一种检测肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围的方法

摘要

本发明公开了一种检测肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围的方法，涉及医学检验技术领域。本发明包括探针模板的制备、基因探针的制备和肿瘤组织边界检测，其中探针制备主要采用PCR扩增技术。本发明通过基于基因探针的标记原理，利用分子间杂交的方法与目标肿瘤细胞或肿瘤基质细胞的基因相结合来产生杂交信号，能够直观准确地将肿瘤细胞或肿瘤基质细胞在宿主组织中显示出来；由于肿瘤细胞主要为以DNA为遗传物质的真核细胞，因此通过制作cDNA探针标记作为检测方法，能够使杂交信号被放大的前提下确保探针的渗透性，使其显影更准确，标记肿瘤细胞边界更清晰；通过利用PCR技术制备探针，能够缩短检测周期，使检测更高效。

说明书

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，特别是涉及一种检测肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围的方法。

背景技术

肿瘤是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物，因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物；由于新生物的细胞特性及对机体的危害性程度，常见的肿瘤主要包括良性肿瘤和恶性肿瘤两大类，其中恶性肿瘤通常是指癌症。

虽然在现有医学手段下，对于肿瘤能够做到及时发现并进行治疗，但通常也存在手术难以完全切除的肿瘤，其主要原因就是在早期肿瘤筛查中并未确定肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞的分布范围，导致无法完全切除，进而使肿瘤再生或转移，严重影响治疗和危害人体健康；因此，为了能够解决上述的问题，我们设计一种检测肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围的方法，解决现有的医学手段对于肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围难以检测导致手术难以完全切除肿瘤的问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种检测肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围的方法，主要基于基因探针的标记原理，通过分子杂交与目标肿瘤细胞或肿瘤基质细胞基因结合，产生杂交信号，并将其从宿主组织中显示出来，包括以下几个步骤：

步骤S1、探针模板的制备，将宿主体内待检测肿瘤组织细胞或肿瘤基质细胞进行取样，并将对应基因库提取培养，制备探针模板；取样过程主要是针对已经确定肿瘤存在的宿主进行针对性提取；

步骤S2、基因探针的制备，利用体外转录技术将步骤S1中的目标基因探针模板转录培养基因探针，并进行探针标记；由于肿瘤细胞为真核细胞，其遗传物质主要为DNA，因此所制备的基因探针应严格符合肿瘤细胞的生理特性和遗传特性；

步骤S3、肿瘤组织或肿瘤基质细胞检测，将步骤S2中制备的基因探针注入宿主肿瘤细胞进行正常合成代谢反应，并进行显影观测，确定肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围。

进一步地，所述探针模板的制备方法主要包括以下几个步骤：

步骤1.1、目标细胞取样，从宿主体内将目标肿瘤细胞提取出来，并进行组织培养，主要通过生物复制的方式进行基因组的扩增，使得肿瘤细胞的全部基因得到最大化表达；

步骤1.2、建立肿瘤基因组文库，将步骤1.1中的肿瘤组织培养液离心处理，将肿瘤细胞破碎后，分离细胞DNA，再利用酶切法将DNA切成小段，主要制作肿瘤细胞的基因组文库；

步骤1.3、特异性基因片段筛选，利用其它细胞基因探针与步骤1.2中的肿瘤基因组文库杂交筛选特异性片段作为探针模板；在利用其它细胞基因探针时，可使用宿主机体组织内的正常组织细胞的基因探针和其他种类肿瘤细胞的基因探针。

进一步地，所述基因探针的制备方法为利用PCR技术向步骤1.3中制备的探针模板中添加带有标记的随机引物，并进行多代复制，能够针对性地将基因文库中的小片段进行反复复制，提高探针制备的准确性。

进一步地，所述肿瘤组织或肿瘤基质细胞分布范围的观测方法主要包括以下几个步骤：

步骤3.1、采用注射法将步骤S2中制备的基因探针注入宿主肿瘤组织细胞中，参与肿瘤细胞内部的遗传代谢反应；

步骤3.2、通过基因探针的标记自显影现象或利用彩超设备对病灶部位进行直观观测，确定肿瘤组织或肿瘤基质细胞分布范围。

进一步地，所述步骤1.2中酶切法所使用的酶为限制性核酸内切酶，包括TypeⅠ限制酶、TypeⅡ限制酶和TypeⅢ限制酶，多种酶共同作用，能够将DNA片段剪切得更加精准，便于特异性片段的筛选。

进一步地，所述步骤1.3中制备的特异性基因探针模板为cDNA片段，具备cDNA放大特异性信号和片段增强渗透性两种优点，能够使检测结果更加清晰准确。

进一步地，所述步骤S2中的PCR技术直接采用PCR扩增仪为操作仪器，所述随机引物为5′端和3′端混合引物，两种引物同时作用加快PCR扩增速度，并产生多种不同种类的基因探针，使基因探针的可选择性更广。

