一种克拉霉素冻干脂质体及其制备方法

摘要

本发明公开了一种克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成，每100mL脂质体溶液中加入5g～20g冻干保护剂；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素0.05g～2.0g，固醇类物质0.01g～2.0g，磷脂0.2g～10g，脂肪酸0.01g～1.0g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或几种。本发明还公开了该脂质体的制备方法。本发明的克拉霉素冻干脂质体可显著降低克拉霉素引起的给药部位疼痛和血管刺激性，各项指标都达到国家食品药品管理局新药研究开发的要求，为克拉霉素脂质体制剂的工业化生产和临床应用奠定了基础。

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种克拉霉素冻干脂质体及其制 备方法。

背景技术

克拉霉素(clarithromycin，CLM)化学名为6-O-甲基红霉素，是1981 年由日本大正制药公司以红霉素为原料，将6位羟基用甲氧基取代而成。 化学结构式如下所示：

克拉霉素属大环内酯类抗生素，其机制是通过阻碍细胞核蛋白50S亚 基的联结，抑制蛋白质的合成而产生抑菌作用。主要用于敏感细菌所致的 上、下呼吸感染，生殖泌尿系感染，艾滋病患者的非典型分支杆菌感染等。

克拉霉素的临床剂型多为口服制剂，包括片剂、胶囊、糖浆剂、混悬 剂。其注射剂是美国雅培公司制造生产的，商品明为克拉霉素 静脉使用刺激性较大，易引起化学性静脉炎；且由于药物本身具有较强刺 激性，亦可引起血管痉挛，血液减少，相对局部药物浓度增大，加重静脉 炎，且若输液速度大于血液流速，则静脉炎的发生率明显增高，在临床用 于外周浅静脉输液时，发生浅静脉炎的比例相当高。因此，为了扩大克拉 霉素的给药途径，降低静脉给药引起的刺激性，亟待开发出有市场前景的 制剂。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种 克拉霉素冻干脂质体。该冻干脂质体冻干复溶后的粒径在200nm以下，冻 干后的pH值，包封率，含量均保持稳定。与溶液剂相比，本发明的克拉 霉素冻干脂质体可以显著的降低克拉霉素引起的给药部位疼痛和血管刺 激性，其各项指标都达到了国家食品药品管理局关于新药研究开发的要 求。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种克拉霉素冻干 脂质体，其特征在于，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后冻干制成，每 100mL脂质体溶液中加入5g～20g冻干保护剂；100mL所述脂质体溶液由 以下原料制成：克拉霉素0.05g～2.0g，固醇类物质0.01g～2.0g，磷脂0.2g～ 10g，脂肪酸0.01g～1.0g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干保护剂为蔗 糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或几种；所述固醇类物质 为胆固醇和/或胆固醇硫酸钠盐；所述脂肪酸为己酸、己二酸和苯甲酸中的 一种或几种；所述磷脂为天然磷脂和/或合成磷脂。

上述的一种克拉霉素冻干脂质体，100mL所述脂质体溶液由以下原料 制成：克拉霉素1.5g，固醇类物质1.5g，磷脂5.4g，脂肪酸0.75g，余量 为磷酸盐缓冲溶液。

上述的一种克拉霉素冻干脂质体，所述天然磷脂为注射级高纯蛋黄卵 磷脂PC-98T、注射级蛋黄卵磷脂PL-100M和卵磷脂E-80中的一种或几种， 所述合成磷脂为合成磷脂POPC(1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂)、合成磷 脂SOPC(1-硬脂酰基-2-油酰基卵磷脂)和合成磷脂MOPC(1-肉豆蔻酰 基-2-油酰基卵磷脂)中的一种或几种。

上述的一种克拉霉素冻干脂质体，所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠 盐，所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T，所述脂肪酸为己酸。

本发明还提供了制备上述克拉霉素冻干脂质体的方法，其特征在于， 该方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取克拉霉素、固醇类物质、磷脂和脂肪酸，将称取的 磷脂和固醇类物质分散于有机溶剂中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉 霉素和脂肪酸分散于有机溶剂中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B 混合后搅拌均匀，得到油相；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、 二氯甲烷和乙醚中的一种或几种；

步骤二、将步骤一中所述油相旋转蒸发除去油相中的有机溶剂，然后 用氮气吹干，得到薄膜；

步骤三、配制pH值为6.5～7.5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓 冲溶液预热至50℃～80℃；

