一种丹酚酸B的分离纯化方法及丹酚酸B镁盐的制备方法

摘要

本发明涉及一种丹酚酸B的分离纯化方法及丹酚酸B镁盐的制备方法，所述丹酚酸B的分离纯化方法包括以丹参或白花丹参药材为原料，经溶剂提取萃取、镁盐络合法分离纯化、MCI柱纯化、结晶与重结晶步骤。本发明采用丹酚酸B镁盐络合法，可以省去大孔吸附树脂或聚酰胺柱色谱的层析过程，纯化方法更简单和省时，成本更低。丹酚酸B镁盐的制备方法简单，成本低，而且收率高，纯度高，纯度可达98％，更适合于大生产。

说明书

技术领域

本发明涉及一种从丹参或白花丹参药材的提取浸膏中分离纯化丹酚酸B的方法以及其镁 盐的制备方法。

背景技术

中药丹参具有活血祛瘀、凉血消痈、清心除烦的功效。现代药理研究表明，丹参能扩张 冠状动脉、增加血流量、抗心肌缺血、改善微循环、降低心肌耗氧量、改善心功能、降血压、 降血脂、抗凝血、抗血栓、抗氧化、保肝等诸多功效。

丹酚酸B是丹参主要水溶性成分之一。药理研究表明，丹酚酸B在清除自由基、保护心 脑缺血再灌注损伤和保护肾等方面具有较强的药理作用。

已有的丹酚酸B分离纯化方法主要是通过大孔吸附树脂分离或者高速逆流色谱分离。大 孔吸附树脂分离的主要缺点是洗脱耗时长，工作量大，生产成本高。中国专利文件 CN1528756A(申请号：03151476.6)公开了一种从丹参中提取丹酚酸B的工艺方法，将几种 从丹参中提取丹酚酸B的方法进行有机组合，开发出了一套适合分离纯化丹酚酸B的新工艺。 即先用水进行提取，然后用壳聚糖絮凝，接着进行醇沉，再用石油醚和乙酸乙酯分别萃取， 最后采用硅胶柱层析得到较高纯度的丹酚酸B。上述方法采用硅胶柱层析分离纯化丹酚酸B， 得到的纯度为50％-96％的丹酚酸B；但是，过程复杂，死吸附较大，操作过程繁琐，难以扩 大到生产。XiaoWang等在JournalofSeparationScience2007,30,3214-3217描述了采用高速 逆流色谱分离纯化丹酚酸B的工艺，显示pH梯度逆流色谱可以将丹酚酸B纯化到94.1％， 并可能应用于大批量生；但是，高速逆流色谱仪的使用具有一定的限制。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明提供了一种从丹参或白花丹参药材中快速分离纯化丹酚 酸B的方法以及丹酚酸B镁盐的制备方法，该方法工艺简便，效率高，产品纯度可达98％。

本发明的技术方案如下：

一种丹酚酸B的分离纯化方法，包括以丹参或白花丹参药材为原料，经溶剂提取萃取、 镁盐络合法分离纯化、MCI柱纯化、结晶与重结晶步骤，得丹酚酸B；

所述溶剂提取萃取步骤为：将丹参或白花丹参药材粉用70-80wt％乙醇室温下超声提取、 过滤，将滤液减压浓缩得浓缩液，浓缩液加水悬浮，以二氯甲烷或乙酸乙酯萃取除去杂质， 弃去二氯甲烷或乙酸乙酯层，水层用酸性溶液调pH＝1～2，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取 液减压浓缩，得丹酚酸B粗提物。

根据本发明，优选的，溶剂提取萃取步骤中：丹参或白花丹参药材粉的质量与70-80wt％ 乙醇的体积比为1：(8-12)g/mL；乙酸乙酯萃取液减压浓缩至浸膏状，无乙醇味。

根据本发明，优选的，镁盐络合法分离纯化步骤为：将MgCl₂溶于蒸馏水，配制成浓度 为0.01wt％～1wt％的MgCl₂水溶液；将MgCl₂水溶液加入到溶剂提取萃取步骤所得的丹酚酸 B粗提物中，室温下搅拌，滴加浓度为0.1wt％～1wt％的NaHCO₃溶液，滴加完毕后，继续 搅拌1～2分钟；加入等体积的二氯甲烷或乙酸乙酯萃取2次，萃取后的水溶液，以1N～2.5N 的盐酸调pH＝1～2，再以乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩；

