson Score)、汉弗莱视野平均偏差(Humphrey Visual Field mean deviation)或其组合。

在一些实施例中，所述组子仪器包括运动功能量度、六分钟步行测试、修订的疲劳影响量表、弗里德赖希氏共济失调评定量表和患者报告的结果测量信息系统胃肠道症状量表。在一些实施例中，所述组子仪器包括五个子仪器，所述五个子仪器包含但不限于运动功能量度、六分钟步行测试、修订的疲劳影响量表、弗里德赖希氏共济失调评定量表和患者报告的结果测量信息系统胃肠道症状量表。

在一些实施例中，所述一种或多种临床症状选自由以下组成的组：疲劳、肌无力、神经肌肉功能障碍、运动不耐受、失衡、自主神经紊乱、胃肠道功能障碍、视力丧失、眼肌功能障碍、视网膜功能障碍、视神经功能障碍、上睑下垂、头痛、脱水、周围神经病变、麻木、癫痫、癫痫发作、失眠、情绪障碍、抑郁症、糖尿病、肥胖症、肾功能障碍、高血脂症、肝脏疾病、睡眠呼吸暂停、自闭症谱系行为、发展里程碑延迟、心律不齐、心肌功能障碍、心脏疾病、中风、言语障碍、耳鸣、听力障碍、学习障碍、认知障碍、痴呆或其组合。

在一些实施例中，所述普罗布考或其药学上可接受的盐以约1mg、约10mg、约100mg、约250mg、约500mg、约1g、约2g、约5g或约10g的剂量施用。在一些实施例中，所述普罗布考或其药学上可接受的盐以约1毫克/天、约10毫克/天、约100毫克/天、约250毫克/天、约500毫克/天、约1克/天、约2克/天、约5克/天或约10克/天的剂量施用。

在一些实施例中，所述普罗布考以液体调配物形式施用。在一些实施例中，所述液体调配物通过选自由以下组成的组的途径施用：口服、肠内、胃造口术管、空肠造口术管、口胃管、鼻胃管、胃肠外、静脉内、皮下、肌内、腹膜内、脑池内、关节内、脑内、实质内、脑室内、鼻、阴道、舌下、眼内、玻璃体内、直肠、局部、经皮和吸入。在一些实施例中，所述普罗布考或其药学上可接受的盐以片剂的形式施用。

在一些实施例中，所述普罗布考或其药学上可接受的盐按连续给药时间表施用。在一些实施例中，所述普罗布考或其药学上可接受的盐每天两次、每天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次、每两周一次或每月一次施用。在一些实施例中，所述普罗布考或其药学上可接受的盐最初以高于后续剂量的负荷剂量施用。

在一些实施例中，普罗布考与一种或多种另外的药剂一起施用。在一些实施例中，所述一种或多种另外的药剂选自烟酸、放线菌酮、苯扎贝特、伐替喹酮(vatiquinone)、肉碱、辅酶Q10、α-托可醌、辅酶Q10类似物、细胞色素C、二氯乙酸盐、5-[(e)-2-(4-羟苯基)-乙烯基]苯-1,3二酚、黄素单核苷酸、拉米普肽(elamipretide)、艾地苯醌(idebenone)、拉特吡啶(latrepirdine)、左卡尼汀(levocarnitine)、2',3',5'-三-O-乙酰尿苷、奥利索西(olesoxime)、奥马索龙(omaveloxolone)、硫胺素二磷酸盐、泛醌、维生素C、维生素D、维生素E、硫胺素、核黄素、镁、钙、磷酸盐、膜磷脂、不饱和脂肪酸、肌酸、丙酮酸、α-硫辛酸、NADH、PPARδ调节剂、PPARδ激动剂、半胱胺酒石酸氢盐、烟碱酸、烟酰胺、烟酰胺核糖、阿昔莫司(acipimox)、白藜芦醇、葡萄糖、左旋肉碱、谷胱甘肽、氧化还原调节剂、二氯乙酸盐、姜黄素、五味子素、三庚酸甘油酯(triheptanoin)、靶向线粒体疾病突变的病毒或非病毒载体基因疗法或其组合。

附图说明

当结合附图阅读时，将进一步理解发明内容以及以下详细描述。出于说明所公开方法的目的，在附图中示出了所述方法的示例性实施例；然而，所述方法并不受限于所公开的具体实施例。在附图中：

图1示出了根据本公开的实施例的临床研究的流程图。

具体实施方式

可以通过参考结合形成本公开的一部分的附图的以下详细描述更容易地理解所公开的方法。应理解，所公开的方法不限于本文所描述和/或所示出的具体方法，并且本文使用的术语仅出于通过实例描述特定实施例的目的，并不旨在限制所要求保护的方法。

除非另有具体说明，否则关于可能的作用机制或方式或者改进原因的任何描述仅旨在是说明性的，并且所公开的方法不受任何此类建议的作用机制或方式或者改进原因的正确性或不正确性的约束。

应理解，为了清楚起见，本文在单独的实施例的上下文中描述的所公开的方法的某些特征还可以在单个实施例中组合提供。相反，为了简洁起见，文中在单个实施例的上下描述的所公开的方法的各种特征还可以单独提供或以任何子组合提供。

术语“约”在参考数字范围、临界值或特定值使用时用于指示所叙述的值可能与所列值相差多达10％。由于本文使用的数值中的许多数值是通过实验确定的，因此本领域的技术人员应理解，此类确定可以并且经常会在不同的实验之间变化。本文所使用的值不应被认为由于这种固有的变化而受到不适当的限制。因此，术语“约”用于涵盖与规定值相差±10％或更小的变化、±5％或更小的变化、±1％或更小的变化、±0.5％或更小的变化或±0.1％或更小的变化。

在本文叙述或建立数值范围的情况下，所述范围包含其端点以及范围内的所有单独整数和分数，并且还包含在其中由形成所述范围内较大值组的子组的那些端点和内部整数和分数的所有各种可能的组合形成的较窄范围中的每个较窄范围，其程度如同明确叙述那些较窄范围中的每个较窄范围一样。例如，“1mg到约10,000mg”的范围包含端点1mg和10,000mg以及所有中间值。在数值范围在本文中被陈述为大于所述值的情况下，所述范围仍然是有限的，并且在其上端由在本文所述的本发明的上下文内可操作的值界定。在数值范围在本文中被陈述为小于所述值的情况下，所述范围在其下端仍然由非零值界定。当限定范围时，本发明的范围并不旨在限于所叙述的具体值。所有范围都是包含性的且可组合的。

如本文所使用的，单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“所述(the)”包含复数。

在整个说明书和权利要求中使用了与描述的各方面有关的各种术语。除非另有指出，否则此类术语在本领域中具有其普通含义。其它具体定义的术语将以与本文提供的定义一致的方式进行解释。

术语“包括”旨在包含由术语“基本上由…组成”和“由…组成”所涵盖的实例；类似地，术语“基本上由…组成”旨在包含由术语“由…组成”所涵盖的实例。

本公开涉及治疗或预防受试者的线粒体功能障碍或线粒体疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用普罗布考或其药学上可接受的盐，其中施用带来了选自以下的一种或多种临床症状的改善或延迟发作：疲劳、肌无力、神经肌肉功能障碍、运动不耐受、失衡问题、自主神经紊乱、胃肠道问题、视力问题、眼肌问题、视网膜问题、视神经问题、上睑下垂、头痛、脱水、周围神经病变、麻木、癫痫、癫痫发作、睡眠问题、情绪障碍、抑郁症、糖尿病、重量问题、肾功能障碍、高血脂症、肝脏疾病、睡眠呼吸暂停、自闭症谱系行为、行为问题、发展里程碑延迟、心律问题、心肌问题、心脏疾病、中风、言语问题、耳鸣、听力障碍、智力障碍、学习障碍、认知障碍、痴呆或其组合。

普罗布考是小分子药物化合物。普罗布考于1977年首次被FDA批准为以

“药学上可接受的盐”是指普罗布考的盐。具体地，此类盐是无毒的，并且可以是无机或有机酸加成盐或碱加成盐。具体地，此类盐包含：(1)酸加成盐，其由如以下等无机酸形成：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或由如以下等有机酸形成：乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羟乙基磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯丙酸、三甲基乙酸、特丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等；或(2)在母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如，碱金属离子、碱土离子或铝离子)替换时形成的盐；或与如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等有机碱形成的配位化合物。仅通过举例，盐进一步包含钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵等；并且当化合物含有碱性官能度时，包含无毒有机或无机酸的盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、草酸盐等。在某些方面，普罗布考的药学上可接受的盐是有机胺盐。优选地，有机胺盐是葡甲胺盐。

