连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物在制备抗癌或抗肿瘤药物中的应用及药物

摘要

本发明公开了一种连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物在制备预防或/和治疗肿瘤药物中的新应用。试验证明，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物抗肿瘤、抑制癌症/肿瘤的疗效显著，见效快、毒副作用小、是一种安全、高效、稳定、制备工艺简单的治疗抗肿瘤药物，适于工业化生产，易于推广。本发明为预防和治疗肿瘤及其并发症提供了一种新的药物来源。

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，涉及一种治疗肿瘤的药物或保健食品，特别涉及一种中药连翘及连翘叶提取成分在缓解或/和治疗肿瘤药物或保健食品中的应用。

背景技术

肿瘤是机体遗传和环境致癌因素以协同的方式，引起遗传物质DNA损伤、突变，同时伴随有多个癌基因激活和肿瘤抑制基因失活，使正常细胞不断增生、转化而形成的新生物。其为一种以局部细胞异常增生为特征的全身性疾病。根据肿瘤对人体的危害程度不同，将其分成两大类:良性肿瘤和恶性肿瘤。恶性肿瘤细胞能向周围浸润蔓延，甚至扩散转移到其它器官组织，继续成倍增生，造成对人体生命极大的威胁。

随着人口老龄化及生态环境、生活方式的改变，预计在未来20-30年中，全球恶性肿瘤的发病率、死亡率有逐年上升的趋势。据统计，在最适合工作时期(35-60岁)，肿瘤在各种死因中居首位。在传染病得到控制的一些国家，心脑血管病和恶性肿瘤己分别占死亡原因的第一位和第二位。肿瘤的危害不言而喻，它给病者造成的痛苦，给家庭带来的精神以及经济负担，对社会生产力造成的影响难以估量，恶性肿瘤成为严重危害人类生命的疾病。

目前现代医学对肿瘤的治疗仍然是以手术治疗配合放、化疗为主，手术虽能去除原发病灶，但不能从根本上杜绝肿瘤细胞的再生和繁殖，而这正是日后肿瘤复发和转移的的根源，化疗和放疗虽能杀灭癌细胞，但不能对机体癌靶细胞作出选择识别，对大量的正常组织细胞同样具有毒害作用，常引起骨髓抑制、免疫功能低下等副反应，别外还有肠胃反应和肝、肾、心脏功能损害，使患者难以坚持治疗，并且化疗药物在治疗过程中出现的耐药性已成为目前临床治疗中的难题之一。因此，有必要寻求疗效好、毒副作用小的治疗方法和药物。中药以其药源广泛、价格低廉、应用历史悠久等优点正成为抗肿瘤药物研究的热点。

国内外研究经验表明，来自于天然的先导化合物很有希望成为治疗癌症的新药，而且天然产物药理筛选的命中率比合成化合物高。天然先导化合物的发现为新药的目标化合物提供了结构模式，从天然结构活性出发，经结构修饰、类似物的合成及系统的活性研究，总结结 构与活性(毒性)的相关性，作为设计新药目标化合物的基础，是国际上研究天然活性成分的主要思路和方法川。而我国丰富的药用植物为开发结构新颖、作用独特的抗癌新药提供了独特的来源。并且肿瘤的综合治疗中，中医中药也是我国具有特色的传统手段，中医药的抗肿瘤作用也已越来越受到人们的关注，从中寻找高效、低毒的抗肿瘤药物成为肿瘤研究的热点。从细胞水平，分子水平验证并揭示中药及其复方的药效物质基础的研究正成为当今研究的重要动向。

连翘是中药临床常用传统药物之一，应用广泛，用量巨大，它具有清热"解毒"消肿散结"清除自由基的功能，临床上常与其他的中草药制成配方，用于各类肿瘤治疗。近年研究发现，连翘水提物对胃癌、肝癌、肠癌、食管癌细胞具有增殖抑制作用，但是，其中具体活性成分尚不清楚，发明者经过艰苦探索，制备提取了其中活性单体化合物连翘苷，并经化学合成，制备了相应的衍生物，进行了一系列的药理活性研究，发现连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物具有抑制肿瘤癌细胞增殖，增强人体免疫功能活性，为肿瘤患者开辟了新的治疗途经。