步骤四、用步骤三中经预热后的磷酸盐缓冲溶液将步骤二中所述薄膜 完全水化，得到初乳；

步骤五、将步骤四中所述初乳用pH值为6.5～7.5的磷酸盐缓冲溶液 定容，然后置于高压均质机中进行均质或置于超声仪中进行超声，得到脂 质体溶液；

步骤六、称取冻干保护剂并将称取的冻干保护剂溶解于步骤五中所述 脂质体溶液中，超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。

上述的方法，步骤五中所述均质过程中控制均质温度为5℃～40℃， 均质压力为30MPa～70MPa，均质循环次数为2～10次；步骤五中所述超 声的温度为5℃～40℃，超声功率为200W～600W，超声时间为2min～ 20min。

本发明提供了另一种制备上述克拉霉素冻干脂质体的方法，其特征在 于，该方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取克拉霉素、固醇类物质、磷脂、脂肪酸和冻干保护 剂，将称取的磷脂和固醇类物质分散于有机溶剂中完全溶解得到溶液A， 将称取的克拉霉素和脂肪酸分散于有机溶剂中全部溶解得到溶液B，将溶 液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；所述有机溶剂为无水甲醇、 无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的一种或几种；

步骤二、配制pH值为6.5～7.5的磷酸盐缓冲溶液，然后将步骤一中 称取的冻干保护剂溶解于磷酸盐缓冲溶液中并将磷酸盐缓冲溶液预热至 50℃～80℃；

步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后 的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后在加热条件下继续搅拌直至溶液中有机 溶剂完全挥发，得到脂质体混悬液；所述加热的温度为50℃～80℃；

步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质或 置于超声仪中进行超声，然后将经均质后或超声后的脂质体混悬液超滤灭 菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。

上述的方法，步骤四中所述均质过程中控制均质温度为5℃～40℃， 均质压力为30MPa～70MPa，均质循环次数为2～10次；步骤四中所述超 声的温度为5℃～40℃，超声功率为200W～600W，超声时间为2min～ 20min。

本发明提供的第三种制备上述克拉霉素冻干脂质体的方法，其特征在 于，该方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取克拉霉素、固醇类物质、磷脂和脂肪酸，将称取的 磷脂和固醇类物质分散于有机溶剂中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉 霉素和脂肪酸分散于有机溶剂中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B 混合后搅拌均匀，得到油相；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、 二氯甲烷和乙醚中的一种或几种；

步骤二、配制pH值为6.5～7.5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓 冲溶液预热至50℃～80℃；

步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后 的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后减压蒸发除掉有机溶剂，制得脂质体混 悬液；

步骤四、对步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质或 置于超声仪中进行超声，得到脂质体溶液；

步骤五、称取冻干保护剂并将称取的冻干保护剂溶解于步骤四中所述 脂质体溶液中，超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。

上述的方法，步骤四中所述均质过程中控制均质温度为5℃～40℃， 均质压力为30MPa～70MPa，均质循环次数为2～10次；步骤四中所述超 声的温度为5℃～40℃，超声功率为200W～600W，超声时间为2min～ 20min。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明的克拉霉素冻干脂质体，其载药量最高可达20mg/mL，冻 干复溶后的粒径在200nm以下，冻干后的pH值，包封率，含量均保持稳 定；与溶液剂相比，本发明的克拉霉素冻干脂质体可以显著的降低克拉霉 素引起的给药部位疼痛和血管刺激性，其各项指标都达到了国家食品药品 管理局关于新药研究开发的要求。

2、本发明提高了克拉霉素在脂质体中的载药量，同时在很大程度上 降低了克拉霉素静脉给药的血管刺激性，为克拉霉素脂质体制剂的工业化 生产和临床应用奠定了基础。

3、本发明中经过深入的研究，发现脂肪酸，尤其是己酸可以与弱碱 性的药物克拉霉素发生相互作用，加之固醇类的辅助作用，增加了克拉霉 素在磷脂双分子层间的分布，为提高载药量起到了关键作用，大大的增加 克拉霉素的在脂质体中的载药量，并且通过调整磷脂和固醇类物质的配 比，可以使脂质体的包封率在95％以上，保证了对注射部位的静脉血管的 保护作用。

4、采用本发明的方法制备的克拉霉素冻干脂质体的含量、粒径、包 封率、pH值等各项理化性质均符合静脉注射用要求，不仅长期储存物理 化学稳定性良好，而且血管刺激性显著降低，提高患者顺应性，适于临床 应用，同时可以满足工业化生产的要求。

5、本发明固醇类物质优选胆固醇硫酸钠盐(SCS)，SCS是由胆固醇 经硫酸酯化后衍生而来的，其可作为一种新型膜稳定性材料参与脂质体的 组成，在起到调节膜流动性功能的同时又具有乳化作用。