“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”等术语是指降低症状的严重程度和/或频率、消除症状和/或症状的潜在原因、降低症状和/或其潜在原因的频率或可能性、改善或补救由线粒体功能障碍或线粒体疾病直接或间接引起的损伤、延迟线粒体功能障碍或线粒体疾病的发作或防止线粒体功能障碍或线粒体疾病的发作的治疗性治疗。要治疗的受试者包含患有线粒体功能障碍或线粒体疾病的受试者以及易于发展为线粒体功能障碍或线粒体疾病的受试者。在某些实施例中，患有或易于发展线粒体功能障碍或线粒体疾病的受试者在临床上无症状。在本公开范围内的其它治疗方法是防止要预防线粒体功能障碍或线粒体疾病的受试者的症状发作的方法。可以使用本文所述的方法来确定要预防线粒体功能障碍或线粒体疾病的那些受试者。本公开范围内的仍其它治疗方法是在面对应激源时防止代偿失调的方法或者在面对应激源时增加复原力的方法，如使用本领域的技术人员已知的可接受的临床方法所测量的。

如本文所使用的，“受试者”包含哺乳动物，特别是如狗、猫、马、猪、羊、牛等家养动物。在优选实施例中，“受试者”包含人。术语“人”、“患者”和“受试者”在本文中可互换使用。

在某些实施例中，线粒体功能障碍是呼吸链功能障碍。呼吸链功能障碍(有时被称为呼吸链缺乏症)表示涉及细胞氧化磷酸化过程中的畸变的一组异质性和高度病态的能量缺乏病症。

在某些实施例中，线粒体功能障碍与遗传性线粒体疾病相关。在其它实施例中，线粒体功能障碍是获得性线粒体疾病。在仍其它实施例中，线粒体功能障碍是原发性线粒体疾病。在其它实施例中，线粒体功能障碍是继发性线粒体疾病。

在某些实施例中，线粒体功能障碍与一种或多种基因突变相关，所述线粒体功能障碍有时被称为遗传学确认的线粒体疾病。遗传学确认的线粒体疾病表示一类与广泛的临床特征和病理特征相关的病症。Gorman等人,《自然综述：疾病导论》2016；2:16080。症状多种多样，并且从出生前到年长的成人的任何年龄的个体都可能出现。Parikh等人,《遗传学与医学(Genet.Med.)》2015；17:689-701。

在本公开的实施例中，受试者患有选自以下的线粒体疾病：常染色体显性视神经萎缩(或“ADOA”)；β-氧化缺陷；肉碱缺乏症；肉碱-酰基-肉碱缺乏症；慢性进行性眼外肌麻痹综合征(或“CPEO”)；辅酶Q10缺乏症；复合物I缺乏症(或“NADH脱氢酶缺乏症”)；复合物II缺乏症(或“琥珀酸脱氢酶缺乏症”)；复合物III缺乏症(或“泛醌-细胞色素c氧化还原酶缺乏症”)；复合物IV缺乏症(或“细胞色素c氧化酶缺乏症”或“COX缺乏症”)；复合物V缺乏症(或“ATP合酶缺乏症”)；多呼吸链复合物缺乏症；CPT I缺乏症；CPT II缺乏症；糖尿病和耳聋(或“DAD”)；肌酸缺乏综合征；弗里德赖希氏共济失调(或“FA”)；卡恩斯-塞尔综合征(或“KSS”)；乳酸酸中毒；莱伯氏遗传性视神经病变(或“LHON”)；莱氏综合征(或“莱氏病”)；致死性婴儿心肌病(或“LIC”或“巴氏综合征”)；脑白质营养不良；伴脑干和脊髓受累以及乳酸升高的脑白质病(或“LBSL”)；长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“LCAD”)；长链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶(或“LCHAD”)；拉夫特病；中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“MCAD”)；线粒体细胞病；线粒体DNA耗竭；一个或多个线粒体DNA缺失；线粒体脑病；线粒体肌病(或“MM”)；线粒体肌病、脑肌病、乳酸酸中毒、中风样症状(或“MELAS”)；线粒体神经胃肠道脑肌病(或“MNGIE”)；线粒体隐性共济失调综合征(或“MIRAS”)；多酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“MAD”或“戊二酸血症II型”)；肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(或“MERRF”)；神经病变、共济失调和色素性视网膜炎(或“NARP”)；皮尔逊综合征；POLG2突变；进行性婴儿灰白质萎缩症(或“阿尔珀氏病”)；上睑下垂；丙酮酸羧化酶缺乏症(或“PCD”)；丙酮酸脱氢酶复合物缺乏症(或“PDCD”或“PDH”)；短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“SCAD”)；短链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“SCHADD”)；极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“VLCAD”)；或其组合。

在本公开的其它实施例中，受试者被诊断为患有选自以下的线粒体疾病：常染色体显性视神经萎缩(或“ADOA”)；β-氧化缺陷；肉碱缺乏症；肉碱-酰基-肉碱缺乏症；慢性进行性眼外肌麻痹综合征(或“CPEO”)；辅酶Q10缺乏症；复合物I缺乏症(或“NADH脱氢酶缺乏症”)；复合物II缺乏症(或“琥珀酸脱氢酶缺乏症”)；复合物III缺乏症(或“泛醌-细胞色素c氧化还原酶缺乏症”)；复合物IV缺乏症(或“细胞色素c氧化酶缺乏症”或“COX缺乏症”)；复合物V缺乏症(或“ATP合酶缺乏症”)；多呼吸链复合物缺乏症；CPT I缺乏症；CPT II缺乏症；糖尿病和耳聋(或“DAD”)；肌酸缺乏综合征；弗里德赖希氏共济失调(或“FA”)；卡恩斯-塞尔综合征(或“KSS”)；乳酸酸中毒；莱伯氏遗传性视神经病变(或“LHON”)；莱氏综合征(或“莱氏病”)；致死性婴儿心肌病(或“LIC”或“巴氏综合征”)；脑白质营养不良；伴脑干和脊髓受累以及乳酸升高的脑白质病(或“LBSL”)；长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“LCAD”)；长链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶(或“LCHAD”)；拉夫特病；中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“MCAD”)；线粒体细胞病；线粒体DNA耗竭；一个或多个线粒体DNA缺失；线粒体脑病；线粒体肌病(或“MM”)；线粒体肌病、脑肌病、乳酸酸中毒、中风样症状(或“MELAS”)；线粒体神经胃肠道脑肌病(或“MNGIE”)；线粒体隐性共济失调综合征(或“MIRAS”)；多酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“MAD”或“戊二酸血症II型”)；肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(或“MERRF”)；神经病变、共济失调和色素性视网膜炎(或“NARP”)；皮尔逊综合征；POLG2突变；进行性婴儿灰白质萎缩症(或“阿尔珀氏病”)；上睑下垂；丙酮酸羧化酶缺乏症(或“PCD”)；丙酮酸脱氢酶复合物缺乏症(或“PDCD”或“PDH”)；短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“SCAD”)；短链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“SCHADD”)；极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(或“VLCAD”)；或其组合。

普罗布考或其药学上可接受的盐以任何合适的方式施用。合适的施用途径包含但不限于口服、肠内(例如，胃造口术管、空肠造口术管、口胃管或鼻胃管)、胃肠外(例如，静脉内、皮下、肌内)、腹膜内、脑池内、关节内、脑内(实质内和脑室内)、鼻、阴道、舌下、眼内、直肠、局部、经皮和吸入。在某些实施例中，施用是口服的或肠内的。

在某些实施例中，一种或多种临床症状的改善或延迟发作是临床上显著的。“临床上显著的”意指包含本领域的普通技术人员认为(i)统计学上显著的，或(ii)实际上重要的因为其对日常生活有可观察到的积极效果的一种或多种改善。例如，与预定义的严重程度阈值相比，临床上显著的改善可以是对预先选择的症状的改善。在一些实施例中，对选择症状的临床上显著的改善包含在其它症状中的任何症状中不存在统计学上显著的恶化。在其它实施例中，临床上显著的改善包含生活质量参数的提高。

在特定实施例中，施用普罗布考或其药学上可接受的盐带来了对使用来自所述临床症状中的两种或更多种临床症状的测量结果计算的复合测量结果的临床上显著的改善。在某些实施例中，使用包括以下的方法来计算复合测量结果：(i)采用两个或更多个子仪器测量所述临床症状中的一种或多种临床症状随时间的变化，(ii)对于所述两个或更多个子仪器中的每个子仪器，基于如使用所述子仪器测量的所述一种或多种临床症状的变化，将所述受试者归类为(a)子仪器响应者或子仪器非响应者，(b)临床类别的成员，或者(c)度量范围的成员；以及(iii)采用算法将从所述两个或更多个子仪器获得的所述测量结果组合成单个复合测量结果，其中所述算法包括(i)单独评估从所述两个或更多个子仪器获得的每个测量结果的变化，之后将每个测量结果组合成单个复合测量结果，或者(ii)将在第一时间点从所述两个或更多个子仪器获得的测量结果组合，并产生针对所述第一时间点的单个复合测量结果，并且然后将针对所述第一时间点的单个复合测量结果与在第二时间点处从相同的两个或更多个子仪器产生的单个复合测量结果进行比较。本文提供的实例中详细说明了代表性计算。

