一种特非那定有关物质的检验分离方法

摘要

本发明公开了一种特非那定有关物质的检验分离方法，包括以下步骤：1）分别取各杂质及TFND适量，加70%乙腈制成10µg/mL的单一溶液，在190nm～400nm波长进行全波长扫描，获得各物质的扫描波长，确定紫外扫描检测波长；2）配制用于检测的混合溶液；3）色谱条件：色谱柱：MZ‑ANALYTICAL Column 250*4.6mm 100ODS‑3 5μm；流动相A：乙腈‑磷酸盐=20︰80；流动相B：乙腈；梯度洗脱：0min，60%A，40%B；3min，55%A，45%B；20min，20%A，80%B；溶剂：乙腈‑磷酸盐=45：55；波长：217nm；流速：1.0mL/min；柱温：30‑35℃；进样量：20μL；4）取混合溶液进样，记录色谱图，特非那定与各杂质均获得分离。本发明的特非那定与杂质分离度大于5.0，各杂质间、其它已知杂质与特非那定间的分离度均大于1.5，且主峰和未知杂质分离度可达3.5，符合要求。

说明书

技术领域

本发明属于药物杂质检验技术领域，具体涉及一种特非那定(Terfenadine) 有关物质的检验方法。

背景技术

特非那定是特非那定颗粒(商品名：敏迪)的主要成分，用于季节性和非季节性过敏性鼻炎、荨麻疹及枯草热的治疗。特非那定是特异H1受体阻断剂，在抗组胺有效剂量下，特非那定是及其代谢产物均不易透过血脑屏障，故极少有中枢抑制作用。

特非那定(Terfenadine)是Carr等于1973年创制、美国Merrell制药公司于 1981年首先上市，目前已在欧美各国广泛使用。中国药典2010版二部检测项下并没有对该片剂有关物质的检测进行规定，而在世界上的其他国家，相关规定也并不明确，因此为进一步有效控制药品质量、完善质量标准，需对特非那定有关物质的检验。

陈柳生等在“特非那定片有关物质的检测方法研究”一文中公开了建立特非那定片的有关物质高效液相色谱检查法(HPLC)。方法采用HPLC法，使用 HypersilPhenyl2(250×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为缓冲液-乙腈-三乙胺(650∶ 350∶3；检测波长为220nm；流速为1.5mL·min^－1；柱温为室温。结果该色谱条件下，杂质与主成分能完全分离，重复性试验RSD为0.27％(n＝6)，最低检测量为0.005μg，有关物质含量均为0.3％。结论该方法简便、准确、灵敏度高，可用于特非那定片中杂质含量的测定。该方法在一定程度上实现杂质与主成分能完全分离，但当杂质含量较多的时候，并不能完全有效实现分离，还不能完全满足使用需求。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种特非那定有关物质的检验分离方法，实现特非那定有关物质的快速全部分离。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种特非那定有关物质的检验分离方法，包括以下步骤：

1)分别取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质J、TFND适量，加70％乙腈制成10μg/mL的单一溶液，在 190nm～400nm波长进行全波长扫描，获得各物质的扫描波长，确定紫外扫描检测波长；

2)配制混合溶液：取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质J、TFND各适量，加溶剂配制成每1mL含杂质 A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质 J各1.0μg、TFND 1.0mg的混合溶液；

3)色谱条件：色谱柱：MZ-ANALYTICAL Column 250*4.6mm 100ODS-3 5μm；流动相A：乙腈-磷酸盐＝20︰80；流动相B：乙腈；梯度洗脱：0min，60％A， 40％B；3min，55％A，45％B；20min，20％A，80％B；溶剂：乙腈-磷酸盐＝45： 55；波长：217nm；流速：1.0mL/min；柱温：30-35℃；进样量：20μL；

4)取混合溶液进样，记录色谱图，特非那定与各杂质均获得分离。

步骤1)中，检测波长为217nm。

步骤3)中，磷酸盐溶液配制方法为：3.58g十二水合磷酸氢二钠溶于1000mL 水中，磷酸调pH至6.0-6.3，再加入1.92g SDS溶解过滤。

步骤3)中，磷酸盐溶液的pH为6.0。

步骤3)中，流动相B：乙腈-甲醇＝95︰5。

步骤3)中，梯度洗脱：0min，40％A，60％B；10min，40％A，60％B；20min， 20％A，80％B。

步骤3)中，柱温：30℃。

步骤3)中，梯度洗脱：0min，40％A，60％B；8min，40％A，60％B； 20min，20％A，80％B。

有益效果：与现有技术相比，本发明的特非那定有关物质的检验分离方法，特非那定与杂质A分离度大于5.0，各杂质间、其它已知杂质与特非那定间的分离度均大于1.5，符合要求，且主峰和主峰后面的未知杂质分离度可达3.5，确定本方法可作为检验方法使用，具有很好的实用性。