6、本发明磷脂优选天然磷脂注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T，其磷脂 酰胆碱含量(PC)达98％以上，这种高纯特性使得克拉霉素冻干脂质体的 稳定性得到显著提高。

7、本发明的克拉霉素冻干脂质体长期稳定性考察的结果显示：在25±2 ℃的条件下放置3个月，其外观、pH值、药物含量、包封率以及平均粒 径都没有发生显著地变化，仍符合静脉用药的要求。

下面结合附图和实施例，对本发明的技术方案作进一步的详细描述。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的克拉霉素冻干脂质体冻干前的投射电镜 照片。

图2为本发明实施例1制备的克拉霉素冻干脂质体复溶前的投射电镜 照片。

图3为本发明实施例1制备的克拉霉素冻干脂质体冻干前和复溶后的 体外释放曲线。

图4a为阴性对照组距离给药部位1cm处的病理切片图。

图4b为阴性对照组距离给药部位2cm处的病理切片图。

图4c为本发明待检组距离给药部位1cm处的病理切片图。

图4d为本发明待检组距离给药部位2cm处的病理切片图。

具体实施方式

实施例1

本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后 冻干制成；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素1.5g，固醇 类物质1.5g，磷脂5.4g，脂肪酸0.75g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻 干保护剂为蔗糖；所述冻干保护剂的用量为每100mL脂质体溶液用12.5g 冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级高纯 蛋黄卵磷脂PC-98T；所述脂肪酸为己酸。

本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取1.5g克拉霉素、1.5g胆固醇硫酸钠盐、5.4g注射级 高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和0.75g己酸，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T和胆固醇硫酸钠盐分散于无水乙醇中完全溶解得到溶液A，将称 取的克拉霉素和己酸分散于无水乙醇中全部溶解得到溶液B，将溶液A和 溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；

步骤二、将步骤一中所述油相旋转蒸发除去油相中的乙醇，然后用氮 气吹干，得到薄膜；

步骤三、配制pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶 液预热至65℃；

步骤四、用步骤三中经预热后的磷酸盐缓冲溶液将步骤二中所述薄膜 完全水化，得到初乳；

步骤五、将步骤四中所述初乳用步骤三中配制的pH值为7.0的磷酸 盐缓冲溶液定容至100mL，然后转移至高压均质机中进行均质，得到脂质 体溶液；所述均质过程中控制均质温度为20℃，均质压力为50MPa，均 质循环次数为6次；

步骤六、称取12.5g蔗糖作为冻干保护剂，将称取的蔗糖溶解于步骤 五中所述脂质体溶液中，然后用0.22μm滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得 到克拉霉素冻干脂质体。

实施例2

本实施例与实施例1相同，其中不同之处在于：所述固醇类物质为胆 固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵 磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC或合成磷 脂MOPC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC 中的至少两种；所述脂肪酸为己二酸或苯甲酸，或者为己酸、己二酸和苯 甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为葡萄糖、海藻糖、麦芽糖或甘露 醇，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至少两种；所述 有机溶剂为无水甲醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无水乙 醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。

实施例3

本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后 冻干制成；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素2.0g，固醇 类物质2.0g，磷脂10g，脂肪酸1.0g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干 保护剂为甘露醇；所述冻干保护剂的用量为每100mL脂质体溶液用20g 冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂 PL-100M；所述脂肪酸为己二酸。

本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取2.0g克拉霉素、2.0g胆固醇、10g注射级蛋黄卵磷 脂PL-100M和1.0g己二酸，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和胆 固醇分散于无水甲醇中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和己二酸 分散于无水甲醇中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均 匀，得到油相；

步骤二、将步骤一中所述油相旋转蒸发除去油相中的甲醇，然后用氮 气吹干，得到薄膜；

步骤三、配制pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶 液预热至80℃；

步骤四、用步骤三中经预热后的磷酸盐缓冲溶液将步骤二中所述薄膜 完全水化，得到初乳；

步骤五、将步骤四中所述初乳用pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液定容 至100mL，然后转移至高压均质机中进行均质，得到脂质体溶液；所述均 质过程中控制均质温度为5℃～40℃，均质压力为30MPa～70MPa，均质 循环次数为2～10次；

步骤六、称取20g甘露醇并将称取的甘露醇溶解于步骤五中所述脂质 体溶液中，用0.22μm滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂 质体。

实施例4

本实施例与实施例1相同，其中不同之处在于：所述固醇类物质为胆 固醇硫酸钠盐或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射 级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC 或合成磷脂MOPC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄 卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC和合成磷 脂MOPC中的至少两种；所述脂肪酸为己酸或苯甲酸，或者为己酸、己二 酸和苯甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖或 麦芽糖，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至少两种； 所述有机溶剂为无水乙醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无 水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。