将该浓缩液重复上述操作，再纯化1次，得纯化后丹酚酸B样品。

根据本发明，优选的，镁盐络合法分离纯化步骤中：所述的MgCl₂溶液中所含有的MgCl₂摩尔数为丹酚酸B粗提物中丹酚酸B摩尔数的二分之一；

优选的，所述的NaHCO₃溶液中所含有的NaHCO₃的摩尔数等于丹酚酸B粗提物中丹酚 酸B摩尔数，所用的NaHCO₃与MgCl₂的摩尔数比为2:1。

根据本发明，优选的，MCI柱纯化步骤为：将镁盐络合法分离纯化后的丹酚酸B样品， 过MCI柱子，10wt％-20wt％甲醇溶液除杂质，30wt％-60wt％甲醇溶液洗脱丹酚酸B样品， 浓缩丹酚酸B样品洗脱液；

将浓缩后的丹酚酸B样品洗脱液再重复上述MCI柱纯化步骤，得进一步纯化后的丹酚酸 B样品。

根据本发明，优选的，MCI柱纯化步骤中：所述除杂用洗脱液优选20wt％甲醇水溶液； 所述洗脱丹酚酸B样品所用溶液优选30wt％甲醇溶液。

根据本发明，优选的，结晶与重结晶步骤为：将MCI柱纯化步骤所得丹酚酸B样品溶解 于二氯甲烷:甲醇体积比＝1:9～9:1，的混合溶液中进行结晶与重结晶，得到丹酚酸B。

根据本发明，优选的，结晶与重结晶步骤中，所述的二氯甲烷:甲醇的体积比优选(2～3): (8～7)。

根据本发明，一种丹酚酸B镁盐络合物的制备方法，步骤如下：

(1)氢氧化镁及碳酸氢镁的制备：

取MgCl₂溶于蒸馏水，配制成浓度为1wt％～5wt％的MgCl₂水溶液，然后滴加1wt％～5 wt％的NaOH水溶液，至不再生成白色沉淀为止，过滤沉淀，以蒸馏水洗涤沉淀至中性；取 Mg(OH)₂加入水中，通入CO₂60～90min至溶液澄清，并超声10～20min除去溶液中多余 CO₂，溶液过滤除去不溶性颗粒，即得碳酸氢镁溶液；碳酸氢镁溶液须现用现配。

(2)丹酚酸B镁盐络合物的制备：

将上述制备的丹酚酸B样品加入碳酸氢镁溶液中，搅拌使其溶解；以等体积二氯甲烷或 乙酸乙酯萃取2次，除脂溶性杂质，萃取后的水层在40℃条件下减压浓缩，除去水层中残留 的二氯甲烷或乙酸乙酯，水溶液冷冻干燥，即得丹酚酸B镁盐络合物。

根据本发明丹酚酸B镁盐络合物的制备方法，优选的，碳酸氢镁溶液中所含碳酸氢镁的 摩尔数与丹酚酸B的摩尔数比为2:1。所用碳酸氢镁溶液应为新制备，现用现配。

根据本发明，一种丹酚酸B镁盐络合物的制备方法，步骤如下：

取MgCl₂溶于蒸馏水，配制成浓度为0.01wt％～1wt％的MgCl₂水溶液；将上述制备的丹 酚酸B加入到MgCl₂水溶液中，室温搅拌，滴加NaHCO₃水溶液；滴加完毕后，抽滤，冷冻 干燥，即得丹酚酸B镁盐络合物。

根据本发明丹酚酸B镁盐络合物的制备方法，优选的，所述的MgCl₂溶液中所含有的 MgCl₂摩尔数与丹酚酸B摩尔数比为1:2。其中，所述的NaHCO₃溶液中所含有的NaHCO₃的摩尔数与丹酚酸B摩尔数比为1:1。

本发明的有益效果：

本发明采用丹酚酸B镁盐络合法，可以省去大孔吸附树脂或聚酰胺柱色谱的层析过程， 纯化方法更简单和省时，成本更低。丹酚酸B镁盐的制备方法简单，成本低，而且收率高， 纯度高，纯度可达98％，更适合于大生产。

