一种许氏平鮋抗菌肽BS20及其应用

摘要

本发明涉及一种抗菌肽BS20及其应用，具体涉及一种抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。该抗菌肽可有效杀伤藤黄微球菌和副溶血弧菌两种鱼类致病菌。本发明的抗菌肽经实验验证效果优异。

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学及微生物学领域，具体的说是一种许氏平鮋脂多糖结合蛋白(LBP)/杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的衍生抗菌肽BS20及其应用。

背景技术

目前水产养殖业中的疾病防治以大量使用抗生素药物为主，由此产生了一系列的负面影响，如水产动物药物残留，病原菌耐药性增强、生态平衡被破坏等，严重影响了水产养殖业的可持续健康发展。抗菌肽是机体天然免疫的重要组成部分，具广谱抗菌活性，并且其杀菌机制不易使病原产生耐药性，不会产生药物残留，有非常广阔的应用前景。鱼类脂多糖结合蛋白(LBP)/杀菌/通透性增加蛋白(BPI)是脂质转移蛋白/LPS结合蛋白家族的成员，目前研究证实，其N端重组蛋白或衍生肽对革兰氏阴性菌具显著杀菌活性。但是，该蛋白在鱼类中的抗菌功能研究非常欠缺。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明一方面提供了一种抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。

进一步地，本发明的另一个方面提供了如上所述的抗菌肽在制备抑制细菌的药物中的应用。

进一步地，所述细菌为鱼类致病菌，优选为藤黄微球菌和副溶血弧菌。

有益效果

本发明的抗菌肽具有高效抑菌作用，可以有效抑制两种鱼类致病菌，因此可以应用于鱼类病害防治。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。

实施例1

本发明的抗菌肽BS20的序列如SEQ ID No.1所示。

SEQ ID No.1为：RMHGNWRVKYLRIIKDSGSF

（a）序列特征：

●长度：20

●类型：氨基酸序列

●链型：单链

●拓扑结构：线性

（b）分子类型：蛋白质

（c）假设：否

（d）反义：否

（e）最初来源：人工合成

本实施例合成的抗菌肽BS20按照Fmoc固相多肽合成法，最终得到纯度大于90%的抗菌肽BS20。合成时将一个Fmoc-氨基酸衍生物共价交联到树脂上，经过树脂溶胀，脱保护，称料，投料，反应后洗涤，检测，合成完毕后的洗涤和干燥后再连接下一个氨基酸，直至连完最后一个氨基酸， 即得到抗菌肽BS20的序列，最后脱除N端Fmoc保护的氨基酸上面的保护基Fmoc，使N端裸露出来，并切除树脂，即得到纯化的抗菌肽BS20。经验证为如SEQ ID No.1所示的序列，本实施例的抗菌肽由上海吉尔多肽有限公司（上海，中国）合成。

实施例2

抗菌肽BS20的应用

1）藤黄微球菌和副溶血弧菌

在LB培养基中培养藤黄微球菌和副溶血弧菌分别至OD₆₀₀为0.8,>6>

所述PBS组成成分按重量百分比计：0.8% NaCl，0.02% KCl，0.358%Na₂HPO₄.12H₂O，0.024%>2PO₄。

2） 抗菌肽BS20的杀菌效应

抗菌肽BS20的杀菌活性。将50 μl上述步骤1）的菌液加入96孔细胞培养板中，与倍比稀释的BS20或PBS混合，28℃ (副溶血弧菌) 或37℃ (藤黄微球菌)培养24 h。结果发现，BS20对藤黄微球菌和副溶血弧菌的最小抑菌浓度分别为：79 μM和 20 μM；最小杀菌浓度为：158μM和20 μM，而PBS组则完全不能抑制细菌生长。

SEQ ID No.1 SEQUENCE LISTING

<110> 张敏，刘永，岳斌

<120> 一种许氏平鮋抗菌肽BS20及其应用

<130> 2014

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> PRT

<213> 许氏平鮋

<400> 1

Arg Met His Gly Asn Trp Arg Val Lys Tyr Leu Arg Ile Ile Lys Asp

1 5 1015

Ser Gly Ser Phe

20