实施例5

本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后 冻干制成；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素0.05g，固 醇类物质0.01g，磷脂0.2g，脂肪酸0.01g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述 冻干保护剂为蔗糖和葡萄糖(质量比1∶1)；所述冻干保护剂的用量为每 100mL脂质体溶液用5g冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐； 所述磷脂为合成磷脂POPC；所述脂肪酸为己酸。

本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取0.05g克拉霉素、0.2g合成磷脂POPC、0.01g胆固 醇硫酸钠盐和0.01g己酸，将称取的合成磷脂POPC和胆固醇硫酸钠盐分 散于氯仿和乙醚的混合溶剂(体积比1∶1)中完全溶解得到溶液A，将称 取的克拉霉素和己酸分散于氯仿和乙醚的混合溶剂(体积比1∶1)中全部 溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；

步骤二、将步骤一中所述油相旋转蒸发除去油相中的氯仿和乙醚，然 后用氮气吹干，得到薄膜；

步骤三、配制pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶 液预热至50℃；

步骤四、用步骤三中经预热后的磷酸盐缓冲溶液将步骤二中所述薄膜 完全水化，得到初乳；

步骤五、将步骤四中所述初乳用pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液定容 至100mL，然后转移至超声仪中进行超声，得到脂质体溶液；所述超声的 温度为5℃～40℃，超声功率为200W～600W，超声时间为2min～20min；

步骤六、称取蔗糖和葡萄糖各2.5g，并将称取的蔗糖和葡萄糖溶解于 步骤五中所述脂质体溶液中，用0.22μm滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得 到克拉霉素冻干脂质体。

实施例6

本实施例与实施例5相同，其中不同之处在于：所述固醇类物质为胆 固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵 磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂 SOPC或合成磷脂MOPC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高 纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC 和合成磷脂MOPC中的至少两种；所述脂肪酸为己二酸或苯甲酸，或者为 己酸、己二酸和苯甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、 海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或三种以上，或者为葡萄糖、海藻糖、 麦芽糖和甘露醇中的两种，或者为海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种与蔗 糖的混合物；所述有机溶剂为无水乙醇、无水甲醇、氯仿、二氯甲烷或乙 醚，或者为无水甲醇、无水乙醇、二氯甲烷和氯仿中的两种，或者为无水 甲醇、无水乙醇和二氯甲烷中的一种与乙醚的混合物。

实施例7

本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后 冻干制成；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素1.5g，固醇 类物质1.5g，磷脂5.4g，脂肪酸0.75g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻 干保护剂为蔗糖；所述冻干保护剂的用量为每100mL脂质体溶液用20g 冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级高纯 蛋黄卵磷脂PC-98T；所述脂肪酸为己酸。

本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取1.5g克拉霉素、1.5g胆固醇硫酸钠盐、5.4g注射级 高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、0.75g己酸和20g蔗糖，将称取的注射级高纯蛋 黄卵磷脂PC-98T和胆固醇硫酸钠盐分散于无水乙醇中完全溶解得到溶液 A，将称取的克拉霉素和己酸分散于无水乙醇中全部溶解得到溶液B，将 溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；

步骤二、配制pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液，然后将步骤一中称取 的蔗糖溶解于磷酸盐缓冲溶液中并将磷酸盐缓冲溶液预热至70℃；

步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后 的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后在加热条件下继续搅拌直至溶液中乙醇 完全挥发，得到脂质体混悬液；所述加热的温度为70℃；

步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质， 然后将经均质后的脂质体混悬液用0.22μm滤膜超滤灭菌，分装，冻干， 得到克拉霉素冻干脂质体；所述均质过程中控制均质温度为5℃～40℃， 均质压力为30MPa～70MPa，均质循环次数为2～10次。

实施例8

本实施例与实施例7相同，其中不同之处在于：所述固醇类物质为胆 固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵 磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC或合成磷 脂MOPC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC 中的至少两种；所述脂肪酸为己二酸或苯甲酸，或者为己酸、己二酸和苯 甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为葡萄糖、海藻糖、麦芽糖或甘露 醇，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至少两种；所述 有机溶剂为无水甲醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无水乙 醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。

实施例9

本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后 冻干制成；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素2.0g，固醇 类物质0.01g，磷脂10g，脂肪酸1.0g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干 保护剂为海藻糖和麦芽糖(质量比2∶3)；所述冻干保护剂的用量为每 100mL脂质体溶液用5g冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐； 所述磷脂为注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80和合成磷脂SOPC (质量比8∶1∶1)；所述脂肪酸为苯甲酸。