附图说明

图1为本发明实施例1步骤(1)得到的丹酚酸B粗提物的HPLC图。

图2为本发明实施例1步骤(2)镁盐络合法纯化后得到的丹酚酸B样品的HPLC图。

图3为本发明实施例1步骤(3)MCI纯化后丹酚酸B样品的HPLC图。

图4为本发明实施例1步骤(4)重结晶后得到的丹酚酸B的HPLC图。

图5为本发明实施例2得到的丹酚酸B镁盐的HPLC图。

图6为本发明实施例3得到的丹酚酸B镁盐的¹H-NMR图谱。

图7为本发明实施例3得到的丹酚酸B镁盐的¹³C-NMR图谱。

具体实施方式

下面通过具体实施例并结合附图对本发明作进一步说明，但不限于此。

实施例1：高纯度丹酚酸A的制备

(1)丹酚酸B的提取：取丹参药材粉末约500g，加入75wt％乙醇，丹参药材粉的质量 与乙醇的体积比为1：12g/mL；超声提取2次，每次30分钟，过滤，合并滤液，减压浓缩， 浓缩液加适量水，等体积二氯甲烷萃取除杂，水层用2.5N盐酸调pH＝2，再用等体积的乙酸 乙酯萃取2次，在45℃条件下乙酸乙酯萃取液减压浓缩，得丹酚酸B粗提物。

(2)镁盐络合法纯化：将NaHCO₃与MgCl₂摩尔比为2：1的溶液加入到丹酚酸B粗提 取中，使其溶解，等体积的乙酸乙酯萃取2次除杂，弃去乙酸乙酯层，水层用酸性溶液调pH＝2， 再以等体积乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，得浓缩液；

将浓缩液重复上述操作，得纯化的丹酚酸B样品。

(3)MCI纯化：将(2)中纯化的丹酚酸B样品进行MCI柱分离，先以20wt％甲醇溶 液洗脱除杂，再30wt％甲醇溶液洗脱丹酚酸B。

洗脱下来的丹酚酸B洗脱液再重复进行一次MCI柱分离，得到纯度达91％的丹酚酸B 样品。

(4)重结晶：将步骤(3)中丹酚酸B样品溶解于甲醇:二氯甲烷＝3:8(体积比)的热溶 液中溶解，放置析晶。滤出结晶，再进行二次结晶，得到丹酚酸B含量达98％。

实施例2：丹酚酸B镁盐制备

取MgCl₂溶于蒸馏水，配制成浓度为1wt％的MgCl₂水溶液，然后滴加1wt％的NaOH 水溶液，至不再生成白色沉淀为止，过滤沉淀，以蒸馏水洗涤沉淀至中性；取Mg(OH)₂加 入水中，通入CO₂60～90min至溶液澄清，并超声10min除去溶液中多余CO₂，溶液过滤除 去不溶性颗粒，即得碳酸氢镁溶液；碳酸氢镁溶液须现用现配。

将实施例1制得的98％的丹酚酸B样品20mg加入到新制备的碳酸氢镁溶液中，震荡使 其溶解。以等体积乙酸乙酯萃取，合并萃取液，减压浓缩蒸干，即得高纯度丹酚酸B镁盐。 1H-NMR(600MHz,D₂O)δ:6.74(dd,J＝29.3,13.8Hz,3H),6.67(t,J＝9.4Hz,1H),6.62(dd, J＝18.9,9.3Hz,2H),6.54(t,J＝8.7Hz,2H),6.49(d,J＝8.1Hz,1H),6.21(dd,J＝31.4,8.0Hz, 1H),6.07(s,1H),5.89(d,J＝8.1Hz,1H),5.63(t,J＝12.6Hz,1H),5.60–5.52(m,1H),4.78 (dd,J＝9.6,3.3Hz,1H),4.73–4.67(m,1H),3.91(d,J＝4.5Hz,1H),2.89(dt,J＝13.5,6.9Hz, 1H),2.83–2.66(m,2H),2.38(dd,J＝14.1,11.6Hz,1H).13C-NMR(151MHz,D₂O)δ:177.4, 176.5,172.5,168.3,147.8,146.1,144.0,143.0,142.7,142.1,141.7,130.2,129.3,124.1,122.7, 121.7,121.3,120.1,117.93,117.4,116.7,116.4,116.2，116.1,115.8,113.9,112.9,86.1,77.5, 76.3,56.6,36.7,36.1.

实施例3：丹酚酸B镁盐制备

取MgCl₂溶于蒸馏水，配制成浓度为0.05wt％的MgCl₂水溶液；将实施例1制备的98％ 丹酚酸B样品20mg加入到MgCl₂水溶液中，室温搅拌，滴加NaHCO₃水溶液；滴加完毕后， 抽滤，冷冻干燥，即得丹酚酸B镁盐络合物。

所述的MgCl₂溶液中所含有的MgCl₂摩尔数与丹酚酸B摩尔数比为1:2。其中，所述的 NaHCO₃溶液中所含有的NaHCO₃的摩尔数与丹酚酸B摩尔数比为1:1。