附图说明

图1是物质的紫外吸收扫描波长图；

图2是实施例1的混合溶液的色谱图；

图3是实施例2的混合溶液的色谱图；

图4是实施例3的混合溶液的色谱图；

图5是实施例4的混合溶液的色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明做进一步的说明。

实施例1

一种特非那定有关物质的检验分离方法，过程如下：

1)分别取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质J、TFND适量，加70％乙腈制成10μg/mL的单一溶液，在 190nm～400nm波长进行全波长扫描，获得各物质的扫描波长，如表1和图1所示。

表1波长选择结果表

由图1看出，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质J、特非那定紫外吸收相差较大，但在EP标准规定的检测波长(217nm)处均有较大吸收，结合欧洲药典质量标准及紫外扫描结果，将检测波长定为217nm。

2)有关物质色谱检验

混合溶液1：取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质J、TFND各适量，加溶剂配制成每1mL约含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质J各 1.0μg(0.1％)、TFND 1.0mg的混合溶液。

色谱条件：色谱柱：Agilent 4.6mm*100mm*3.5μm。流动相A：乙腈-磷酸盐 (3.58g十二水合磷酸氢二钠溶于1000mL水中，磷酸调pH至6.3，再加入1.92g SDS溶解过滤)＝20︰80；流动相B：乙腈。梯度洗脱：0min，60％A，40％B； 3min，55％A，45％B；30min，29％A，71％B。溶剂：45％乙腈。波长：217nm。流速：1.0mL/min。柱温：35℃。进样量：20μL。

取混合溶液进样，记录色谱图，结果如图2所示，显示各杂质能很好的分离，但是杂质F保留时间过长，且供试品中有未知杂质与已知杂质H分离不符合要求。

实施例2

特非那定有关物质的检验分离方法，同实施例1，其中，步骤2)中的色谱条件如下：

色谱柱：MZ-ANALYTICAL Column 250*4.6mm 100ODS-3 5μm。流动相A：乙腈-磷酸盐(3.58g十二水合磷酸氢二钠溶于1000mL水中，磷酸调pH至6.0，再加入1.92g SDS溶解过滤)＝20︰80；流动相B：乙腈。梯度洗脱：0min，60％A，40％B；3min，55％A，45％B；20min，20％A，80％B。溶剂：乙腈-磷酸盐＝45： 55。波长：217nm。流速：1.0mL/min。柱温：35℃。进样量：20μL。

取混合溶液进样，记录色谱图，如图3所示，结果表明，此条件下各杂质出峰时间较合理，但是未知杂质与杂质H不能很好的分离。

实施例3

特非那定有关物质的检验分离方法，同实施例2，其中，步骤2)中的色谱条件如下：

色谱柱：MZ-ANALYTICAL Column 250*4.6mm 100ODS-3 5μm。流动相A：乙腈-磷酸盐(3.58g十二水合磷酸氢二钠溶于1000mL水中，磷酸调pH至6.0，再加入1.92g SDS溶解过滤)＝20︰80；流动相B：乙腈-甲醇＝95︰5。梯度洗脱： 0min，40％A，60％B；10min，40％A，60％B；20min，20％A，80％B。溶剂：缓冲盐(pH6.0)-乙腈＝40︰60。波长：217nm。流速：1.0mL/min。柱温：30℃。进样量：20μL。

取混合溶液2(同实施例1的混合溶液1配制，加溶剂(缓冲盐-乙腈＝40︰ 60)配制成每1mL约含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I、杂质J各1.0μg(0.1％)、特非那定1.0mg的混合溶液) 进样，记录色谱图。

结果如图4所示，结果表明，调整后，未知杂质和杂质H分离度稍差。

实施例4

特非那定有关物质的检验分离方法，同实施例3，其中，步骤2)中的色谱条件如下：

色谱柱：MZ-ANALYTICAL Column 250*4.6mm 100ODS-3 5μm。流动相A：乙腈-磷酸盐(3.58g十二水合磷酸氢二钠溶于1000mL水中，磷酸调pH至6.0，再加入1.92g SDS溶解过滤)＝20︰80；流动相B：乙腈-甲醇＝95︰5。梯度洗脱： 0min，40％A，60％B；8min，40％A，60％B；20min，20％A，80％B。溶剂：缓冲盐(pH6.0)-乙腈＝40︰60。波长：217nm。流速：1.0mL/min。柱温：30℃。进样量：20μL。

取混合溶液2依法进样，记录色谱图，结果如图5所示，表明，此色谱条件下特非那定与杂质A分离度大于5.0，各杂质间、其它已知杂质与特非那定间的分离度均大于1.5，符合要求。且主峰和主峰后面的未知杂质分离度可达3.5，确定本方法可作为检验方法使用。