本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取2.0g克拉霉素、0.01g胆固醇硫酸钠盐、8.0g注射 级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、1.0g卵磷脂E-80、1.0g合成磷脂SOPC、1.0g 苯甲酸、2.0g海藻糖和3.0g麦芽糖，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T、卵磷脂E-80和合成磷脂SOPC分散于氯仿中完全溶解得到溶液 A，将称取的克拉霉素和苯甲酸分散于氯仿中全部溶解得到溶液B，将溶 液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；

步骤二、配制pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液，然后将步骤一中称取 的冻干保护剂溶解于磷酸盐缓冲溶液中并将磷酸盐缓冲溶液预热至50℃；

步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后 的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后在加热条件下继续搅拌直至溶液中氯仿 完全挥发，得到脂质体混悬液；所述加热的温度为50℃；

步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于超声仪中进行超声，然后 将经均质后的脂质体混悬液用0.22μm滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到 克拉霉素冻干脂质体；所述超声的温度为5℃～40℃，超声功率为200W～ 600W，超声时间为2min～20min。

实施例10

本实施例与实施例9相同，其中不同之处在于：所述固醇类物质为胆 固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄卵 磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂 POPC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的一种、两种或四种以上， 或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成 磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的三种，或者为注射级蛋黄卵磷脂 PL-100M、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的两种 与注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T的混合物，或者为注射级蛋黄卵磷脂 PL-100M、合成磷脂POPC和合成磷脂MOPC中的一种与注射级高纯蛋黄 卵磷脂PC-98T和卵磷脂E-80的混合物；所述脂肪酸为己二酸或己酸，或 者为己酸、己二酸和苯甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为蔗糖、葡 萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的一种或三种以上，或者为蔗糖、葡萄 糖、麦芽糖和甘露醇中的两种，或者为蔗糖、葡萄糖和甘露醇中的一种与 海藻糖的混合物；所述有机溶剂为无水乙醇、无水甲醇、二氯甲烷或乙醚， 或者为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。

实施例11

本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后 冻干制成；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素0.05g，固 醇类物质2.0g，磷脂0.2g，脂肪酸0.01g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述 冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇(等质量比)；所 述冻干保护剂的用量为每100mL脂质体溶液用10g冻干保护剂；所述固 醇类物质为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐(等质量比)；所述磷脂为注射级高 纯蛋黄卵磷脂PC-98T；所述脂肪酸为己二酸。

本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取0.05g克拉霉素、1.0g胆固醇、1.0g胆固醇硫酸钠 盐、0.2g注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、0.01g己二酸、2.0g蔗糖、2.0g 葡萄糖、2.0g海藻糖、2.0g麦芽糖和2.0g甘露醇，将称取的注射级高纯蛋 黄卵磷脂PC-98T、胆固醇和胆固醇硫酸钠盐分散于无水甲醇中完全溶解 得到溶液A，将称取的克拉霉素和己二酸分散于无水甲醇中全部溶解得到 溶液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；

步骤二、配制pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液，然后将步骤一中称取 的蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇溶解于磷酸盐缓冲溶液中并将 磷酸盐缓冲溶液预热至80℃；

步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后 的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后在加热条件下继续搅拌直至溶液中甲醇 完全挥发，得到脂质体混悬液；所述加热的温度为80℃；

步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质， 然后将经均质后的脂质体混悬液超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻 干脂质体；所述均质过程中控制均质温度为5℃～40℃，均质压力为 30MPa～70MPa，均质循环次数为2～10次。

实施例12

本实施例与实施例11相同，其中不同之处在于：所述固醇类物质为 胆固醇或胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、卵磷 脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC或合成磷脂MOPC，或者为注 射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、卵磷脂E-80、 合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC中的至少两种；所述 冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至多四种；所 述有机溶剂为无水乙醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无水 乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。

实施例13

本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后 冻干制成；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素1.5g，固醇 类物质1.5g，磷脂5.4g，脂肪酸0.75g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻 干保护剂为蔗糖；所述冻干保护剂的用量为每100mL脂质体溶液用5g冻 干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级高纯蛋 黄卵磷脂PC-98T；所述脂肪酸为己酸。

本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取1.5g克拉霉素、1.5g胆固醇硫酸钠盐、5.4g注射级 高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和0.75g己酸，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T和胆固醇硫酸钠盐分散于无水乙醇中完全溶解得到溶液A，将称 取的克拉霉素和己酸分散于无水乙醇中全部溶解得到溶液B，将溶液A和 溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；