通过举例，将受试者归类为临床类别的成员可以意味着将受试者归类为具有正常或异常测量结果。

通过进一步举例，将受试者归类为度量范围的成员可以意味着将受试者归类为落入预定义的数字范围内或超出预定义的数字范围。

在一些方面，所述两个或更多个测量仪器选自运动功能量度、六分钟步行测试、两分钟步行测试、修订的疲劳影响量表、弗里德赖希氏共济失调评定量表、患者报告的结果测量信息系统胃肠道症状量表、30秒椅子站立测试、通过测压测试获得的肌肉力量(MuscleStrength by Myometry Test)、新城线粒体疾病成人量表、新城线粒体疾病小儿量表、36项调查简表、临床总体印象、患者的总体印象、患者报告的初始MitoPC症状、患者报告的MitoPC症状变化、哥伦比亚自杀严重程度评定量表、神经病变损伤评分、偏头痛残疾评估、抑郁症状学快速清单——自我报告、蒙特利尔认知评估、纽约心脏学会功能分类、糖尿病健康概况、眼球运动评估、边缘反射距离、8个凝视方向上的眼球运动和注视、眼球扫视程度、视觉功能测试、最小分辨角对数、佩里-罗布森评分(Pelli-Robson Score)、汉弗莱视野平均偏差(Humphrey Visual Field mean deviation)或其组合。在优选实施例中，所述两个或更多个测量仪器选自六分钟步行测试、运动功能量度、修订的疲劳影响量表、弗里德赖希氏共济失调评定量表和患者报告的结果测量信息系统胃肠道症状量表。在更优选的实施例中，所述两个或更多个测量仪器是六分钟步行测试、运动功能量度、修订的疲劳影响量表、弗里德赖希氏共济失调评定量表和患者报告的结果测量信息系统胃肠道症状量表。这些测量仪器中的大多数测量仪器(包含如何进行、测量和评估所述测量仪器)在本领域中是已知的。Karaa等人,《遗传性代谢病杂志(J.Inherit.Metab.Dis.)》2017；40(3):403-14。

在一方面，测量仪器是运动功能量度。在另一方面，测量仪器是六分钟步行测试。在另外的方面，测量仪器是两分钟步行测试。在一方面，测量仪器是修订的疲劳影响量表。在另一方面，测量仪器是弗里德赖希氏共济失调评定量表。在另外的方面，测量仪器是一个或多个患者报告的结果测量信息系统胃肠道量表。在一方面，测量仪器是30秒椅子站立测试。在另一方面，测量仪器是通过测压测试获得的肌肉力量。在另一方面，测量仪器是新城线粒体疾病成人量表。在另外的方面，测量仪器是新城线粒体疾病小儿量表。在一方面，测量仪器是36项调查简表。在另一方面，测量仪器是临床总体印象。在另一方面，测量仪器是患者的总体印象。在另一方面，测量仪器是患者报告的初始MitoPC症状。在另外的方面，测量仪器是患者报告的MitoPC症状变化。在另外的方面，测量仪器是哥伦比亚自杀严重程度评定量表。在一方面，测量仪器是神经病变损伤评分。在另一方面，测量仪器是偏头痛残疾评估。在另外的方面，测量仪器是抑郁症状学快速清单——自我报告。在一方面，测量仪器是蒙特利尔认知评估。在另一方面，测量仪器是纽约心脏学会功能分类。在另外的方面，测量仪器是糖尿病健康概况。在一方面，测量仪器是眼球运动评估。在另一方面，测量仪器是边缘反射距离。在另外的方面，测量仪器是8个凝视方向上的眼球运动和注视。在一方面，测量仪器是眼球扫视程度。在一方面，测量仪器是视觉功能测试。在另一方面，测量仪器是最小分辨角对数。在另外的方面，测量仪器是佩里-罗布森评分。在一方面，测量仪器是汉弗莱视野平均偏差。在另一方面，测量结果是患者报告的初始MitoPC症状。在另外的方面，测量结果是患者报告的MitoPC症状变化。

在某些实施例中，本文公开的方法进一步包括施用一种或多种另外的药剂。如本文所使用的，“药剂”意指经过美国联邦或州政府的监管机构或除了美国之外的国家中的对应机构批准的或可由所述机构批准的，或者在美国药典(U.S.Pharmacopoeia)或其它公认药典中列出的供动物并且更具体地人中使用的。

在本公开的各方面，所述一种或多种另外的药剂选自烟酸、放线菌酮、苯扎贝特、伐替喹酮、肉碱、辅酶Q10、α-托可醌(tocopherolquinone)、辅酶Q10类似物、细胞色素C、二氯乙酸盐、5-[(e)-2-(4-羟苯基)-乙烯基]苯-1,3二酚、黄素单核苷酸、拉米普肽、艾地苯醌、拉特吡啶、左卡尼汀、2',3',5'-三-O-乙酰尿苷、奥利索西、奥马索龙、硫胺素二磷酸盐、泛醌、维生素C、维生素D、维生素E、硫胺素、核黄素、镁、钙、磷酸盐、膜磷脂、不饱和脂肪酸、肌酸、丙酮酸、α-硫辛酸、NADH、PPARδ调节剂、烟碱酸、烟酰胺、烟酰胺核糖、阿昔莫司、白藜芦醇、葡萄糖、左旋肉碱、谷胱甘肽、氧化还原调节剂、二氯乙酸盐、姜黄素、五味子素、三庚酸甘油酯、靶向线粒体疾病突变的病毒或非病毒载体基因疗法或其组合。Polyak等人,《分子遗传学和新陈代谢》2018；123(4):449-462。Peng等人,《人类分子遗传学》2015；24(17):4829-4847。Zhuang等人,《公共科学图书馆：综合(PLoS one)》2013；8(7):e69282。McCormack等人,《线粒体(Mitochondrion)》2015；22:45-59。

在某些实施例中，受试者在施用前被诊断为患有遗传性线粒体疾病。在一些方面，线粒体疾病的诊断可能涉及血液和/或组织中的基于细胞或组织活检的生化研究或大规模平行DNA或RNA测序。

在一些方面，通过以下进行诊断：(a)对受试者的核酸或其一部分进行测序；(b)将受试者的核酸序列或其一部分与包括含有病理性核酸突变的序列的数据库中的序列进行比较；以及(c)确定受试者的核酸序列是否具有所述数据库中的至少一种病理性核酸突变。在优选实施例中，包括含有病理性核酸突变的序列的数据库是指线粒体疾病序列数据资源(MSeqDR)，即用于策划线粒体疾病基因组数据的社区范围的因特网资源。Falk等人,《分子遗传学和新陈代谢》2015；114(3):388-396。截至2019年，MSeqDR管理267种线粒体疾病、与线粒体生物学或疾病相关的1,607种基因，以及这些基因中的4,486种致病变体。Shen等人,《人类突变(Hum.Mutat.)》2016；37(6):540-548。MseqDR网址：mseqdr.org/mb.php？url＝index.php.于2019年6月7日访问。在某些实施例中，核酸是DNA。在某些实施例中，核酸是RNA。在某些实施例中，对核酸中的组分核苷酸的化学修饰的性质、丰度和位置用于诊断目的。

在一些实施例中，本公开的方法可以包括选择和/或分离所关注的遗传突变或变异，并量化存在的每个基因座的量(例如以确定拷贝数)和/或不同基因座变体的相对量(例如给定DNA序列的两个等位基因)。

在另一方面，本公开的方法可以包括使一个或多个探针与核酸样品接触、使探针与所关注的核酸区域杂交和/或使探针扩增。此外，可以在使探针与核酸样品接触、使探针与所关注的核酸区域杂交、使探针杂交扩增和/或检测探针杂交的同时或之前，将探针固定到衬底(例如阵列)。在此替代性实施例中，可以在未测序的情况下检测核酸突变或变异。

在一些实施例中，遗传突变或变异可以具有与其相关的参考序列。如本文所使用的“参考序列”表示与核酸中的所关注的基因座进行比较的序列。在某些实施例中，参考序列被认为是所关注的基因座的“野生型”序列。含有具有与所关注的基因座的参考序列不同的序列的所关注的基因座的核酸有时被称为多态或突变体或遗传变异。含有具有与所关注的基因座的参考序列并无不同的序列的所关注的基因座的核酸有时被称为野生型或非遗传变异。在某些实施例中，所关注的基因座可以具有与其相关的多于一个不同的参考序列(例如，在已知所关注的基因座具有要被认为是正常或野生型的多态性的情况下)。

在另外的实施例中，本文所述的所关注的区域可以包含“共有遗传变体序列(consensus genetic variant sequence)”，所述共有遗传变体序列是指核酸或蛋白质序列，已知所述共有遗传变体序列的核酸或氨基酸以高频率出现在携带对线粒体功能障碍进行编码的基因的个体群体中。此外，本文所述的所关注的区域可以包含“共有正常基因序列”，所述共有正常基因序列是指核酸序列，已知所述共有正常基因序列的核酸以高频率出现在携带对功能不正常或自身功能不正常的蛋白质进行编码的基因的个体群体中，在相应的位置处。在另外的实施例中，不是所关注的区域的对照区域或本文所述的参考序列可以包含“共有正常序列”，所述共有正常序列是指核酸或蛋白质序列，已知所述共有正常序列的核酸或氨基酸以高频率出现在携带对功能正常的蛋白质进行编码或其中核酸本身具有正常功能的基因的个体群体中。

