黄柏内酯在制备治疗肺纤维化、慢性肺炎、慢性呼吸道疾病药物中的应用及其药物

摘要

本发明公开了黄柏内酯在制备治疗肺纤维化、慢性肺炎及慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病或哮喘药物中的应用。并公开了相关药物。黄柏内酯口服能够有效地，剂量依赖性地改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化损伤及其发病过程的炎症症状。对胶原合成的检测表明，黄柏内酯可以剂量依赖性的下调α-SMA和胶原蛋白的生成，这一效应是基于黄柏内酯对小鼠纤维化肺组织中TGF-β信号通路的抑制。以上结果提示，黄柏内酯可以应用于包括肺纤维化、慢性肺炎、矽肺、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、哮喘在内的多种炎症介导的慢性肺部疾病。

说明书

技术领域

本发明涉及到黄柏内酯在制备治疗肺纤维化及慢性肺炎药物中的应用，属于制药技术 领域。

背景技术

肺纤维化是一大类疾病的总称，医学上将肺纤维化归属为肺间质病，肺间质纤维化是 肺组织损伤后常见的病理过程，表现为早期的弥漫性肺泡炎、后期的成纤维细胞过度增殖 和细胞外基质过度沉积，可引起呼吸衰竭，死亡率高达50％-70％。导致肺纤维化的原因 很多，常见的有环境、职业、物理和化学因素等，例如石棉、矿物、粉尘、化疗药物、放 射损伤等，一些风湿免疫性疾病也可伴发肺纤维化。肺纤维化是一种预后很差的疾病，大 部分特发性肺纤维化(IPF)患者被确诊后，平均生存期仅2年，5年生存率仅30％-50％ (KeyJrLL,etal.NewEnglandJournalofMedicine.1995；332(24):1594)。

研究表明，IPF是以弥漫性肺泡炎、Ⅱ型肺泡上皮和血管内皮增生以及肺间质纤维化 为主要病理特征。目前国内外对于IPF发病机制尚无明确定论，但大部分学者达成的共识 是以肺泡上皮细胞损伤，主要是Ⅱ型上皮细胞损伤为起因引起的一系列反应。

Wilson等研究了肺纤维化的免疫学机制。指出在损伤-炎症-修复的三期过程中任何一 项或多项过程的失调，均可造成肺纤维化的发生(WilsonM,etal.Mucosalimmunology. 2009；2(2):103.)。炎症能导致各种细胞因子分泌失调，生理性愈合转变为病理性纤维化。结 合其他免疫学研究结果，肺纤维化的进程大致分为3个阶段。

第一阶段，肺脏受到损伤或其他有害刺激，成纤维细胞的细胞外基质产生细胞被活化。

第二阶段，活化的细胞外基质产生细胞发生结构和表型的改变，产生大量细胞外基质 (ECM)。同时胞内的促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)和核转录因子(NF-κB)通路被激活， 促进产生大量的细胞因子。通过旁分泌，介导包括巨噬细胞在内的炎症细胞向受刺激部位 移动。T细胞被激活，分泌促纤维化生长因子，如白细胞介素(IL)和肿瘤坏死因子(TNF-α) 等。巨噬细胞促进纤维原细胞增殖与分化，同时分泌包括转化生长因子13(TGF-β)和IL-1 在内的多种细胞因子。

第三阶段，损伤因素持续存在，造成反复损伤。成纤维细胞继续被激活，产生更多的 ECM。细胞因子持续不断的引起组织炎症和胶原过度表达，ECM不断沉积，肺纤维化逐 渐形成，最终特发部位肺功能丧失。

目前临床上对于肺纤维化的治疗缺乏有效手段。糖皮质激素和免疫抑制药物等虽能改 善肺纤维化的症状，延缓疾病发展，但本身不是专一治疗肺纤维化的药物，具有强烈的副 作用。刚获得FDA批准的吡非尼酮(pirfenidone)是目前唯一针对肺纤维化的治疗药物， 其效果还有待临床检验。

黄柏内酯(obaculactone)是一类植物中提取的内酯类化合物。对该化合物在药理学方面 的活性研究及报道非常少。曾有报道该化合物对皮肤移植排斥、皮肤炎症等具有良好的抑 制作用(Wang,etal.IntImmunopharmacol.2015Sep；28(1):1-9.Gong,etal.Biochem Pharmacol.2010Jul15；80(2):218-25.)。另一方面，大剂量的黄柏内酯展现出一定的抗菌、 抗炎、抗疟疾、抗肿瘤作用(石慧等.中医药学报2014,42(4):128.)

