一种从虎杖中分离纯化大黄素甲醚和大黄素的方法

摘要

本发明属于化工与制药领域，涉及一种从虎杖提取物中分离纯化大黄素甲醚和大黄素的方法。虎杖药材粉碎，加入无水乙醇冷浸提取，将提取液过滤、减压浓缩得浸膏，将浸膏溶于甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2（V/V)的混合溶液中进行萃取，合并上相，减压蒸馏得虎杖浸膏。将虎杖浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为二醇基色谱柱，流动相为超临界流体，改性剂为甲醇。本发明纯化过程中使用超临界二氧化碳，不使用对环境有危害的有机溶剂，生产过程绿色环保，所得产品无有害物质残留。

说明书

技术领域

本发明属于化工与制药领域，具体是涉及一种从虎杖提取物中分离纯化大黄素甲醚和大黄素的方法。

背景技术

虎杖为蓼科蓼属多年生草本植物虎杖 Polygonum Cuspidatum Sieb. et Zucc 的干燥根茎和根，是一种已被中国药典收入的比较常见的中草药，具有解毒祛风、止咳化痰、活血通经等功效,其中的大黄素和大黄素甲醚等蒽醌类化合物具有抑菌、抗炎、抗病毒及抗肿瘤的作用。

目前，对虎杖中蒽醌类成分的分离纯化主要采用大孔树脂分离纯化法或高速逆流色谱法。法虽然工艺成熟，但操作繁琐，高速逆流色谱法中溶剂体系的选择较困难，分离规模难以扩大。此外，大孔树脂分离纯化法和高速逆流色谱法两种方法均需要消耗大量的有机溶剂，有机溶剂回收成本高，回收再利用较困难，产品中有机试剂残留严重。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简便、分离量大、综合成本低、绿色环保的快速纯化制备大黄素甲醚和大黄素的方法，通过一步分离纯化即可从虎杖提取物中得到高纯度大黄素甲醚和大黄素单体化合物。

本发明的方案如下：

一种从虎杖中分离纯化大黄素甲醚和大黄素的方法，步骤为：

步骤1：虎杖药材粉碎，加入无水乙醇冷浸提取，将提取液过滤、减压浓缩得浸膏，然后将浸膏溶于甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2（V/V)的混合溶液中进行萃取，合并上相，减压蒸馏得虎杖浸膏。

步骤2：将虎杖浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为二醇基色谱柱，流动相为超临界流体，改性剂为甲醇。分离过程由紫外检测器检测，根据检测信号收集目标组分馏分。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤1中无水乙醇冷浸提取乙醇与药材的比例是3：1～10：1，最优为5：1；提取的次数为3次，冷浸时间为8-24小时。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤1中将浸膏溶于甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2（V/V)的混合溶液中，混合液与浸膏的比例为23：1～230：1，最优为105：1。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤1中用甲醇-水-乙酸乙酯-石油醚混合液萃取，它们相应的比例为6:10:5:2，萃取次数为3次。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中过滤所用滤膜为0.45 μm滤膜。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中超临界流体为超临界二氧化碳，超临界二氧化碳的压力为10~14 MPa，最优为10MPa；超临界二氧化碳的流速为1-10倍柱体积/分钟，最优为3倍柱体积/分钟。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中色谱柱温度为35~50°C，最优为40°C。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤2中改进剂甲醇的比例为4%~12%，最优为6%。

本发明一种从虎杖提取物中分离纯化大黄素甲醚和大黄素的方法，具有如下优势：

（1）所得到的虎杖提取物中有效成分含量高（从图1可以看出）。

（2）不需要像已有技术一样对样品进行多次分离纯化，只需要一个分离步骤即可得到两种高纯度化合物，经过一步分离纯化就可以得到大黄素甲醚和大黄素。

（3）纯化过程中使用超临界二氧化碳，不使用对环境有危害的有机溶剂，生产过程绿色环保，所得产品无有害物质残留。

（4）二氧化碳回收利用容易，能耗低，生产成本低。

（5）方法操作简单，易于自动化控制，效率高，工艺周期短。

附图说明

图1是实施例1超临界流体色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。实施例中所用设备或原材料皆可从市场获得。所用试剂均为分析纯，购自天津试剂四厂，所用二氧化碳为高纯二氧化碳。

实施例1

称取虎杖100克，用粉碎机粉碎，放入玻璃容器中，加入500ml无水乙醇冷浸提取12小时，提取3次，将提取液过滤、减压浓缩得浸膏，将浸膏分散于460 ml甲醇-水-乙酸乙酯-石油醚混合液中，按照甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2（V/V)的比例混合溶液萃取3次。合并上相，减压蒸馏回收上相得虎杖浸膏。

将虎杖浸膏用甲醇溶解，经过滤（所用滤膜为0.45μm滤膜）后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为二醇基色谱柱，色谱柱温度为40°C。流动相为超临界二氧化碳，流速为3倍柱体积/分钟，压力为10MPa。改进剂为甲醇，其比例为6%。分离过程由紫外检测器检测，检测波长为254nm，根据检测信号收集目标组分馏分，分别得到大黄素甲醚和大黄素。

图1是实施例1超临界流体色谱图。所得各个组分的纯度很高，均在98%以上。

实施例2

称取虎杖100克，用粉碎机粉碎，放入玻璃容器中，加入600ml无水乙醇冷浸提取24小时，提取3次，将提取液过滤、减压浓缩得浸膏，将浸膏分散于690 ml甲醇-水-乙酸乙酯-石油醚混合液中，按照甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2（V/V)的比例混合溶液萃取3次。合并上相，减压蒸馏回收上相得虎杖浸膏。

将虎杖浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为二醇基色谱柱，色谱柱温度为45°C。流动相为超临界二氧化碳，流速为5倍柱体积/分钟，压力为12MPa。改进剂为甲醇，其比例为4%。分离过程由紫外检测器检测，检测波长为254nm，根据检测信号收集目标组分馏分，分别得到大黄素甲醚和大黄素。

实施例3

称取虎杖100克，用粉碎机粉碎，放入玻璃容器中，加入300ml无水乙醇冷浸提取16小时，提取3次，将提取液过滤、减压浓缩得浸膏，将浸膏分散于230 ml甲醇-水-乙酸乙酯-石油醚混合液中，按照甲醇：水：乙酸乙酯：石油醚=6:10:5:2（V/V)的比例混合溶液萃取3次。合并上相，减压蒸馏回收上相得虎杖浸膏。

将虎杖浸膏用甲醇溶解，经过滤后，进行超临界流体色谱分离，色谱柱为二醇基色谱柱，色谱柱温度为40°C。流动相为超临界二氧化碳，流速为4倍柱体积/分钟，压力为13MPa。改进剂为甲醇，其比例为10%。分离过程由紫外检测器检测，检测波长为254nm，根据检测信号收集目标组分馏分，分别得到大黄素甲醚和大黄素。

经HPLC面积归一化法分析测试，实施例1-3所得到的各个组分的纯度很高，均在98%以上。

经NMR、MS鉴定，图1中A为大黄素甲醚，B为大黄素，其化学结构如下：