截至2016年，已知突变会引起线粒体疾病的不同基因有近300种(Gorman等人,《自然综述：疾病导论》2016；2:16080。Koopman等人,《新英格兰医学杂志(N.Engl.J.Med.)》2012；366:1132-41)，其中在核DNA基因组和线粒体DNA(mtDNA)基因组两者中均出现了致病病因。McCormick等人,《神经治疗学(Neurotherapeutics)》2013；10:251-61。在某些实施例中，所述至少一种病理性突变是取代、缺失或插入。

在某些实施例中，所述至少一种病理性核酸突变是线粒体DNA(mtDNA)突变或mtDNA突变的组合。突变时与线粒体疾病相关的示例性mtDNA编码的基因包含MT-ND1、MT-ND2、MT-ND3、MT-ND4、MT-ND4L、MT-ND5、MT-ND6、MT-CYB、MT-CO1、MT-CO2、MT-CO3、MT-RNR1、MT-RNR2、MT-TA、MT-TC、MT-TE、MT-TF、MT-TH、MT-TI、MT-TK、MT-TL1、MT-TL2、MT-TM、MT-TN、MT-TQ、MT-TS1、MT-TS2、MT-TV、MT-TW、MT-ATP6和MT-ATP8及其组合。在某些实施例中，mtDNA突变位于用于线粒体转移RNA(mt-tRNA)的基因中或位于用于线粒体核糖体RNA(mt-rRNA)的基因中。

在某些实施例中，所述至少一种病理性核酸突变是核DNA(nDNA)突变或nDNA突变的组合。突变时与线粒体疾病相关的示例性nDNA编码的基因包含但不限于AARS2、ABCB7、ABCC8、ACAD8、ACAD9、ACADM、ACADS、ACADSB、ACADVL、ACAT1、ACO2、ADCK3、ADRB2、ADRB3、AFG3L2、AGK、AGRP、AIFM1、AK2、AKAP10、AKT2、ALAS2、ALDH2、ALDH4A1、ALDH6A1、AMACR、AMT、APOPT1、APTX、ARMS2、ATP5A1、ATP5E、ATP5F1A、APT5F1D、ATP5F1E、ATPAF2、AUH、BAX、BCAT2、BCKDHA、BCKDHB、BCL2、BCS1L、BOLA3、C8orf38、C10orf2、C12orf62、C12orf65、C19orf12、C20orf7、C1QBP、CAPN10、CARS2、CARTPT、CDH23、CDKAL1、CHCHD10、CHKB、CISD2、CLRN1、COA5、COA7、COA10、COQ2、COQ4、COQ6、COQ7、COQ8A、COQ9、COX10、COX14、COX15、COX20、COX4I2、COX6B1、COX8A、CPS1、CPT1A、CPT2、CRAT、CYB5R3、CYC1、CYC5、CYCS、CYP11A1、CYP11B1、CYP11B2、CYP24A1、CYP27A1、CYP27B1、D2HGDH、DARS2、DBT、DECR1、DFNB31、DGUOK、DHODH、DIABLO、DLD、DLAT、DMGDH、DNA2、DNAJC19、DNM1L、EARS2、ECHS1、ELAC2、ENPP1、ETFA、ETFB、ETFDH、ETHE1、FARS2、FASTKD2、FBXL4、FOXRED1、FH、FXN、GATM、GCDH、GCGR、GCK、GCSH、GDAP1、GFER、GFM1、GHRL、GJB2、GJB3、GJB6、GK、GLDC、GLRX5、GLUD1、GPD2、GPR98、GTPBP3、HADH、HADHA、HADHB、HARS2、HCCS、HIBCH、HK1、HLCS、HMGA1、HMGCS2、HMGCL、HNF1A、HNF1B、HNF4A、HOGA1、HSD17B10、HSPD1、HTRA1、HTRA2、IBA57、IDH2、IDH3B、IGF2BP2、IL6、INSR、IRS1、IRS2、ISCA1、ISCA2、ISCU、IVD、KANK1、KARS、KCNJ11、KIF1B、L2HGDH、LARS2、LEPR、LIAS、LIPC、LRPPRC、LRRK2、LYRM4、LYRM7、MAOA、MAPK8IP1、MARS2、MC4R、MCCC1、MCCC2、MCEE、ME2、MFF、MFN2、MGME1、MIPEP、MLYCD、MMAA、MMAB、MMADHC、MPC1、MPV17、MRAP2、MRPL3、MRPL44、MRPS2、MRPS7、MRPS16、MRPS22、MRPS34、MSTO1、MTFMT、MTO1、MTPAP、MUT、MYO7A、NAGS、NARS2、NDUFA1、NDUFA2、NDUFA6、NDUFA9、NDUFA10、NDUFA11、NDUFA12、NDUFA13、NDUFAF1、NDUFAF2、NDUFAF3、NDUFAF4、NDUFAF5、NDUFAF6、NDUFB3、NDUFB8、NDUFB9、NDUFS1、NDUFS2、NDUFS3、NDUFS4、NDUFS5、NDUFS6、NDUFS7、NDUFS8、NDUFV1、NDUFV2、NEUROD1、NF2、NFU1、NGLY1、NROB2、NUBPL、NUP62、OAT、OGDH、OPA1、OPA3、OTC、OXCT1、PANK2、PARK2、PARK7、PAX4、PC、PCCA、PCCB、PCDH15、PCK2、PDHA1、PDHB、PDHX、PDP1、PDSS1、PDSS2、PDX1、PET100、PINK1、PNKD、PNPT1、POLG、POLG2、POMC、PPARG、PPARGC1B、PPOX、PPP1R3A、PUS1、PYCR1、PYY、RARS2、REEP1、RMRP、RMND1、RNASEH1、RRM2B、SACS、SARDH、SARS2、SCO1、SCO2、SCO3、SDHA、SDHAF1、SDHAF2、SDHB、SDHC、SDHD、SERAC1、SFXN4、SIM1、SLC2A2、SLC2A4、SLC22A5、SLC25A1、SLC25A3、SLC25A4、SLC25A12、SLC25A13、SLC25A15、SLC25A19、SLC25A20、SLC25A22、SLC25A26、SLC25A38、SLC30A8、SOD2、SPG7、SPG20、STAR、SUCLA2、SUCLG1、SURF1、TACO1、TARS2、TAZ、TDF7L2、TFAM、TIMM8A、TIMMDC1、TK2、TMEM70、TMEM126、TMEM126B、TOP3A、TRIT1、TRMT10C、TRMT5、TRMU、TRNT1、TSFM、TTC19、TUFM、TWNK、UCP1、UCP2、UCP3、UNG、UQCC2、UQCC3、UQCRB、UQCRC2、UQCRQ、USMG5、USH1C、USH1G、USG2A、VARS2、WARS2、WFS1、WWOX、XPNPEP3、YARS2及其组合。

在一些方面，核酸突变或变异位于选自表8或9中x叙述的基因中的任何基因或其任何组合的基因中。表8是基于来自以下的信息的与线粒体疾病相关的基因的分类：Kremer等人,“线粒体疾病遗传学”,《线粒体病症的诊断和管理》；Mancuso和Klopstock(编辑)；施普林格出版公司2019；第41-62页。表9基于来自以下的信息：线粒体疾病序列数据资源(MSeqDR.org).Shen等人,MSeqDR：用于促进线粒体疾病中的基因组研究的集中式知识库和生物信息学网络资源(MSeqDR:a centralized knowledge repository andbioinformatics web resource to facilitate genomic investigations inmitochondrial disease),《人类突变》2016；37(6):540-548。关于核酸突变或变异的细节可以在www.omim.org，即在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库中找到。OMIM是人类基因和遗传表型的全面、权威的概要。基于表9中提供的OMIM标识符，可以在此数据库中找到关于每种遗传突变或变异的信息。表9中叙述的来自OMIM数据库的每种核酸突变或变异的信息通过引用以其整体并入本文。

在一些方面，所述方法可以检测来自表8或9中的任一个的1到100种、1到50种、1到25种、2到10种或5到10种核酸突变或变异；2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种或更多种核酸突变或变异；以及100种、50种、30种、20种、10种或更少的核酸突变或变异。在另一方面，根据一些实施例的方法可以检测来自表8或9的至少两种核酸突变或变异。在另一方面，根据一些实施例的方法可以检测来自表8或9的至少三种核酸突变或变异。在另一方面，根据一些实施例的方法可以检测来自表8或9的至少四种核酸突变或变异。在另一方面，根据一些实施例的方法可以检测来自表8或9的至少五种核酸突变或变异。在另一方面，根据一些实施例的方法可以检测来自表8或9的至少六种核酸突变或变异。在另一方面，根据一些实施例的方法可以检测来自表8或9的至少七种核酸突变或变异。在另一方面，根据一些实施例的方法可以检测来自表8或9的至少八种核酸突变或变异。在另一方面，根据一些实施例的方法可以检测来自表8或9的至少九种核酸突变或变异。在另一方面，根据一些实施例的方法可以检测来自表8或9的至少十种核酸突变或变异。