发明内容

本发明的目的是研究黄柏内酯作为药物在肺纤维化、慢性肺炎及炎症相关的慢性呼吸 道疾病中的应用。

本发明采用的技术方案为：黄柏内酯在制备治疗肺纤维化疾病药物中的应用。

其中黄柏内酯(obaculactone)的结构式如下：

所述肺纤维化疾病为慢性肺炎引发的肺纤维化疾病或矽肺。

所述肺纤维化疾病为石棉、矿物、粉尘、化疗药物、放射损伤引发的肺纤维化疾病。

所述肺纤维化疾病为风湿免疫性疾病引发的肺纤维化疾病。

本发明还公开了一种用于治疗肺纤维化的药物，其有效成分为黄柏内酯。

本发明还公开了黄柏内酯在制备治疗慢性肺炎药物中的应用。

本发明还公开了一种用于治疗慢性肺炎的药物，其有效成分为黄柏内酯。

本发明还公开了黄柏内酯在制备治疗慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病或哮喘药物中 的应用。

黄柏内酯口服能够有效地，剂量依赖性地改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化损伤及其 发病过程的炎症症状。黄柏内酯可以改善小鼠的体重下降，抑制肺纤维化病变小鼠的脏器 系数以及肺干重/湿重比。对小鼠的肺组织切片观察可以发现，口服黄柏内酯明显地剂量依 赖性地改善了肺部损伤，减少了胶原沉积。通过对肺纤维化病变小鼠肺灌洗液和组织的考 察发现，口服黄柏内酯可显著降低肺灌洗液中的蛋白含量；抑制炎症细胞浸润和炎症因子 分泌；降低羟脯氨酸含量，改善组织生化指标。

对胶原合成的检测表明，黄柏内酯可以剂量依赖性的下调α-SMA和胶原蛋白的生成， 这一效应是基于黄柏内酯对小鼠纤维化肺组织中TGF-β信号通路的抑制。

以上结果提示，黄柏内酯可以应用于包括肺纤维化、慢性肺炎、矽肺、慢性支气管炎、 慢性阻塞性肺疾病、哮喘在内的多种炎症介导的慢性肺部疾病。

附图说明

图1.黄柏内酯对小鼠博来霉素诱导肺纤维化的改善作用。(A)黄柏内酯(25,50 mg/kg)灌胃给药，各组小鼠的体重变化。(B)黄柏内酯(15,30mg/kg)灌胃给药,对小鼠肺脏 器系数的影响。(C)黄柏内酯(15,30mg/kg)灌胃给药,对小鼠肺脏干重/湿重比例的影响。 (D)HE染色及masson染色对小鼠肺脏组织及胶原沉积的检查结果。放大倍数×200。(E) HE组织检查定量。(F)masson染色检查定量。结果以mean±s.d.表示。#P<0.05,##P<0.01, vs正常小鼠；*P<0.05,**P<0.05,vs模型小鼠(Students’ttest)。

图2.黄柏内酯对肺纤维化小鼠肺灌洗液炎症的抑制作用。(A)黄柏内酯对肺纤维化 小鼠肺灌洗液总蛋白含量的影响。(B)黄柏内酯对肺纤维化小鼠肺灌洗液总细胞数、中性 粒细胞和巨噬细胞数的影响。(C)黄柏内酯对肺纤维化小鼠肺灌洗液炎症因子含量的影响。 结果以mean±s.d.表示。##P<0.01,vs正常小鼠；*P<0.05,**P<0.05,vs模型小鼠(Students’ ttest)。

图3.黄柏内酯对肺纤维化小鼠肺组织生化指标的影响。(A)黄柏内酯对肺纤维化 小鼠肺组织羟脯氨酸的抑制作用。(B)黄柏内酯促进谷胱甘肽表达，抑制丙二醛和过氧 化物酶活性。(C)黄柏内酯抑制小鼠纤维化肺组织中icam1，vcam1，iNOS和cox2的 表达。结果以mean±s.d.表示。##P<0.01,vs正常小鼠；*P<0.05,**P<0.05,vs模型小鼠 (Students’ttest)。