连翘苷(phillyrin)

连翘脂素((+)-phillygenin)

本发明人通过大量的现代科学研究，采用先进的分离纯化技术从连翘及连翘叶中提取其治疗肿瘤的有效成分连翘苷，并经进一步研究合成制备了连翘苷衍生物。可以为癌症、肿瘤患者提供一种高效低毒的药物。

发明内容

本发明的首要目的是针对现有抗癌或抗肿瘤药物或保健品应用过程中存在的技术问，提供连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物(连翘苷/连翘脂素)抗癌或抗肿瘤的性能和功能，用于缓解或/和治疗癌症、肿瘤，并提供连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素新的药用用途，即在治疗、调理和缓解肿瘤的药物或保健食品中的新应用。

为实现上述目的，本发明一方面提供一种连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物在制备抗癌或抗肿瘤药物或保健品中的应用。用于预防或/和治疗癌症或肿瘤。

在筛选具有抗症或抗肿瘤作用的天然活性成分的过程中，发明人发现连翘的化学成分中连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物具有强烈的抑制癌症或肿瘤的作用。

其中，所述药物或保健品由连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷/连翘脂素组合物和药学上可接受的载体组成。

特别是，所述连翘苷衍生物选择连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物。

特别是，所述连翘苷衍生物包括33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(33-Hydroxy phillygenin-8-O-β-D-glucuronide)、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(9-Hydroxy phillygenin-8-O-β-D-glucuronide)、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(33,34-Methylenedioxy phillygenin-8-O-β-D-glucuronide)、连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯((2R,3R,4R,5S)-methyl 6-(5-((1R,4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-trihydroxyte tra hydro-2H-pyran-2-carboxylate)、连翘脂素葡萄糖醛酸钠(sodium(2R,3R,4R,5S)-6-(5-((1R,4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylate)、连翘脂素葡萄糖醛酸钾(potassium(2R,3R,4R,5S)-6-(5-((1R,4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylate)、连翘脂素葡萄糖醛酸((2R,3R,4R,5S)-6-(5-((1R,4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid)；优选为33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠或连翘脂素葡萄糖醛酸钾。

特别是，所述连翘苷与连翘脂素组合物中连翘苷与连翘脂素的重量份配比为2～98：2～98；优选为2-10:90-98；进一步优选为80:20或20:80，进一步优选为90:10或10:90，更进一步优选为98:2或2:98；再进一步优选为98:2。

其中，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的纯度≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％；连翘苷/连翘脂素组合物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物含量为1％～98％；优选为30～80％；连翘苷/连翘脂素组合物含量为1％～98％；优选为30～80％。

特别是，药学上可接受的载体通常被保健专家认可用于这一目的且作为药剂的非活性成分。有关药学上可接受的载体的汇编可以在《药物赋形剂手册》(Handbook of Pharmaceutical excipients，第2版，由A.Wade和P.J.Weller编辑；American Pharmaceutical Association出版，Washington and The Pharmaceutical Press,London,1994)等工具书中找到。

尤其是，所述的载体包括赋形剂，如淀粉、水等；润滑剂，如硬脂酸镁等；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如乳糖等；粘结剂，如预胶化淀粉、糊精等；甜味剂；抗氧化剂；防腐剂、矫味剂、香料等；

其中，所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂形式存在。

特别是，所述连翘苷、连翘苷衍生物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％；连翘苷与连翘脂素组合物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

本发明另一方面提供一种抗癌或抗肿瘤的药物或保健品，该药物或保健品含有连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷与连翘脂素组合物。该药物或保健品用于预防或/和治疗癌症或肿瘤。

其中，所述连翘苷衍生物选择连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物。

特别是，所述连翘苷衍生物包括33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠、连翘脂素葡萄糖醛酸钾、连翘脂素葡萄糖醛酸；优选为33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠或连翘脂素葡萄糖醛酸钾。