在一些方面，病理性核酸突变是至少一种mtDNA突变和至少一种nDNA突变的组合，和/或取决于mtDNA单倍群(haplogroup)背景和/或环境暴露。

在本公开的某些方面，线粒体功能障碍与如帕金森氏病、肌萎缩性脊髓侧索硬化、多发性硬化或亨廷顿氏病(Huntington's disease)等神经退行性病症相关。在本公开的一些方面，线粒体功能障碍与认知障碍、精神障碍和/或情绪障碍相关。在本公开的另外的方面，线粒体功能障碍与阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)相关。在本公开的仍另外的方面，线粒体功能障碍与心脏功能障碍相关。

在某些实施例中，受试者为18岁或以上。也就是说，在一些实施例中，受试者是成人。例如，受试者可以为18岁或以上、19岁或以上、20岁或以上、21岁或以上、22岁或以上、23岁或以上、24岁或以上、25岁或以上、26岁或以上、27岁或以上、28岁或以上、29岁或以上、30岁或以上、31岁或以上、32岁或以上、33岁或以上、34岁或以上、35岁或以上、36岁或以上、37岁或以上、38岁或以上、39岁或以上、40岁或以上、41岁或以上、42岁或以上、43岁或以上、44岁或以上、45岁或以上、46岁或以上、47岁或以上、48岁或以上、49岁或以上、50岁或以上、51岁或以上、52岁或以上、53岁或以上、54岁或以上、55岁或以上、56岁或以上、57岁或以上、58岁或以上、59岁或以上、60岁或以上、61岁或以上、62岁或以上、63岁或以上，或64岁或以上。在其它方面，受试者是老年成年人，例如，受试者为65岁或以上或70岁或以上。例如，老年受试者可以为65岁或以上、66岁或以上、67岁或以上、68岁或以上、69岁或以上、70岁或以上、71岁或以上、72岁或以上、73岁或以上、74岁或以上、75岁或以上，或80岁或以上。

在一些方面，受试者是儿童，也就是说，受试者小于18岁。例如，受试者可以小于18岁、17岁或更小、16岁或更小、15岁或更小、14岁或更小、13岁或更小、12岁或更小、11岁或更小、10岁或更小、9岁或更小、8岁或更小、7岁或更小、6岁或更小、5岁或更小、4岁或更小、3岁或更小、2岁或更小，或1岁或更小。在一些方面，受试者是胎儿、新生儿或婴儿。在一些方面，受试者是青少年。在某些实施例中，受试者介于约3周龄与约52周龄之间。在优选实施例中，受试者为18岁或更大、17岁或更小、12岁或更小、65岁或更小、75岁或更小、或介于约3龄与约52周龄之间。

在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1mg到约10,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1mg到约5,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1毫克/天到约1,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1mg到约500mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1mg到约100mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1mg到约50mg的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10mg到约10,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10mg到约5,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10mg到约1,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10mg到约500mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10mg到约100mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10mg到约50mg的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约50mg到约10,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约50mg到约5,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约50mg到约1,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约50mg到约500mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约50mg到约1,000mg的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约100mg到约10,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约100mg到约5,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约100mg到约1,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约100mg到约500mg的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约500mg到约10,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约500mg到约5,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约500mg到约1,000mg的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1,000mg到约10,000mg的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1,000mg到约5,000mg的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约5,000mg到约10,000mg的剂量施用。例如，普罗布考或其药学上可接受的盐以以下剂量施用：约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1,000mg、约1,500mg、约2,000mg、约2,500mg、约3,000mg、约3,500mg、约4,000mg、约4,500mg、约5,000mg、约5,500mg、约6,000mg、约6,500mg、约7,000mg、约7,500mg、约8,000mg、约8,500mg、约9,000mg、约9,500mg、约10,000mg。在优选方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1mg、约10mg、约100mg、约250mg、约500mg、约1,000mg、约5,000mg或约10,000mg的剂量施用。

在一些实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐按连续给药时间表施用。如本文所使用的，“连续给药时间表”是指以规定的频率(例如每天)连续施用药物而无间歇。连续给药时间表不同于间歇施用。通过举例，连续给药时间表可以是每天或比每天更低的频率。例如，在一些实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐可以以每天一次、每2天一次、每3天一次、每4天一次、每5天一次、每6天一次、每周一次、每10天一次、每两周一次、每三周一次或每月一次的给药间隔施用而无间歇。在其它优选实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐可以以每天两次、每周两次、每月两次、每天三次、每周三次、每月三次、每天四次、每周四次或每月四次的给药间隔施用而无间歇。在更优选的实施例中，所述普罗布考或其药学上可接受的盐每天两次、每天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次、每两周一次或每月一次施用。

通过举例，如本文所使用的，每周一次给药意指普罗布考或其药学上可接受的盐每周施用一次，即在七天的周期内，优选地在每周的同一天施用一次。以每周一次的给药间隔施用1,000mg剂量的施用的非限制性实例将需要每周日施用1,000mg的单个单位剂量。在优选实施例中，单位剂量不在相同或连续的几天施用，但是每周两次的剂量可以包含在每周周期或不同的每周周期内的相同或连续的几天施用单位剂量的给药时间表。

在一些实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1毫克/天到约10,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1毫克/天到约5,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1毫克/天到约1,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1毫克/天到约500毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1毫克/天到约100毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1毫克/天到约50毫克/天的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10毫克/天到约10,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10毫克/天到约5,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10毫克/天到约1,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10毫克/天到约500毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10毫克/天到约100毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约10毫克/天到约50毫克/天的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约50毫克/天到约10,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约50毫克/天到约5,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约50毫克/天到约1,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约50毫克/天到约500毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约50毫克/天到约1,000毫克/天的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约100毫克/天到约10,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约100毫克/天到约5,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约100毫克/天到约1,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约100毫克/天到约500毫克/天的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约500毫克/天到约10,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约500毫克/天到约5,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约500毫克/天到约1,000毫克/天的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1,000毫克/天到约10,000毫克/天的剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐以约1,000毫克/天到约5,000毫克/天的剂量施用。在本公开的各方面，普罗布考或其药学上可接受的盐以约5,000毫克/天到约10,000毫克/天的剂量施用。

在一些实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐可以作为单个单位剂量或多个单位剂量施用。通过举例，施用1,000mg的剂量可能需要施用1,000mg的单个单位剂量、500mg的两个单位剂量或250mg的四个单位剂量等，使得所有单个单位剂量的总和等于所叙述的剂量。通过进一步举例，施用1,000毫克/天的剂量可能需要每天施用1,000mg的单个单位剂量、500mg的两个单位剂量或250mg的四个单位剂量等，使得每天的所有单个单位剂量的总和等于所叙述的剂量。

在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐按间歇给药时间表施用。如本文所使用的，“间歇给药时间表”是指以规定的频率(例如每天)间歇地不连续施用药物。例如，在一些实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐可以每天施用，持续四周，随后停止两周，随后再次每天施用，持续四周。

在某些实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐最初以高于后续剂量的负荷剂量施用。在其它实施例中，普罗布考或其药学上可接受的盐最初以低于后续剂量的负荷剂量施用。

所有调配物都呈适于向人施用的剂量的形式。本文所述的药物调配物包含但不限于固体调配物(例如，片剂、胶囊和栓剂)、半固体调配物和液体调配物(例如，悬浮液和溶液)。通过举例，本文所考虑的药物调配物包含水性液体分散剂、自乳化分散剂、固溶体、脂质体分散剂、气雾剂、固体剂型、粉末、速释调配物、控释调配物、速熔调配物、片剂、胶囊、丸剂、贴剂、延迟释放调配物、延长释放调配物、脉动释放调配物、多颗粒调配物以及混合的速释调配物和控释调配物。在某些优选实施例中，药物调配物是片剂。在某些优选实施例中，药物调配物是液体。

在本公开的某些方面，普罗布考或其药学上可接受的盐与食物结合施用。在一些实施例中，食物是高脂肪食物。高脂肪食物的实例包含油、肉、全脂牛奶乳制品、黄油、鸡蛋、坚果、种子和鳄梨。

在一些方面，本文所公开的方法可能会导致如由美国卫生与公共服务部(U.S.Department of Health and Human Services)公布的不良事件通用术语标准(CTCAE)确定的治疗相关的不良事件(AE)。如本文所使用的，AE是已接受干预(药物、生物或其它干预)的受试者中的任何不幸医学事件的发生。事件的发生不一定与研究治疗有因果关系。因此，AE可以是任何不利或意外的事件(例如，包含异常的实验室发现)、症状或与使用药物产品暂时相关的疾病，无论是否被认为与药物产品相关。等级数是指AE的严重程度，其中1级是最不严重的，并且5级是与AE相关的死亡。