图4.黄柏内酯对肺纤维化小鼠肺组织胶原合成及TGF-β信号通路的影响。(A-B) Westernblot检测α-SMA及胶原生成。(C-D)免疫组化检测组织局部α-SMA生成及其定量。 (E-F)黄柏内酯对肺纤维化小鼠肺组织TGF-β信号通路的。结果以mean±s.d.表示。 ##P<0.01,vs正常小鼠；*P<0.05,**P<0.05,vs模型小鼠(Students’ttest)。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。

具体实施方式

1.黄柏内酯的药理试验

1)小鼠慢性肺炎致肺纤维化模型的诱导

博来霉素介导的小鼠肺纤维化动物模型(气管滴注法)

将博来霉素(效价15mg/瓶)用1mL灭菌的磷酸盐缓冲盐(PBS)溶解成15mg/mL 的储备液，4度冰箱保存。实验当天，取事先计算好量的15mg/mL的储备液用无菌PBS 稀释到2mg/mL。将25g左右的小鼠用1％戊巴比妥钠(PBS稀释)约180μL，经腹腔注 射麻醉。然后将小鼠固定在鼠板上，用手术线沿小鼠头顶方向勾住小鼠牙齿，使之气管保 持平直。酒精消毒后，小心剪开气管处皮肤，开口约1cm长，再小心用手术镊将气管从组 织中剥离开来，注意勿伤及颈部血管和神经。用1mL的胰岛素针与气管方向保持约 30～45°并沿进气方向小心插入气管，缓慢滴注40μL2mg/mL的博来霉素，假手术组给予 等量的PBS。滴注完后，立即将小心头朝上竖直放置并分别沿顺逆时针方向旋转三圈，使 博来霉素在肺部分布均匀。最后，小心将气管处皮肤缝合，并在伤口上涂以红霉素软膏。 将小鼠以侧卧的体位放置在铺有棉絮的鼠笼中，注意保温。待1～2小时后，小鼠复苏，便 可放回SPF环境正常饲养。

2)给药方式与剂量

从造模第一天开始至第二十一天造模结束，每天同一时间段灌胃给予千分之五的羧甲 基纤维素钠悬浮的黄柏内酯25mg/kg和50mg/kg、阳性对照药吡非尼酮100mg/kg，模型 组给予等量的溶剂。另设正常对照。

3)肺泡灌洗液(BALF)的收集

造模结束当天，将实验小鼠深度麻醉后，固定于鼠板上。用眼科剪切开颈部皮肤，小 心用眼科镊将气管从组织里剥离开来。用0.8#注射器针头轻轻在气管上戳开一个小孔，再 把0.7#的注射器针头(事先已将针尖磨平滑)从戳开的小孔插入约0.5cm，并使之沿通向 肺部的方向而不是头部。用手术缝合线将气管与针头扎在一起，防止漏气。随后，每次用 400μL的PBS灌洗肺泡，共洗三次。

4)肺泡灌洗液(BALF)总细胞计数

将BALF于低温离心机中3000rpmx5min离心后，吸取上清液于另外准备好的1.5mL EP管，放于-80度冰箱保存，供日后检测用。底部细胞用力弹散后，加入500μL的PBS 重新悬浮。然后，将细胞置于冰上，于显微镜下观察并进行细胞计数。细胞重混悬后做细 胞涂片，瑞氏姬姆萨染色并计数。

5)肺组织的收集及肺指数的计算方法

将取完肺泡灌洗液的小鼠的胸腔剖开，剥离开覆盖在肺组织上面的血管、心脏及其一 些结缔组织后，将整个左右肺叶从胸腔中用镊子小心取出，放在PBS中洗去血渍。然后， 把肺组织放在滤纸上，吸干上面的液体后，用电子分析天平称量重量(计作lungweight)。 肺指数＝lungweight(mg)/bodyweight(g)。

6)肺组织生化指标和细胞因子测定

部分肺组织匀浆提蛋白，使用羟脯氨酸测定试剂盒、丙三醛试剂盒、谷胱甘肽试剂盒、 过氧化物酶试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。细胞因子的ELISA测试试剂盒，均 购自达科为科技公司。

7)组织病理学染色

●H&E染色

取同一部位肺组织约黄豆粒大小，PBS洗净后，置于福尔马林溶液中避光保存。石蜡 包埋，用苏木素-伊红染液染色(步骤略)后，光学显微镜下拍照观察肺组织结构病理学变 化。