其中，所述连翘苷与连翘脂素组合物中连翘苷与连翘脂素的重量份配比为2～98：2～98；优选为2-10:90-98；进一步优选为80:20或20:80，进一步优选为90:10或10:90，更进一步优 选为98:2或2:98；再进一步优选为98:2。

特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％；连翘苷与连翘脂素的组合物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

尤其是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量≥1％，优选为1％～98％；优选为30～80％，更进一步优选为60％；连翘苷与连翘脂素组合物含量≥1％，优选为1％～98％；优选为30～80％，更进一步优选为60％。

特别是，所述连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷与连翘脂素组合物的重量与所述药物或保健品的总重量之比为0.01-10：100，优选为0.1～10：100，进一步优选为1～10：100。

其中，所述连翘苷/连翘脂素组合物以连翘苷和连翘脂素单体组成、或采用溶剂加热提取方法制备而成的连翘脂素-连翘苷提取组合物，或连翘脂素和连翘苷与环糊精或环糊精的衍生物组合而成连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物。

特别是，所述连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物选择连翘脂素和连翘苷与α-、β-或γ-环糊精或其衍生物相混合而成的混合物，或连翘脂素和连翘苷与α-、β-或γ-环糊精或其衍生物经物理、化学方法处理形成的复合物。

其中，所述连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物中连翘苷和连翘脂素重量与环糊精或环糊精的衍生物的重量之比为1：1-50。

特别是，所述环糊精为α-或β-、γ-环糊精；所述环糊精衍生物为羟乙基-环糊精、2,6-二甲基-环糊精、2,3,6-三甲基-环糊精、2,6-二乙基-环糊精、2,3,6-三乙基-环糊精、麦芽糖基-环糊精或磺丁醚β-环糊精、对甲基苯磺酰氯(p-TsCl)取代的β-环糊精、6-位取代的β-CD对甲基苯磺酸酯(β-环糊精-6-OTs)、2-氧羟丙基-β-环糊精、2-位单取代的对甲基苯磺酸酯(β-环糊精-2-OTs)、β-环糊精对甲基苯磺酸酯(Tosyl-β-CD)、β-环糊精的星形大分子PCL-(Tos)7-β-CD。

特别是，所述药物或保健品中还包括山豆根提取物、苍耳子提取物、半枝莲提取物、苦参提取物、蒲公英提取物、金银花提取物、生姜提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物。

与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点：

1、本发明对化合物连翘苷、连翘脂素发掘了新的药用价值，将其用于预防、治疗癌症或肿瘤，并可用于制备成抗癌或抗肿瘤的药物或保健食品，从而为连翘及连翘叶药材的应用开拓了一个新的领域。

2、本发明的系列试验研究证明连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物具有显著的抑制、缓解、治疗癌症、肿瘤的功效。

3、本发明的连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物药理作用强，用于预防、调理和治疗癌症或肿瘤的功效显著，见效快、毒副作用小、安全性好，能够长期服用，具有良好的药用前景。

4、本发明的产品原料来源丰富、价廉、临床使用安全，制备工艺简单，可制成各种剂型，且服量小，使用方便，因此易于推广。

6、本发明既可采用连翘苷、连翘苷衍生物活性成分、连翘苷与连翘脂素组合物制备预防和治疗癌症、肿瘤的药物，又可采用连翘苷、连翘苷衍生物与其它活性成分(例如与山豆根提取物、苍耳子提取物、半枝莲提取物、苦参提取物、蒲公英提取物、金银花提取物、生姜提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物。)共同组方，制备预防或/和治疗癌症、肿瘤的复方药物。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步描述本发明所述配方的有益效果，这些实施例包括了本发明的连翘苷、连翘苷衍生物的胶囊、片剂、软胶囊剂的药效学试验。这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的配方思路、用途范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