在某些方面，本文所公开的方法可能不会导致4级或5级不良事件。在其它方面，本文所述的治疗可能会导致不超过1级的不良事件。在另外的方面，本文所述的治疗可能会导致不超过2级的不良事件。在仍另外的方面，本文所述的治疗可能会导致不超过3级的不良事件。

本公开进一步涉及诊断受试者的线粒体功能障碍或遗传性线粒体疾病的方法，所述方法包括(a)对受试者的核酸或其一部分进行测序；(b)将受试者的核酸序列或其一部分与包括参考群体和病理性核酸突变的数据库中的一个或多个序列进行比较；以及(c)确定受试者的核酸序列是否具有所述数据库中的至少一种病理性突变。在某些实施例中，预测了病理性突变。在某些实施例中，确认了病理性突变。

本文公开的诊断方法的各方面可以进一步包括使用本文所述的给药时间表中的任一种向受试者施用例如约1mg到约10,000mg的普罗布考或其药学上可接受的盐或本文所述的任何中间剂量。

在某些实施例中，施用带来了选自以下的一种或多种临床症状的改善：疲劳、肌无力、神经肌肉功能障碍、运动不耐受、失衡问题、自主神经紊乱、胃肠道问题、视力问题、眼肌问题、视网膜问题、视神经问题、上睑下垂、头痛、脱水、周围神经病变、麻木、癫痫、癫痫发作、睡眠问题、情绪障碍、抑郁症、糖尿病、重量问题、肾功能障碍、高血脂症、肝脏疾病、睡眠呼吸暂停、自闭症谱系行为、行为问题、发展里程碑延迟、心律问题、心肌问题、心脏疾病、中风、言语问题、耳鸣、听力障碍、智力障碍、学习障碍、认知障碍、痴呆或其组合。

在某些实施例中，施用带来了疲劳改善。在某些实施例中，施用带来了肌无力改善。在某些实施例中，施用带来了神经肌肉功能障碍改善。在某些实施例中，施用带来了运动不耐受改善。在某些实施例中，施用带来了平衡问题改善。在某些实施例中，施用带来了自主神经紊乱改善。在某些实施例中，施用带来了胃肠道问题改善。在某些实施例中，施用带来了视力问题改善。在某些实施例中，施用带来了眼肌问题改善。在某些实施例中，施用带来了视网膜问题改善。在某些实施例中，施用带来了视神经问题改善。在某些实施例中，施用带来了上睑下垂改善。在某些实施例中，施用带来了头痛改善。在某些实施例中，施用带来了脱水改善。在某些实施例中，施用带来了周围神经病变改善。在某些实施例中，施用带来了麻木改善。在某些实施例中，施用带来了癫痫改善。在某些实施例中，施用带来了癫痫发作改善。在某些实施例中，施用带来了睡眠问题改善。在某些实施例中，施用带来了情绪障碍改善。在某些实施例中，施用带来了精神障碍改善。在某些实施例中，施用带来了抑郁症改善。在某些实施例中，施用带来了糖尿病改善。在某些实施例中，施用带来了重量问题改善。在某些实施例中，施用带来了肾功能障碍改善。在某些实施例中，施用带来了高血脂症改善。在某些实施例中，施用带来了肝脏疾病改善。在某些实施例中，施用带来了睡眠呼吸暂停改善。在某些实施例中，施用带来了自闭症谱系行为改善。在某些实施例中，施用带来了行为问题改善。在某些实施例中，施用带来了发展里程碑延迟改善。在某些实施例中，施用带来了心律问题改善。在某些实施例中，施用带来了心肌问题改善。在某些实施例中，施用带来了心脏疾病改善。在某些实施例中，施用带来了中风改善。在某些实施例中，施用带来了言语问题改善。在某些实施例中，施用带来了耳鸣改善。在某些实施例中，施用带来了听力障碍改善。在某些实施例中，施用带来了智力障碍改善。在某些实施例中，施用带来了学习障碍改善。在某些实施例中，施用带来了认知障碍改善。在某些实施例中，施用带来了痴呆改善。

本文还公开了通过使用测量临床上显著的改善的复合端点来管理患有线粒体功能障碍或线粒体疾病的患者和/或评估所述患者对治疗性干预的反应的方法，所述方法包括(i)测量影响患有线粒体疾病的患者的相关症状和/或普遍症状的一组多个子仪器；(ii)使用所述子仪器中的两个或更多个子仪器对患者进行基线评估；(iii)使用相同的子仪器对患者进行后续评估；以及(iv)用于将后续评估的结果与基线评估进行比较的算法。

本文还公开了计算复合测量结果的方法，其中所述方法包括：(i)采用两个或更多个子仪器测量所述临床症状中的一种或多种临床症状随时间的变化，(ii)对于所述两个或更多个子仪器中的每个子仪器，基于如使用所述子仪器测量的所述一种或多种临床症状的变化，将所述受试者归类为(a)响应者或非响应者，(b)临床类别的成员，或者(c)度量范围的成员；以及(iii)采用算法将从所述两个或更多个子仪器获得的所述测量结果组合成单个复合测量结果，其中所述算法包括(a)单独评估从所述两个或更多个子仪器获得的每个测量结果的变化，之后将每个测量结果组合成单个复合测量结果，或者(b)使在单个时间点处从所述两个或更多个子仪器获得的测量结果组合，并产生针对所述单个时间点的单个复合测量结果，并且然后将针对所述单个时间点的所述单个复合测量结果与针对不同的单个时间点的单个复合测量结果进行比较。

在某些实施例中，所述两个或更多个测量子仪器选自运动功能量度、六分钟步行测试、两分钟步行测试、修订的疲劳影响量表、弗里德赖希氏共济失调评定量表、患者报告的结果测量信息系统胃肠道症状量表、30秒椅子站立测试、通过测压测试获得的肌肉力量、新城线粒体疾病成人量表、新城线粒体疾病小儿量表、36项调查简表、临床总体印象、患者的总体印象、哥伦比亚自杀严重程度评定量表、神经病变损伤评分、偏头痛残疾评估测试、抑郁症状学快速清单——自我报告、蒙特利尔认知评估、纽约心脏学会功能分类、糖尿病健康概况、眼球运动评估、边缘反射距离、8个凝视方向上的眼球运动和注视、眼球扫视程度、视觉功能测试、最小分辨角对数、佩里-罗布森评分、汉弗莱视野平均偏差、患者报告的MitoPC症状变化或其组合。

在某些实施例中，所述两个或更多个测量子仪器是针对线粒体功能障碍或线粒体疾病的经验证的结果量度。

实例

提供以下内容来进一步描述本文所公开的实施例中的一些实施例。以下内容旨在说明而非限制所公开的实施例。

实例1：用于评估普罗布考在患有遗传学确认的线粒体疾病的成人中的安全性和功效的II期随机、双盲、安慰剂对照、两周期交叉研究

以下描述了评估普罗布考或其药学上可接受的盐在患有遗传学确认的线粒体疾病的受试者中的功效的临床试验的非限制性实例。

A.研究目的

主要目的

除了其它方面外，本研究的主要目的是评估(i)与安慰剂相比，通过测量在通过线粒体疾病个体化复合(MitoPC)端点评估时在16周治疗期内作为响应者的受试者的比例的普罗布考或其药学上可接受的盐的功效，所述测量是基于患有线粒体疾病的患者中最普遍的症状，以及(ii)使用不良事件(AE)发生率、实验室值和心电图结果评估的普罗布考或其药学上可接受的盐的安全性。选择用于包含在MitoPC端点中的症状是基于对成人和小儿线粒体疾病患者中的线粒体疾病症状的调查。Zolkipli-Cunningham等人,《公共科学图书馆：综合》2018；13(5):e0197513。

次要目的

本研究的关键次要目的是评估与安慰剂相比在16周治疗期内如通过六分钟步行测试(6MWT)测量的普罗布考或其药学上可接受的盐的功效。其它次要目的包含评估与安慰剂相比在16周治疗期内普罗布考或其药学上可接受的盐的功效。将对所有受试者进行以下评估：

●两分钟步行测试(2MWT)

●运动功能量度——32项(MFM-32)

●修订的疲劳影响量表(MFIS)

●弗里德赖希氏共济失调评定量表(FARS)

●患者报告的结果测量信息系统——胃肠道(PROMIS-GI)

●30秒椅子站立测试(30CST)

●分4组的通过测压测试获得的肌肉力量(MSM-4)

●新城线粒体疾病成人量表(NMDAS)

●抑郁症状学快速清单——自我报告(QIDS-SR)

●36项调查简表躯体健康总评(SF-36PCS)

●临床总体印象(CGI)

●患者的总体印象(PGI)

●患者报告的初始MitoPC症状(PRIMS)

●患者报告的MitoPC症状变化(PRMSC)

●哥伦比亚自杀严重程度评定量表(CSSRS)