●Masson染色

使用快色Masson染色试剂盒，购自南京建成生物工程研究所

8)Real-timequantitativePCR

●总RNA的提取

收集经过研磨匀浆后的肺组织，每个样本各加入1mLRNAisoPlus，静置10分钟，再 加入200μl氯仿，剧烈震荡15秒，室温静置10-15分钟，12000g离心15分钟后，取上 清至新eppendorfRNase-free管中，加入等体积的的异丙醇，轻轻混匀，室温静置10分钟 后12000g离心10分钟。弃上清后用75％乙醇洗涤沉淀，7500g离心5分钟，弃上清， 待乙醇蒸发后加入约30μLRNase-freewater溶解RNA。

●RT-PCR及Q-PCR

待RNA充分溶解于RNase-freewater中后，于核酸蛋白定量仪中测定RNA浓度。然 后，将RNA反转录成cDNA:20μL反转录体系：RNA1μg,dNTP2μL,ACE0.25μL,RT buffer4μL,oligiodt1μL,RI0.25μl,用水补足至20μL，混匀后短暂离心。RT-PCR程序： 42℃20min，95℃5min。将反转录的cDNA进行实时定量荧光PCR(Real-timePCR)： 反应体系为10μL，包括5μL的2×iQTMGreenSupermix，0.5μLcDNA，1μL正 反向引物和3.5μL蒸馏水。基因扩增使用BioradCFX96仪器，反应条件95℃2min，一 个循环95℃10s，60℃30s，40循环，95℃10s，并作溶解曲线检测扩增基因的特异 性。结果以β-actin或者GAPDH作为参照基因进行标准化。引物信息如下：

icam1forward5’-GTCGAAGGTGGTTCTTCTGAGC-3’(SEQIDNo.1),

icam1reverse5’-TCCGTCTGCAGGTCATCTTAGG-3’(SEQIDNo.2)；

inosforward5’-CAACATCAGGTCGGCCATCACT-3’(SEQIDNo.3),

inosreverse5’-ACCAGAGGCAGCACATCAAAGC-3’(SEQIDNo.4)；

cox2forward5’-CCTGCTGCCCGACACCTTCAACAT-3’(SEQIDNo.5),

cox2reverse5’-CAGCAACCCGGCCAGCAATCT-3’(SEQIDNo.6)；

vcam1forward5’-GGAGACACTGTCATTATCTCCTG-3’(SEQIDNo.7),

vcam1reverse5’-TCCTTTCATGTTGGCTTTTCTTGC-3’(SEQIDNo.8)；

β-actinforward5’-GTATGCCTCGGTCGTACCA-3’(SEQIDNo.9),

β-actinreverse5’-CTTCTGCATCCTGTCAGCAA-3’(SEQIDNo.10).

9)蛋白免疫印迹

组织总蛋白的提取

收集经过研磨匀浆后的肺组织，加入300μL裂解液(10mMHEPES，2mMEDTA， 0.1％CHAPS，5mMDTT和1mMPMSF)，冰上孵育30分钟，于4℃以12000g的速度 离心5分钟，收集上清，保存于-70℃备用。

免疫印迹分析

按照《精编分子生物学实验指南》提供的方法制备10％SDS-PAGE凝胶。每个样品各 取20μg蛋白与上样缓冲液混合，沸水加热5分钟后加入凝胶加样孔内进行电泳分离，恒 定电流20mA，时间为1小时。

电泳结束后将凝胶从电泳装置中取下，除去浓缩胶，将分离胶上的蛋白用电泳仪转移 至PVDF膜。根据预染Marker指示的分子量将膜简称所需大小，用BlockingBuffer(3％ BSA，10mMTris-Cl，50mMNaCl，0.1％Tween20，pH7.4)封闭膜上的非特异性结合位 点，常温1小时。将膜与适当稀释的一抗共孵，4℃过夜后，WashingBuffer(10mMTris-Cl， 50mMNaCl，0.1％Tween20，pH7.4)洗涤三次，每次5分钟。再与适当稀释的二抗共 孵育，常温1小时，洗涤三次后与化学发光底物共孵2分钟。最后将膜与X-感光胶片置于 暗盒中曝光，冲洗胶片。

免疫组织化学标准步骤如下：

①烤片，60℃，20分钟,

②常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水：二甲苯20min--100％酒精20min--75％酒精 20min--50％酒精20min--纯水20min；