步骤二、配制pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶 液预热至50℃；

步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后 的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后减压蒸发除掉乙醇，制得脂质体混悬液；

步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于超声仪中进行超声，得到 100mL脂质体溶液；所述超声的温度为5℃～40℃，超声功率为200W～ 600W，超声时间为2min～20min；

步骤五、称取5g蔗糖并将称取的蔗糖溶解于步骤四中所述脂质体溶 液中，用0.22μm滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂质体。

实施例14

本实施例与实施例13相同，其中不同之处在于：所述固醇类物质为 胆固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄 卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC或合成 磷脂MOPC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC 中的至少两种；所述脂肪酸为己二酸或苯甲酸，或者为己酸、己二酸和苯 甲酸中的两种或三种；所述冻干保护剂为葡萄糖、海藻糖、麦芽糖或甘露 醇，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至少两种；所述 有机溶剂为无水甲醇、氯仿、二氯甲烷或乙醚，或者为无水甲醇、无水乙 醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两种。

实施例15

本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后 冻干制成；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素2.0g，固醇 类物质2.0g，磷脂10g，脂肪酸0.01g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述冻干 保护剂为麦芽糖；所述冻干保护剂的用量为每100mL脂质体溶液用20g 冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级高纯 蛋黄卵磷脂PC-98T；所述脂肪酸为苯甲酸。

本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取2.0g克拉霉素、2.0g胆固醇硫酸钠盐、10g注射级 高纯蛋黄卵磷脂PC-98T和0.01g苯甲酸，将称取的注射级高纯蛋黄卵磷 脂PC-98T和胆固醇硫酸钠盐分散于无水甲醇和无水乙醇(体积比1∶2) 中完全溶解得到溶液A，将称取的克拉霉素和苯甲酸分散于无水甲醇和无 水乙醇(体积比1∶2)中全部溶解得到溶液B，将溶液A和溶液B混合 后搅拌均匀，得到油相；

步骤二、配制pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶 液预热至80℃；

步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后 的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后减压蒸发除掉甲醇和乙醇，制得脂质体 混悬液；

步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于超声仪中进行超声，得到 脂质体溶液；所述超声的温度为5℃～40℃，超声功率为200W～600W， 超声时间为2min～20min；

步骤五、称取20g麦芽糖并将称取的麦芽糖溶解于步骤四中所述脂质 体溶液中，用0.22μm滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂 质体。

实施例16

本实施例与实施例15相同，其中不同之处在于：所述固醇类物质为 胆固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄 卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC或合成 磷脂MOPC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC 中的至少两种；所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖或甘露醇，或者 为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖和甘露醇中的至少两种；所述有机溶剂 为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的一种或三种以上，或 者为无水甲醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的两种，或者为氯仿、二氯甲烷 和乙醚中的一种与无水乙醇的混合物。

实施例17

本实施例的克拉霉素冻干脂质体，由脂质体溶液与冻干保护剂混合后 冻干制成；100mL所述脂质体溶液由以下原料制成：克拉霉素0.05g，固 醇类物质0.01g，磷脂0.2g，脂肪酸1.0g，余量为磷酸盐缓冲溶液；所述 冻干保护剂为葡萄糖；所述冻干保护剂的用量为每100mL脂质体溶液用 10g冻干保护剂；所述固醇类物质为胆固醇硫酸钠盐；所述磷脂为注射级 高纯蛋黄卵磷脂PC-98T；所述脂肪酸为己酸、己二酸和苯甲酸(质量比1∶ 2∶2)。

本实施例的克拉霉素冻干脂质体的制备方法包括以下步骤：

步骤一、分别称取0.05g克拉霉素、0.01g胆固醇硫酸钠盐、0.2g注射 级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T、0.2g己酸、0.4g己二酸和0.4g苯甲酸，将称 取的注射级高纯蛋黄卵磷脂PC-98T分散于氯仿中完全溶解得到溶液A， 将称取的克拉霉素、己酸、己二酸和苯甲酸分散于氯仿中全部溶解得到溶 液B，将溶液A和溶液B混合后搅拌均匀，得到油相；

步骤二、配制pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液，然后将磷酸盐缓冲溶 液预热至65℃；

步骤三、在搅拌条件下将步骤一中所述油相滴加至步骤二中经预热后 的磷酸盐缓冲溶液中，滴加结束后减压蒸发除掉氯仿，制得脂质体混悬液；

步骤四、将步骤三中所述脂质体混悬液置于高压均质机中进行均质， 得到脂质体溶液；所述均质过程中控制均质温度为5℃～40℃，均质压力 为30MPa～70MPa，均质循环次数为2～10次；