将针对来自第一次研究访视(访视1)中评估的结果满足或超过用于量化的阈值的所有受试者执行以下评估：

●神经病变损伤评分——下肢(NIS-LL)

●偏头痛残疾评估测试(MIDAS)

●蒙特利尔认知评估(MoCA)

●纽约心脏学会功能分类(NYHAFC)

●糖尿病健康概况——18项(DHP-18)

●眼球运动评估(OMA)，其包括：

○边缘反射距离(MRD1)——上睑下垂的量度；

○8个凝视方向上的眼球运动和注视(OMF8)——对眼球运动和注视的评估

○眼球扫视程度(DOS)——对眼扫视运动的潜伏期、精确度和共轭性的评估。

探索性目的

本研究的探索性目的包含评估与安慰剂相比在16周治疗期内如通过以下测量的普罗布考或其药学上可接受的盐的安全性和功效：

●实验室生物标志物量度(血液和尿液两者中)

●旷课和/或旷工天数

●住院天数

●自杀倾向评估(哥伦比亚自杀严重程度评定量表，CSSRS)

●无事件生存率

●第一分钟6MWT周期与第六分钟6MWT周期之间的平均速度变化

●视觉功能测试(VFT)，其包括：

○最小分辨角对数(LogMAR)

○佩里-罗布森评分(PRS)

○视野平均偏差(VFMD)。

B.资格

纳入标准(研究对年龄为18到75岁的所有性别公开)：

●受试者必须能够提供参与的书面知情同意书；并且根据研究者的意见，愿意并且能够满足研究的要求；

●具有明确的原发性致病线粒体DNA突变或与线粒体呼吸链功能降低相关的核DNA缺陷的受试者；

●患有如根据NMDAS上的最低评分6定义的至少中度或严重症状的线粒体疾病的受试者；

●满足或超过至少一个MitoPC子仪器的阈值分数的受试者；

●在登记时和贯穿整个研究期期间只有妊娠测试结果为阴性的女性受试者；以及

●在整个研究期期间，性活跃的受试者必须采用可接受的避孕方法。

排除标准：

●对普罗布考有任何已知超敏反应或不良反应的受试者；

●有任何QTc延长可能性的受试者：

○QTc间隔大于450毫秒的受试者；

○具有引起长QT综合征(LQTS)的已知基因突变的受试者；

○在引起足以将受试者归类为纽约心脏学会功能分类(NYHAFC)的III级或IV级的肥厚型心肌病的已知基因突变的受试者；

○由亚利桑那州教育与治疗研究中心(AZCERT)报告的延长QT间隔并与尖端扭转(TdP)的已知风险相关的已知风险相关的伴随药物的受试者；

○具有包含临床上显著的低钾血症或心动过缓的TdP危险因素受试者；

○患有严重室性心律失常的受试者(例如，多灶性室性期前收缩频繁发作)；

○患有心房颤动(包含阵发性心房颤动)的受试者；

○NYHAFC为III或IV级的受试者；

○患有充血性心力衰竭或不稳定型心绞痛的受试者；

●患有活动性真菌感染、急性血液、肺或膀胱感染、临床上显著的肝功能或肾功能障碍和/或病毒感染(包含人免疫缺陷病毒或乙型或丙型肝炎病毒)的受试者；

●具有临床上显著的实验室异常的受试者，所述实验室异常包含但不限于：

○升高的结果大于γ-谷氨酰转移酶正常上限的2.5倍；

○升高的结果大于血清肌酐正常上限的3倍；或

○估计的肾小球滤过率(eGFR)低于60毫升/分钟/1.73平方米。

●具有根据研究者的意见会干扰研究的安全完成的任何医疗状况或异常实验室结果的受试者；

●随机化前一个月内使用任何研究产品的受试者；

●筛查时正在积极进行母乳喂养的受试者；

●具有已知或怀疑酗酒和/或药物滥用的受试者；以及

●有自杀意念、行为和/或企图的历史或目前有自杀意念、行为和/或企图的受试者。

C.研究设计

总体设计

所述研究是对普罗布考或其药学上可接受的盐进行的随机、双盲、安慰剂对照、2周期的交叉研究。本研究将招募满足具体纳入标准和排除标准的患有遗传学确认的线粒体疾病的受试者。研究设计如图1中所描绘。

每位参与者将参与研究持续大约61到65周，这包含以下三个阶段：(1)治疗前(最多8周)；(2)双盲治疗(48周)；(3)治疗后随访(9周)。

积极参与将持续大约15个月并且将包含对临床研究中心的最多13次现场访视。如果突然出现安全问题，则可能需要另外的现场访视。

在加入研究之前，潜在受试者将完成预筛选评估以确定潜在的研究资格。受试者的筛选访视(访视1)将安排为不晚于本次预筛选评估后的90天。将招募最多44位合格受试者并对其进行随机化，目的是30位可评估的受试者完成临床试验。

预治疗(筛选)阶段

满足资格标准的受试者将在访视1时筛选出并且完成治疗前阶段。受试者将完成其活跃临床症状的标准化摄入。研究者将讨论每位受试者的疾病表现，使得受试者充分了解其疾病的严重程度和疾病的具体症状的相关性。然后，每位受试者将：(1)通过完成所有五种具体症状的五个MitoPC子仪器来鉴别MitoPC菜单上的五种具体症状存在或不存在，无论此类症状是否存在；(2)(通过完成PRIMS评估)指示每个症状是否具有个体影响，以及受试者是否寻求改善；以及(3)(通过完成PRIMS评估)按照对受试者的重要性和对其生活的负面影响程度对症状进行排序。

另外，受试者还将完成初级和次级端点的所有评估和测试。表1中提供了研究评估、所评估症状、阈值、最小临床重要差异(MCID或M)值以及对应目的或端点的完整列表。

表1：研究评估

在后续现场访视期间，将施用所有MitoPC子仪器和大多数次级评估和测试。如果受试者在其标准化摄入期间没有报告或没有表现出这些症状，则在后续访视期间将不施用一些症状特异性次级测试。

将完成并审查所有筛选程序，以确认研究的资格和总体受试者安全性。在任何治疗期之前的至少30天，受试者必须按照旨在在整个研究持续时间保持不变的稳定的护理标准治疗方案。

双盲治疗阶段

在访视2时，将以1:1的比例将受试者随机分配到两种不同治疗顺序之一：

(1)治疗顺序A(普罗布考/安慰剂)：在治疗期1期间每天两次将500mg普罗布考或其药学上可接受的盐与食物一起服用，持续16周，随后是16周的清除期，并且然后在治疗期2期间每天两次服用安慰剂，持续16周；以及

(2)治疗顺序B(安慰剂/普罗布考)：在治疗期1期间每天两次将安慰剂与食物一起服用，持续16周，随后是16周的清除期，并且然后在治疗期2期间每天两次服用500mg普罗布考或其药学上可接受的盐，持续16周。

在治疗阶段(治疗期1、清除期、治疗期2)期间，受试者将大约每8周接受一次安全性和功效评估。双盲治疗阶段完成之后，受试者将开始治疗后阶段，所述治疗后阶段包含现场和/或电话安全性评估。表2中总结了研究活动的完整时间表。

表2：研究活动

在整个研究期期间要从每个受试者中抽取的血液总量大约为750mL。

由于普罗布考有可能延长经校正的QT间隔(QTc)，因此贯穿三个研究阶段将在基线处和每次研究访视时进行三次心电图(ECG)。将在与ECG大致相同的时间处收集血清和血浆药物水平，以与QTc测量结果相关。

停止研究参与

每个受试者在其整个参与期间都将针对QTc延长而被监测，并且如果需要的话，如果QTc延长比基线多60毫秒或绝对QTc大于500毫秒，则将受试者从研究中安全地移除。只有在QTc间隔返回到基线的10毫秒内且绝对QTc小于或等于450毫秒时，才可以考虑再次使用研究药物进行挑战。

另外，将密切监测受试者的任何心血管病状或异常，并且如果需要的话，将受试者从研究中移除并转交给心脏病专家进行咨询。

所有不良事件(AE)，无论严重程度或等级如何，都将被密切监测并且如果需要的话转交临床护理。

根据不良事件通用术语标准(CTCAE)分类的严重程度为3级或更严重的任何严重不良事件(SAE)或AE将立即由研究者审查，并且如果继续治疗，则研究者必须对继续治疗的效益风险进行评估并文件记录。

治疗后阶段

完成双盲治疗阶段的受试者将继续进行治疗后阶段，所述治疗后阶段包含最少两次现场和/或电话安全性评估。

D.端点

初级端点

初级功效端点将通过比较“MitoPC响应者”在药物治疗组和安慰剂治疗组中的比例(各自持续16周交叉研究的治疗期)来进行评估。

表3中总结了五种MitoPC子仪器和所评估的相关症状。

表3：MitoPC

在每次访视时，将向所有受试者施用所有MitoPC子仪器，但只有“合格的子仪器”(其中筛选访视1中的子仪器结果满足或超过预定义的阈值)会被包含在MitoPC初级端点分析中。