③阻断灭活内源性过氧化物酶：3％H2O237℃孵育10min，PBST冲洗3x5min；

④抗原修复：置柠檬酸钠抗原修复液中煮沸(95℃，2min)，自然冷却20min以上， 再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBST冲洗3x5min；

⑦正常羊血清工作液封闭，37℃1h，倾去勿洗；

⑧滴加一抗4℃冰箱孵育过夜，PBST冲洗3x5min；

⑨滴加生物素标记二抗,37℃孵育1h,PBST冲洗3x5min；

⑩DAB/H2O2反应染色，白色面纸上观察。待出现棕色着色后，纯水充分冲洗；

苏木素复染，常规脱水，干燥，封片，拍照。

各种抗体均为市售。

10)统计

数据以mean±SD表示。对于多组之间的比较，先用单因素方差(ANOVA)进行统计 分析，如果有显著性差异(P<0.05)，再以Student’stwo-tailedt-test来检验各组间的差异。

2.黄柏内酯的药理试验结果及分析

1)黄柏内酯对博来霉素诱导的小鼠慢性肺炎及肺纤维化的影响

如图1A所示，模型组小鼠从第8天开始出现体重明显下降的现象，每天给50mg/kg 的黄柏内酯能显著逆转体重下降。

15mg/kg和30mg/kg的黄柏内酯还可以不同程度地降低小鼠的疾病活动度(DAI)， 见图1B。实验结束后，取小鼠肺组织，发现黄柏内酯可以剂量依赖性的逆转博来霉素诱导 的小鼠肺脏器系数增长，恢复其干重/湿重比例(图1B，C)。

2)黄柏内酯抑制肺纤维化小鼠炎症局部的病理损伤、炎性细胞浸润和胶原沉积

H&E染色结果显示(图1D，E)，模型组肺泡结构凌乱，呈现致密实质模样，细胞外 基质(ECM)累积严重，细胞增生增加，表现为着色更深。给予黄柏内酯21天后，肺泡 结构呈现剂量依赖性的改善，随着药物剂量的增加，肺泡结构逐渐恢复正常，致密的实质 样组织也逐渐褪变为空泡样组织，着色也逐渐变浅。阳性对照组呈现同样的改善情况。

在纤维化的过程中，一些成纤维细胞在炎症刺激的情况下会分泌细胞外基质(ECM)， 其中有一种成分就是胶原蛋白，胶原蛋白难以降解，在肺部沉积后，就会促进纤维化的发 生。Masson-trichrome染色发现，胶原纤维会呈现蓝色。胞浆、肌肉等呈红色，细胞核呈 蓝紫色。如图所示(图1-D，F)，染色后，肺部血管壁周围有明显的蓝色纤维着色，即胶 原蛋白的沉积，给予黄柏内酯后，血管壁周围蓝色着色纤维呈现剂量依赖性的减少，高剂 量时基本恢复到正常水平。阳性对照组呈现同样的改善情况。

3)黄柏内酯抑制肺纤维化模型小鼠肺灌洗液中的蛋白质含量、炎症细胞浸润和炎症因子 表达

肺纤维化的早期都伴有急慢性肺炎的发生。结果显示(图2A，B)，在博来霉素急性 肺损伤导致的小鼠肺纤维化模型的肺泡灌洗液(BALF)中，模型组小鼠的总蛋白含量、 总细胞数、中性粒细胞数和巨噬细胞数显著高于正常租，给予黄柏内酯后，总蛋白量和总 细胞数、炎症细胞数呈现剂量依赖性的下降趋势。

4)黄柏内酯抑制肺纤维化小鼠肺灌洗液中各炎症因子的释放量

图2C显示，黄柏内酯对一些重要的炎症细胞因子如IL-1β,TNF-α和IL-6都有较为明 显的抑制效果。说明黄柏内酯具有较好的抗慢性炎症的效果。

5)黄柏内酯抑制肺组织损伤、抑制肺纤维化形成、抑制炎症相关通路分子的表达

在纤维化过程中，成纤维细胞分泌的大量胞外基质包括胶原蛋白、弹性蛋白、纤连 蛋白和蛋白聚糖等，而羟脯氨酸在胶原蛋白中占13.4％。因此羟脯氨酸的含量表征了组织 纤维化进程。图3A表明，黄柏内酯剂量依赖性的改善博莱霉素导致的小鼠肺组织内羟脯 氨酸含量的上升。高剂量的黄柏内酯(50mg/kg)作用优于阳性对照药。图3B显示，黄柏 内酯能促进肺组织内谷胱甘肽的增加，抑制过氧化因素丙三醛和过氧化物酶的含量。