本发明中所述连翘苷衍生物33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷与专利申请(申请号：201510319303.4，优先权号：201510164294.6)中所述连翘苷衍生物相同；连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠、连翘脂素葡萄糖醛酸钾、连翘脂素葡萄糖醛酸与专利申请(申请号：201510320579.4，优先权号：201410825547.5)中的相同。

实施例1连翘苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例2连翘苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

连翘苷(纯度60％) 200g

淀粉 1000g

2、将连翘苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例3连翘苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

连翘苷(纯度98％) 500g

淀粉 1000g

2、将连翘苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例4连翘苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷、山豆根提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例5连翘苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷、金银花提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例6连翘苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷、苦参提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例7连翘苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取连翘苷、苍耳子提取物、半枝莲提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，加去离子水至100ml，即得。

实施例8连翘苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取连翘苷、苍耳子提取物、葡萄子提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，加去离子水至100ml，即得。

实施例9 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度60％) 200g

淀粉1000g

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例10 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度98％)500g

淀粉1000g

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例11 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、半枝莲提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例12 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、苦参提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例13 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、蒲公英提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例14 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、苦参提取物、金银花提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至100ml，即得。

实施例15 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例16 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度97％)200g

淀粉1000g

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例17 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度98％)500g

淀粉 1000g

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例18 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、半枝莲提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例19 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、苦参提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例20 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、蒲公英提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例21 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液

1、按照如下配比准备原料

全方最终加去离子水至100ml。

2、取9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、苦参提取物、金银花提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至100ml，即得。

实施例22 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例23 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度97％)200g

淀粉1000g

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例24 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度98％)500g

淀粉 1000g

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例25 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、半枝莲提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例26 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、苦参提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例27 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、蒲公英提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例28 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、蒲公英提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例29 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、苦参提取物、金银花提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至100ml，即得。

实施例30连翘苷和连翘脂素组合物片剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：

2、取连翘苷490g、连翘脂素10g与淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例31连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：

连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为98:2)100g

微晶纤维素 10000g

2、取连翘苷98g、连翘脂素2g与微晶纤维素混合均匀后，制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例32连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：

连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为98:2)250g

淀粉 2500g

2、取连翘苷245g、连翘脂素5g与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例33-36连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

实施例33-36中，连翘苷/连翘脂素组合物分别按下表的重量比与淀粉混合均匀后装胶囊，各制成10000粒胶囊。

实施例:37-40连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

实施例37-30中，连翘苷/连翘脂素组合物分别按下表的重量比与微晶纤维素混合均匀后，制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例41连翘苷/连翘脂素组合物片剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：

2、称取连翘苷490g、连翘脂素10g与苦参提取物粉末混合均匀，再与淀粉混合均匀后制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例42连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：

2、取连翘苷245g、连翘脂素5g与葡萄子提取物、苦参提取物粉末混合均匀，再与微晶纤维素混合均匀后制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例43连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：

2、连翘苷245g、连翘脂素5g与苦参提取物、葡萄子提取物、金银花提取物粉末混合均匀，再与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例44连翘苷/连翘脂素组合物片剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：

2、取连翘苷490g、连翘脂素10g与半枝莲提取物粉末混合均匀，再与淀粉混合均匀后制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压，制成10000片。

实施例45连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：

2、取连翘苷900g、连翘脂素100g与上述提取物(蒲公英、生姜)粉末混合均匀，再与微晶纤维素混合均匀后制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例46连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：

2、连翘苷1880g、连翘脂素120g与上述提取物(半枝莲、葡萄子、苍耳子)粉末混合均匀，再与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

试验例1连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物抗小鼠S180肉瘤试验

1实验材料

1.1实验动物及移植瘤株

昆明小鼠，由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK2013-005；

S180肉瘤瘤株，购自广东省医学实验动物中心。

1.2药品

连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.5％，并用中国药品生物制品含量测定用连翘苷对照品标定和确认其含量为99.5％。批号：20130303。

33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物A，含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为98.5％。

9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物B，含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130302。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.2％。

33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物C，含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为98.7％。

连翘苷/连翘脂素组合物A，连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130303；连翘脂素(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301；连翘苷与连翘脂素的重量之比为98：2。