进一步地，所述步骤S2中制备的基因探针为DNA探针。

本发明具有以下有益效果：

本发明通过基于基因探针的标记原理，利用分子间杂交的方法与目标肿瘤细胞或肿瘤基质细胞的基因相结合来产生杂交信号，能够直观准确地将肿瘤细胞或肿瘤基质细胞在宿主组织中显示出来；由于肿瘤细胞主要为以DNA为遗传物质的真核细胞，因此通过制作cDNA探针标记作为检测方法，能够使杂交信号被放大的前提下确保探针的渗透性，使其显影更准确，标记肿瘤细胞边界更清晰；通过利用PCR技术制备探针，能够缩短检测周期，使检测更高效。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明的一种检测肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围的方法流程示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

在本发明的描述中，需要理解的是，术语“上”、“中”、“外”、“内”等指示方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的组件或元件必须具有特定的方位，以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

请参阅图1所示，本发明为一种检测肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围的方法，主要基于基因探针的标记原理，通过分子杂交与目标肿瘤细胞或肿瘤基质细胞基因结合，产生杂交信号，并将其从宿主组织中显示出来，包括以下几个步骤：

步骤S1、探针模板的制备，将宿主体内待检测肿瘤组织细胞或肿瘤基质细胞进行取样，并将对应基因库提取培养，制备探针模板；取样过程主要是针对已经确定肿瘤存在的宿主进行针对性提取；

步骤S2、基因探针的制备，利用体外转录技术将步骤S1中的目标基因探针模板转录培养基因探针，并进行探针标记；由于肿瘤细胞为真核细胞，其遗传物质主要为DNA，因此所制备的基因探针应严格符合肿瘤细胞的生理特性和遗传特性；

步骤S3、肿瘤组织或肿瘤基质细胞检测，将步骤S2中制备的基因探针注入宿主肿瘤细胞进行正常合成代谢反应，并进行显影观测，确定肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围。

优选地，探针模板的制备方法主要包括以下几个步骤：

步骤1.1、目标细胞取样，从宿主体内将目标肿瘤细胞提取出来，并进行组织培养，主要通过生物复制的方式进行基因组的扩增，使得肿瘤细胞的全部基因得到最大化表达；

步骤1.2、建立肿瘤基因组文库，将步骤1.1中的肿瘤组织培养液离心处理，分离细胞DNA，再利用酶切法将DNA切成小段，主要制作肿瘤细胞的基因组文库；

步骤1.3、特异性基因片段筛选，利用其它细胞基因探针与步骤1.2中的肿瘤基因组文库杂交筛选特异性片段作为探针模板；在利用其它细胞基因探针时，可使用宿主机体组织内的正常组织细胞的基因探针和其他种类肿瘤细胞的基因探针。

优选地，基因探针的制备方法为利用PCR技术向步骤1.3中制备的探针模板中添加带有标记的随机引物，并进行多代复制，能够针对性地将基因文库中的小片段进行反复复制，提高探针制备的准确性。

优选地，肿瘤组织或肿瘤基质细胞分布范围的观测方法主要包括以下几个步骤：

步骤3.1、采用注射法将步骤S2中制备的基因探针注入宿主肿瘤组织细胞中，参与肿瘤细胞内部的遗传代谢反应；

步骤3.2、通过基因探针的标记自显影现象或利用彩超设备对病灶部位进行直观观测，确定肿瘤组织或肿瘤基质细胞分布范围。

优选地，步骤1.2中酶切法所使用的酶为限制性核酸内切酶，包括TypeⅠ限制酶、TypeⅡ限制酶和TypeⅢ限制酶，多种酶共同作用，能够将DNA片段剪切得更加精准，便于特异性片段的筛选。

优选地，步骤1.3中制备的特异性基因探针模板为cDNA片段，具备cDNA放大特异性信号和片段增强渗透性两种优点，能够使检测结果更加清晰准确。

优选地，步骤S2中的PCR技术直接采用PCR扩增仪为操作仪器，随机引物为5′端和3′端混合引物。

优选地，步骤S2中制备的基因探针为DNA探针。

需要进一步说明的是，结合附图，本发明的检测肿瘤组织边界或肿瘤基质细胞分布范围的方法主要包括以下几个步骤：

步骤一、探针模板的制备，从宿主体内提取目标肿瘤细胞并进行组织培养，离心分离DNA并添加限制酶将DNA切成小段，再利用其他细胞的基因探针筛选特异性片段；

步骤二、基因探针的制备，以步骤一中的特异性片段为模板，利用PCR扩增仪进行初步扩增，增加模板数量，再添加随机引物进行探针制备；

步骤三、肿瘤组织边界检测，利用注射法将探针注入肿瘤组织细胞中，通过标记自显影或彩超技术直接观测。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。