黄柏内酯对一些重要的炎症相关细胞因子iNOS,COX-2以及黏附分子icam1，vcam1 均有较为明显的抑制效果。再次说明黄柏内酯具有良好的抗炎、抗纤维沉积、修复组织的 作用。

5)黄柏内酯对肺损伤导致的肺纤维化模型小鼠肺组织中α-SMA和胶原表达的影响

在纤维化的过程中，由循环系统迁移、上皮细胞经EMT转变以及肺部原位存在的成 纤维细胞会在炎症刺激的情况下分泌细胞外基质(ECM)，细胞外基质的累积会破坏肺泡 结构导致纤维化的发生。因此，成纤维细胞数量的多少是衡量纤维化进展的一个重要指标。 α-SMA是成纤维细胞激活后的marker。实验结果显示(图4A-D)，模型组小鼠肺组织 α--SMA和胶原表达均上调，给予黄柏内酯以后，α-SMA、胶原蛋白I的表达都呈现下降 趋势。此结果表明，服用黄柏内酯(50mg/kg)可以有效抑制成纤维细胞在肺部的集聚激 活，减少细胞外基质胶原蛋白等在肺部的累积侵害，改善肺部纤维化。在肺组织切片上进 行免疫组织化学实验。结果显示，模型组有显著的棕色着色，为α-SMA阳性，而阴性对照 组棕色着色块很少，给予黄柏内酯后，棕色着色大小和深浅随药物剂量升高而降低，高剂 量组(50mg/kg)效果同阴性对照组相当。

6)黄柏内酯显著抑制肺纤维化关键信号TGF-β及其介导的信号通路

TGF-β介导了肺纤维化过程中的内皮间质转化过程，主要是经典的TGF-β/Smad通路。 图4E-F显示，黄柏内酯可以剂量依赖性地抑制肺组织中的TGF-β及其受体ALK5的表达 量，进而抑制其介导的Smad2和Smad3的磷酸化。

矽肺是由于长期过量吸入含结晶型游离二氧化硅的岩尘所引起的尘肺病。其基本病变 是形成矽结节和肺间质广泛纤维化。因此，矽肺是一种常见的肺纤维化疾病。石棉、矿物、 粉尘、化疗药物、放射损伤等及一些风湿免疫性疾病均可导致肺纤维化。各种肺纤维化的 共同特点是，肺脏受到损伤后(不论物理性或化学性或炎症的损伤)，成纤维细胞增殖活 化、分泌大量胶原蛋白进行肺间质组织的修补，进而造成肺脏纤维化。所以只要有效抑制 组织内胶原沉积，抑制α-SMA产生，抑制促成纤维细胞生长的转化生长因子TGF-β信号通 路，就能在一定程度上治疗肺纤维化。黄柏内酯对这些共性有抑制作用，因此黄柏内酯对 各种原因导致的肺纤维化均有治疗效果。

慢性支气管炎、慢性肺炎、哮喘等三种疾病，均伴有呼吸道内炎症因子如TNF-α、IL-1β 等的高表达，伴随着炎症细胞如巨噬细胞等的浸润，伴随有粘附分子如ICAM1、VCAM1 等表达，后期肺脏局部出现纤维化病变。

慢性阻塞性肺疾病是一种具有气流阻塞特征的慢性支气管炎和(或)肺气肿，与有害 气体及有害颗粒的异常炎症反应有关，同样在晚期出现肺纤维化的症状。

本实施例图1反映黄柏内酯抑制慢性炎症致肺纤维化小鼠的体重下降及肺纤维化病 变；图2反映黄柏内酯抑制肺部炎症细胞浸润和炎症因子水平；图3反映黄柏内酯改善肺部 损伤，减少粘附分子表达；图4反映黄柏内酯对纤维化相关的胶原合成及其信号分子的抑 制作用。可以看出黄柏内酯对炎症的抑制作用明显，推断其对慢性支气管炎、慢性肺炎、 哮喘应该有效；因黄柏内酯能抑制肺纤维化，可以推断该化合物对矽肺、慢性阻塞性肺病 等肺纤维化疾病也有效。