连翘苷/连翘脂素组合物B，连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130303；连翘脂素(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301；连翘苷与连翘脂素的重量之比为90：10。

试验用药低、中、高剂量分别为临床成人等效剂量(按成人60kg体质量计算)的2倍、4倍及8倍，用双蒸水配成所需浓度的混悬液，配好的药液存避光4℃冰箱中备用。

阳性对照药：环磷酰胺(批号：20130105，江苏恒瑞医药股份有限公司)。为临床成人等效剂量(按成人60kg体质量计算)给药，用双蒸水配成所需的混悬液，配好的药液存避光4℃冰箱中备用。

2、实验方法

2.1分组及给药

取接种Sl80肉瘤7天生长良好的腹水型小鼠，在无菌操作下抽取腹水，用灭菌的生理盐水稀释，调节细胞数为2×10⁶个/0.2mL，置于冰水中保存。

健康昆明小鼠210只(雌雄各半)，6-8W龄，体重18-22g，实验条件下预养1周后，随机取出10只作为空白对照组，其余的200只，每只左后肢腋窝皮下接种S180瘤细胞悬液0.2mL，接种24h后称重，随机分成20组：荷瘤对照组，阳性药对照组，连翘苷高、中、低剂量组，连翘苷衍生物A高、中、低剂量组，连翘苷衍生物B高、中、低剂量组；连翘苷衍生物C高、中、低剂量组；连翘苷/连翘脂素组合物A高、中、低剂量组；连翘苷/连翘脂素组合物B高、中、低剂量组。于分组当天开始灌胃给药，连翘苷低、中、高三个组分别给予连翘苷(36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；连翘苷衍生物A低、中、高剂量组分别给予连翘苷衍生物A 36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；连翘苷衍生物B低、中、高剂量组分别给予连翘苷衍生物B 36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；连翘苷衍生物C低、中、高剂量组分别给予连翘苷衍生物C 36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；连翘苷/连翘脂素组合物A低、中、高剂量组分别给予连翘苷/连翘脂素组合物A 36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；连翘苷/连翘脂素组合物B低、中、高剂量组分别给予连翘苷/连翘脂素组合物B 36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；阳性对照组给环磷酰胺45mg/kg；正常对照组，模型组给等量生理盐水，灌胃，1次/d。

造模用药后，观察每组小鼠的进食、饮水、毛色变化、活动情况、对刺激的反应、有无腹泻、消瘦、死亡等情况，并随时记录。灌胃给药后第21d停药，次日脱颈椎处死小鼠并称重，完整剥离左后肢皮下肿瘤组织，去除血污、脂肪等非肿瘤组织，用电子天平称瘤重，按下式计算抑瘤率：

抑瘤率＝(对照组平均瘤重-用药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％

2.2数据以均数±标准差表示，计量资料组间比较用SPASS13.0统计软件进行单因素方差分析，以P<0.05为具有显著性差异。

3、实验结果

3.1用药后动物一般情况观察

用药后各组小鼠均存活，空白对照组小鼠进食、饮水情况正常，活动灵活，反应灵敏，毛发光泽，无腹泻、消瘦情况。相比而言，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素各给药组小鼠一般情况次之；阳性对照组小鼠进食较差，饮水少，活动缓慢，反应较迟钝，脱毛，毛色无光泽，有腹泻，消瘦；荷瘤对照组更次，可见小鼠进食很少，很少活动，反应迟钝， 毛色枯槁，消瘦明显。

3.2各组间移植瘤重和抑瘤率见表1。

表1各组间移植瘤重和抑瘤率

试验结果表明，用药组移植瘤重明显低于荷瘤对照组，表明连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物均具有抗移植性小鼠S180肉瘤的作用，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物的高剂量的抑瘤率均高于阳性药物组，且连翘苷/连翘脂素A、连翘苷/ 连翘脂素B高剂量组的抑瘤率达到50％以上，充分说明连翘苷与连翘脂素组合物中二者具有协同增效作用，抑制肿瘤的功效提高，其具有较好的抗癌作用。