步骤五、称取10g葡萄糖并将称取的葡萄糖溶解于步骤四中所述脂质 体溶液中，用0.22μm滤膜超滤灭菌，分装，冻干，得到克拉霉素冻干脂 质体。

实施例18

本实施例与实施例17相同，其中不同之处在于：所述固醇类物质为 胆固醇或者为胆固醇和胆固醇硫酸钠盐的混合物；所述磷脂为注射级蛋黄 卵磷脂PL-100M、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC或合成 磷脂MOPC，或者为注射级蛋黄卵磷脂PL-100M、注射级高纯蛋黄卵磷脂 PC-98T、卵磷脂E-80、合成磷脂POPC、合成磷脂SOPC和合成磷脂MOPC 中的至少两种；所述脂肪酸为己酸、己二酸或苯甲酸；所述冻干保护剂为 蔗糖、海藻糖、麦芽糖或甘露醇，或者为蔗糖、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖 和甘露醇中的至少两种；所述有机溶剂为无水甲醇、无水乙醇、二氯甲烷 或乙醚，或者为无水甲醇、无水乙醇、氯仿、二氯甲烷和乙醚中的至少两 种。

对本发明的克拉霉素冻干脂质体进行以下检测试验：

一、克拉霉素冻干脂质体的外观检测和体外释放检测

对本发明的克拉霉素冻干脂质体进行肉眼观察，冻干脂质体形态为为 海绵状团块，其外观不塌陷、不皱缩、颜色均匀、孔隙致密、表面光洁， 体积保持冻干前的体积；将本发明的克拉霉素冻干脂质体复溶，复溶后的 脂质体为半透明乳白色。

图1为本发明实施例1制备的克拉霉素冻干脂质体冻干前的透射电镜 照片，图2为本发明实施例1制备的克拉霉素冻干脂质体复溶前的投射电 镜照片。由图可知，克拉霉素脂质体冻干前后均为多层结构，外形圆整。

图3为本发明实施例1制备的克拉霉素冻干脂质体冻干前和复溶后的 体外释放曲线，两曲线十分相似，表明克拉霉素脂质体在冻干前后其状态 并未发生较大改变。

二、克拉霉素冻干脂质体的粒径分布考察

用经0.22μm微孔滤膜超滤的注射用水将本发明实施例1、实施例7 和实施例13制备的克拉霉素冻干脂质体冻干前样品和复溶后样品分别稀 释至适宜浓度后立即放Nicomp^TM380粒度测定仪中，测定粒径分布。与 冻干前的脂质体溶液的粒径分布进行比较，结果见表1。

表1粒径分布测定结果

  实施例   冻干前的PSD(nm)   复溶后的PSD(nm)   1   136.9±57   190.9±76   7   140±59   196±77   13   142±58   192±78

从表1可以看出，实施例1、实施例7和实施例13制备的克拉霉素冻 干脂质体在冻干前后的粒径分布变化很小，均在200nm以下，满足静脉注 射用要求。

三、克拉霉素冻干脂质体的zeta电位测定

采用Nicomp^TM380进行zeta电位的测定。用经0.22μm微孔滤膜超滤 的注射用水将本发明实施例1、实施例7和实施例13制备的克拉霉素冻干 脂质体冻干前样品分别稀释至适宜浓度后立即放入Nicomp^TM380样品池 内，测定zeta电位，三批样品冻干前zeta电位测定结果见表2。

表2zeta电位测定结果

  实施例   1   7   13   Zeta电位(mv)   -21.32   -22.52   -23.16

从表2可以看出，本发明制备的克拉霉素冻干脂质体的zeta电位为 -23.16mv～-21.32mv，满足稳定的微粒液体体系对zeta电位一般控制在 -20mv～-45mv范围内的要求。

四、克拉霉素冻干脂质体的克拉霉素含量测定及包封率的考察

采用甲醇破乳，用HPLC测定本发明实施例1、实施例7和实施例13 制备的克拉霉素冻干脂质体中克拉霉素的含量。用体外微渗析的方法测定 包封率，结果如表3所示。

表3克拉霉素含量和包封率测定结果

  实施例   1   7   13   含量(％)   100.0   98.85   99.16   包封率(％)   95.56   96.64   94.53

从表3可以看出，本发明制备的克拉霉素冻干脂质体的含量均在98％ 以上，包封率均在95％左右，质量稳定。

五、克拉霉素冻干脂质体的长期稳定性的考察

将实施例1、实施例7和实施例13制备的克拉霉素冻干脂质体放置于 25℃±2℃和4±2℃条件下储存3个月，分别于第1、2、3月取样进行各项 理化性质的检查与测定，结果见表4和表5。