在每个治疗期期间，通过将所述子仪器的测得的变化与已建立的最小临床重要差异(MCID或M)进行比较，每个受试者将被归类为每个“合格的子仪器”的“子仪器响应者”或“子仪器非响应者”(表4)。

表4：MitoPC子仪器响应者

“子仪器响应者”被定义为相对于治疗期基线达到等于或超过所述子仪器的MCID的改善(即，评估为“较好”)的受试者。

如果受试者没有达到所述子仪器的MCID改善(即，评估为“中等或较差”)，则所述受试者被视为“子仪器非响应者”。

然后，受试者将被归类为“MitoPC响应者”或“MitoPC非响应者”。“MitoPC响应者”是在其它“合格的子仪器”中的任何合格的子仪器中不存在临床意义的恶化的情况下作为所述受试者的个性化MitoPC中最多五个“合格的子仪器”中的至少一个合格的子仪器的“子仪器响应者”的受试者(表5)。

“MitoPC响应者”是不作为所述受试者的个性化MitoPC中最多五个“合格的子仪器”中的至少一个合格的子仪器的“子仪器响应者”或者在其它“合格的子仪器”中的任何一个合格的子仪器中经历具有临床意义的恶化的受试者(表5)。

表5：MitoPC响应者定义

初级功效端点将通过比较“MitoPC响应者”在药物治疗组和安慰剂治疗组中的比例(各自持续16周交叉研究的治疗期)来进行评估。

MitoPC子仪器阈值。对于每个子仪器，阈值被定义为对应于文献中的“轻度”疾病或症状严重程度评级或其临床等效物的评分。这些值是由线粒体疾病临床医生和专家委员会通过文献回顾和评估确定的。Brennan等人,《美国胃肠病学杂志(Am.J.Gastroenterol.)》2014；109:1804-1814。Flachenecker等人,《多发性硬化症(Multiple Sclerosis)》2002；8:523-526。Subramony等人,《神经病学(Neurology)》2005；64:1261-1262。Berard等人,《神经肌肉病症(Neuromuscular Disorders)》2005；15:463-470。Enright和Scherrill,《美国呼吸和重症监护医学杂志(Am.J.Respir.Crit.CareMed.)》1998；158:1384-1387。

这些阈值用于患者资格鉴定和MitoPC端点的统计分析，并且在随后的子仪器测试的临床施用中不一定要考虑。

低于阈值的分数或值指示无症状个体和一般人群的典型值。表6中陈述了每个子仪器的导出阈值。

表6：MitoPC子仪器阈值

关键次级端点和其它次级端点

本研究的关键次级端点是从治疗期基线开始的6MWT评分中的变化。其它次级端点是在以下端点中从治疗期基线开始的变化：

●在8周和16周的治疗期内，以下中的每一项的MitoPC“子仪器响应者”的比例：6MWT；MFM-32；MFIS；FARS和PROMIS-GI。

●从治疗基线到第8周和第16周的MitoPC子仪器评分变化(6MWT除外)。

●以下MitoPC子仪器中的每个子仪器的从治疗期基线开始的变化：6MWT；MFM-32；MFIS；FARS和PROMIS-GI。

●以下另外的功效端点中的每个功效端点的从治疗期基线开始的变化：30CST；NMDAS；QIDS-SR；SF-36PCS；CGI；PGIC；NIS-LL；MIDAS；MoCA；NYHAFC；DHP-18；MRD1；OMF-8和DOS。

探索性端点

另外，如通过以上列出的探索性目的进行测量的，包含与安慰剂相比在16周治疗期内评估普罗布考或其药学上可接受的盐的安全性和功效的探索性目的。

E.统计和分析

将根据主办方的临床研究组织的基于良好临床实践的原则的标准操作程序来收集和处理数据。

用于评估初步评估的统计方法

MitoPC统计方法：初步评估是以先前定义的“MitoPC响应者”的比例将用活性剂(普罗布考或其药学上可接受的盐)进行的治疗与用安慰剂进行的治疗进行比较。

具体地，如果：P

P

则所关注的初步假设测试是：H

H

“MitoPC响应者”定义使研究的结果简化为二分结果：响应者对非响应者。这些二分结果可以总结在以下列联表(表7)中。

表7：列联表

在普罗布考或其药学上可接受的盐的安慰剂对照随机双盲交叉研究中，接受活性剂治疗的作为“MitoPC响应者”的受试者的比例为(a+c)/n。类似地，接受安慰剂治疗的作为“MitoPC响应者”的受试者的比例为(a+b)/n。由于a是两个比例所共有的，因此b和c不一致对对于初步假设测试至关重要。

将使用麦克尼马尔氏测试(McNemar's test)来测试受试者在用普罗布考或其药学上可接受的盐治疗后成为“MitoPC响应者”的概率是否与在用安慰剂治疗后成为“MitoPC响应者”的概率相同的零假设。具体地，麦克尼马尔氏确切二项式测试将用于这些计算，因为不一致对的预期数量可能相对较小(<25)。

样品大小：麦克尼马尔氏确切测试的样品大小计算基于分配到上述不一致配对类别的受试者的预期比例(b/n和c/n)。假设40％的受试者将被归类为“活性剂响应者/安慰剂非响应者”，并且5％的受试者将被归类为“活性剂非响应者/安慰剂响应者”，则考虑到I型错误率为0.05的情况下，至少30名可评估的受试者需要完成研究，以确保至少85％的效能用于测试零假设。

假设流失率不超过32％，则需要招募44位受试者/对其进行随机化以得到最少30位可评估的受试者(即，完成整个研究的受试者)。

分析群体：将为以下分析群体中的至少一种分析群体执行所有分析。细节将在SAP中描述。

●意向治疗(ITT)群体：接受至少一剂研究药物并具有至少一个后基线功效数据点的所有受试者将被包含在ITT群体中。受试者数据将与对受试者进行的随机化的治疗分配包含在一起。

●符合方案(PP)群体：被包含在ITT群体中的不具有被认为对端点解释有意义的方案偏离或缺失数据的受试者将被包含在PP群体中。

●安全性群体：接受至少一剂研究药物(包含安慰剂)的所有受试者都将被包含在安全性评估中。

●将按类型、身体系统、严重程度和与研究药物的关系总结AE的频率。对SAE(如果有的话)进行详细描述。AE发生率将用对应的确切二项式95％双侧置信区间进行总结。

用于评估关键次级端点和其它次级端点的统计方法

对于6MWT的评估，将在16周时计算从治疗期基线开始的变化。将使用线性混合模型将普罗布考或其药学上可接受的盐与安慰剂进行比较，所述线性混合模型包含将序列、治疗和周期的术语作为固定效果并且将嵌套在序列内的受试者作为随机效果。治疗期基线6MWT评分也将包含在模型中，但如果处于不具有统计学意义的0.05水平，则所述评分将被移除。将对模型的方差假设的正态性和异质性进行评估，并且如果适当的话考虑非参数方法。

将针对每个时间点处的6MWT评分和其它次级端点以及从治疗期基线开始的变化呈现描述性统计(N、平均值、标准偏差、最小值、中值、最大值)。

用于评价探索性端点的统计方法

将对每个子仪器测定并总结16周内的MitoPC“子仪器响应者”的比例。

将对每个MitoPC子仪器的响应者和非响应者进行总结。将使用麦克尼马尔氏测试来比较“子仪器响应者”在普罗布考组和安慰剂组中的比例。

将对MitoPC子仪器评分中的每个子仪器评分以及另外的功效和探索性端点计算从治疗期基线开始的变化。将对每个时间点处的评分以及从治疗期基线开始的变化计算描述性统计。将使用针对6MWT描述的相同统计方法在从治疗期基线评分开始的变化方面将普罗布考或其药学上可接受的盐与安慰剂进行比较。

将使用频率计数和百分比以及描述性统计对受试者安置和人口统计进行总结。将根据经历AE的受试者数量和通过治疗的AE数量对AE进行编码和总结。将使用描述性统计按时间点总结临床实验室结果、生命体征和ECG。将通过治疗计算和总结QTc值并使所述值与时间匹配的PK结果图形关联。

F.药代动力学分析

将在与ECG大致相同的时间处收集用于测定血清或血浆药物水平的血液样品，以评估与QTc测量结果的相关性。PK样品将允许进行群体PK分析，以及PK结果与任何观察到的QTc延长之间的相关性分析。

G.安全性评估

安全性评估将包含AE和严重AE(SAE)的发生率、频率和严重程度，包含从基线到计划时间点的以下具有临床意义的变化：体检结果；生命体征；临床实验室结果；ECG读数；以及自杀倾向评估。

本领域的技术人员将理解，可以对本发明的优选实施例进行许多改变和修改，并且可以在不脱离本发明的精神的情况下进行此类改变和修改。因此，所附权利要求旨在覆盖落入本发明的真实精神和范围内的所有此类等效变化。

表8：与线粒体功能障碍相关的基因类别

表9：线粒体疾病和相关基因