试验例2连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物抗裸鼠MGC胃癌的研究

1实验材料

1.1实验动物及移植瘤株

裸小鼠，由广东省医学等实验动物中心提供，许可证号：SCXK2013-006；

MGC人胃癌细胞株，购自广东省医学实验动物中心。

1.2药品

连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.5％，并用中国药品生物制品含量测定用连翘苷对照品标定和确认其含量为99.5％。批号：20130303。

33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物A，含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为98.5％。

9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物B，含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130302。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.2％。

33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物C，含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为98.7％。

连翘苷/连翘脂素组合物A，连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130303；连翘脂素(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301；连翘苷与连翘脂素的重量之比为98：2。

连翘苷/连翘脂素组合物B，连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130303；连翘脂素(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301；连翘苷与连翘脂素的重量之比为90：10。

连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.5％，并用中国药品生物制品含量测定用连翘苷对照品标定和确认其含量为99.5％。批号：20130303。

试验用药低、中、高剂量分别为临床成人等效剂量(按成人60kg体质量计算)的2倍、4倍及8倍，用双蒸水配成所需浓度的混悬液，配好的药液存避光4℃冰箱中备用。

阳性对照药：环磷酰胺(批号：20130105，江苏恒瑞医药股份有限公司)。为临床成人等效剂量(按成人60kg体质量计算)给药，用双蒸水配成所需的混悬液，配好的药液存避光4℃冰箱中备用。

2、实验方法

2.1分组及给药

无菌条件下取生长旺盛的体内传2代的MGC胃癌，以匀浆法制备成约2×10⁷/ml细胞悬液，取裸小鼠200只，经手术于裸小鼠的胃大弯肌层内注射细胞悬液0.05ml，接种24h后称重，随机分成20组：荷瘤对照组，阳性药对照组，连翘苷高、中、低剂量组，连翘苷衍生物A高、中、低剂量组，连翘苷衍生物B高、中、低剂量组；连翘苷衍生物C高、中、低剂量组；连翘苷/连翘脂素组合物A高、中、低剂量组；连翘苷/连翘脂素组合物B高、中、低剂量组。于分组当天开始灌胃给药，

连翘苷低、中、高三个组分别给予连翘苷(36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；连翘苷衍生物A低、中、高剂量组分别给予连翘苷衍生物A 36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；连翘苷衍生物B低、中、高剂量组分别给予连翘苷衍生物B 36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；连翘苷衍生物C低、中、高剂量组分别给予连翘苷衍生物C 36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；连翘苷/连翘脂素组合物A低、中、高剂量组分别给予连翘苷/连翘脂素组合物A 36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；连翘苷/连翘脂素组合物B低、中、高剂量组分别给予连翘苷/连翘脂素组合物B 36mg/kg，72mg/kg，144mg/kg；阳性对照组给环磷酰胺45mg/kg；模型组给等量生理盐水，灌胃，1次/d。灌胃给药后第21d停药，按下列公式计算荷瘤宿主生命延长率：

生命延长率％＝给药组平均生存天/对照组平均生存天×100％

2.2数据以均数±标准差表示，计量资料组间比较用SPASS13.0统计软件进行单因素方差分析，以P<0.05为具有显著性差异。

3、实验结果

连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物对裸鼠MGC胃癌的荷瘤宿主生命延长率试验结果见表2。

表2连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素对裸鼠MGC胃癌的荷瘤宿主生命延长率

实验结果表明，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物均能延长荷瘤裸鼠的生存期，说明了连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物对肿瘤的治疗具有一定的意义。

连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物的高剂量对裸鼠MGC胃癌的荷瘤宿主生命延长率均高于阳性药物组；连翘苷/连翘脂素A、连翘苷/连翘脂素B中、高剂量组的对裸鼠MGC胃癌的荷瘤宿主生命延长率更高，充分说明连翘苷与连翘脂素组合物中二者具有协同增效作用，抑制癌症的功效提高，其具有较好的抗癌作用。