表4克拉霉素冻干脂质体长期稳定性试验结果(25℃±2℃)

表5克拉霉素冻干脂质体长期稳定性试验结果(4±2℃)

从表4和表5可以看出，在25℃±2℃和4±2℃条件下放置3个月，克 拉霉素冻干脂质体的外观、pH值、药物含量、包封率以及复溶后粒径等 指标都没有发生显著的变化，仍符合静脉用药要求。

六、克拉霉素冻干脂质体的动物实验

6.1小鼠抓挠试验

将实验小鼠随机分3组：阴性对照组、阳性对照组和待检组，每组6 只小鼠，以小鼠背部皮下注射的方式给药，阴性对照组注射生理盐水，阳 性对照组注射克拉霉素溶液剂，待检组注射经注射用水稀释的克拉霉素冻 干脂质体，注射量均为0.15mL，记录注射后15min内每只小鼠抓挠给药 部位的首次时间和总次数，其中克拉霉素溶液剂和稀释后的克拉霉素冻干 脂质体的克拉霉素浓度均为4mg/mL。结果用T检验进行统计，见表6。

表6小鼠抓挠试验结果(15min内)

  组别   发生率  首次时间(s)   次数   抑制率   n   P   阴性对照组   83％(5/6)   315   3.5±3.5   94％   6   ＜0.01   阳性对照组   100％(6/6)   52   56.7±21.7   0％   6   待检组   83％(5/6)   128   9.7±10.8   83％   6   ＜0.01

结果表明，在95％的置信区间内，克拉霉素冻干脂质体与溶液剂相比 存在显著性差异，对疼痛的抑制率达到80％以上，明显降低了疼痛和刺激 性。对疼痛的抑制率是以15min内每只小鼠抓挠给药部位的总次数为指标， 以阳性对照组为参照计算而得。

6.2大鼠舔足试验

将实验大鼠(体重80g～120g)随机分为3组：阴性对照组、阳性对 照组和待检组，每组6只，以大鼠右后足注射的方式给药，阴性对照组注 射生理盐水，阳性对照组注射克拉霉素溶液剂，待检组注射经注射用水稀 释的克拉霉素冻干脂质体，注射量均为0.1mL，记录注射后15min内每只 大鼠舔足的首次时间和总舔足次数，其中克拉霉素溶液剂和稀释后的克拉 霉素冻干脂质体的克拉霉素浓度均为4mg/mL。结果用T检验进行统计， 见表7。

表7大鼠舔足试验结果(15min内)

  组别   发生率  首次时间(s)   次数   抑制率   n   P   阴性对照组   17％(1/6)   ---   0.5±1.2   98.5％   6   ＜0.01   阳性对照组   100％(6/6)   243   33.8±11.3   0％   6   待检组   83％(5/6)   302   6.7±4.8   80.3％   6   ＜0.01

结果表明，在95％的置信区间内，克拉霉素冻干脂质体与溶液剂相比 存在显著性差异，对疼痛的抑制率达到80％以上，明显降低了疼痛和刺激 性。对疼痛的抑制率是以15min内每只大鼠舔足的总次数为指标，以阳性 对照组为参照计算而得。

6.3兔静脉刺激性试验

将实验家兔(体重3kg左右)随机分为2组，即阴性对照组和待检组， 每组3只，各组均采用耳静脉注射方式给药，其中阴性对照组注射克拉霉 素溶液剂，待检组注射用注射用水稀释的克拉霉素冻干脂质体，两组中的 克拉霉素浓度均为2mg/mL，每只兔子给药5mL，给药速度均为2mL/min， 连续给药3天。给药过程中观察给药部位是否变色、出现红斑和肿胀。末 次给药后处死兔子，将兔子耳静脉组织制成病理切片(见图4a～图4d)， 从图4a～图4d中可以看出，阴性对照组存在明显的炎性细胞浸润，待检组 与阴性对照组相比存在显著性差异，待检组可以明显降低血管刺激性。

综上所述，本发明的克拉霉素冻干脂质体，其载药量最高可达 20mg/mL，冻干复溶后的粒径在200nm以下，冻干后的pH值，包封率， 含量均保持稳定；与溶液剂相比，可显著的降低克拉霉素引起的给药部位 疼痛和血管刺激性，其各项指标都达到了国家食品药品管理局关于新药研 究开发的要求，为克拉霉素脂质体制剂的工业化生产和临床应用奠定了基 础。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡 是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效 结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。