枳实或枳实提取物的新用途

摘要

本发明提供了枳实或枳实提取物在制备治疗肠易激综合征的药物中的用途。本发明还提供了以枳实或枳实提取物为基础的药物组合物。枳实提取物可通过改善肠敏感性，降低结肠频率、峰电位、峰峰值及峰面积，从而在对肠易激综合征的治疗过程中发挥显著疗效，能够抑制肠易激综合征所致的腹痛，改善结肠功能紊乱的现象，为临床用药提供了一种新的选择。

说明书

技术领域

本发明涉及一种枳实或枳实提取物的新用途。属于药物领域。

背景技术

肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome，IBS)最早于1820年由Powell 报道，属于胃肠功能紊乱性疾病，指一组包括腹痛、腹胀、排便习惯和大便 性状异常，持续存在或间歇发作，而无形态学和生化异常改变的症候群，是 临床上最为常见的功能性胃肠病之一。目前IBS诊断主要以症状学为依据并 建立在排除器质性疾病的基础上。近年来许多研究显示胃肠动力障碍和内脏 感觉异常是本病症状的主要病理生理基础，而其发病明显受到心理社会因素 的影响。各地研究报道显示IBS是一种世界范围内的常见病、多发病，其发 病率相当高。根据流行病学调查，西方国家的人群患病率约9％-22％，以女性 较男性多见，比例约2∶1-3∶1。在我国所进行的调查显示，北京地区IBS的人 群患病率是1％(罗马标准)-7％(Manning标准)，广东地区用罗马∏标准调 查的IBS人群患病率为5.67％，中国人群患病率估计在20％。

IBS的病因与发病机制尚未完全清楚，尽管人们不断提出各种假说试图阐 明其发病机制及病理生理，但都不能以一种单一的发病机制来完全解释所有 IBS的临床表现，而且各种可能的发病机制间又有着相互的联系。其发病机制 包括：动力异常、内脏感觉异常、脑-肠轴异常、炎症、内分泌异常、神经- 免疫-内分泌网络调控异常及心理社会因素等。

由于临床上IBS的病因病机以肝郁脾虚型最为常见，因此多数医家在治 疗腹泻型IBS时均采用疏肝健脾法为基础随证加减。常用的基础方主要有四 逆散、痛泻要方、柴胡疏肝散、参苓白术散、逍遥散、芍药甘草汤等。

中药枳实，为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙C. sinensis Osbeck的干燥幼果。其味苦、辛、酸，性微寒，归脾、胃经，能破气 消积，化痰散痞。目前研究认为，枳实可杀灭幽门螺旋杆菌，对胃、十二指 肠溃疡有一定的治疗作用，它还能够增加冠脉流量，对心血管有一定保护作 用。

由于枳实的药用功效较为突出，目前市面上已经出现了以枳实提取物为 原料的保健品或药品。例如，焦士蓉等发现，枳实的70％乙醇提取物具有增强 肝脏的抗氧化能力的作用，其所得枳实提取物中，总黄酮含量达到了70％以上。 (《卫生研究》，2007年36卷6期，P689-692)。当前也有人对枳实提取物的标 准进行了研究，如《中药天然提取物质量技术标准规范实用手册》，萧三贯， 中国医药科技电子出版社，第393页，该标准中指出，枳实醇提物中辛弗林 的含量应≥30％。

目前，还未见将枳实及其提取物用于治疗肠易激综合征的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种枳实或枳实提取物的新用途。

本发明提供了枳实或枳实提取物在制备治疗肠易激综合征的药物中的用 途。

进一步地，所述药物是治疗内脏高敏感性肠易激综合征的药物。

进一步地，所述药物是治疗腹痛、结肠功能紊乱的药物。

其中，所述枳实提取物中，总黄酮含量以柚皮苷计不得低于50％。

进一步地，所述枳实提取物中，柚皮苷含量：2.5-3.0％W/W，陈皮苷含量： 0.6-1.0％W/W。

进一步地，所述枳实提取物中，辛弗林的含量大于2.5％W/W。

其中，所述枳实提取物是由如下方法制备得到的：

(1)取枳实粗粉，加水煎煮后，水提液和滤渣备用；

(2)取步骤(1)所得滤渣，用60-80％V/V乙醇提取，提取液回收乙醇 后，得醇提液；

(3)将步骤(1)的水提液和步骤(2)的醇提液合并，浓缩后，加入乙 醇至含醇量不低于50％V/V，醇沉后，过滤，沉淀备用，将上清液浓缩、干燥 后，与沉淀混合，即得枳实提取物。

进一步地，步骤(2)所述乙醇的浓度为70％V/V。

更进一步地，步骤(3)中所述含醇量不低于60％V/V。

本发明还提供了一种治疗肠易激综合征的药物组合物，它是由枳实提取 物为活性成分，加上、药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

本发明还提供了枳实在制备治疗肠易激综合征药物的原料中的用途。

枳实提取物可以改善肠敏感性，降低结肠频率、峰电位、峰峰值及峰面 积，在对肠易激综合征的治疗过程中发挥显著疗效，能够抑制肠易激综合征 所致的腹痛，改善结肠功能紊乱的现象，为临床用药提供了一种新的选择。

以下通过具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。 但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发 明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

实施例1 本发明枳实提取物的制备

(1)取枳实粗粉，加水煎煮8小时，加水12倍量，水提取液和滤渣备 用；

(2)取步骤(1)所得滤渣，加10倍量70％V/V乙醇回流提取2次，每 次1小时，回收乙醇后，得醇提液；

(3)将步骤(1)的水提取液和步骤(2)的醇提液合并，浓缩后，加入 95％V/V乙醇至含醇量60％V/V，醇沉后，过滤，沉淀备用，将上清液浓缩、干 燥后，与沉淀混合，即得枳实提取物。

枳实提取物中总黄酮含量测定：

采用紫外分光光度法测定枳实总黄酮含量。

标准曲线的测定：精密称取柚皮苷对照品5.3mg，置50ml量瓶中，甲醇定 容至刻度，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0， 2.5，3.0ml于10ml量瓶中，甲醇定容至刻度，以甲醇为空白，在283nm处测吸收 度。得回归方程为：A＝0.026C-0.001，r＝0.999。线性范围为5.3～30.71μg

实验结果：枳实提取物中总黄酮含量：52.89％W/W。

本发明枳实提取物，是从芸香科常绿小乔木植物酸橙Citrus aurantium L. 及其栽培变种或甜橙C.sinensis Osbeck的幼果中提取得到。

实施例2 本发明枳实提取物中陈皮苷和柚皮苷的含量测定

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-水(23∶ 77)；流速1ml/min(检测波长：283nm)。

对照品溶液的制备：变色硅胶干燥24小时，用水配成柚皮苷12ug/ml， 陈皮苷14ug/ml。

供试品溶液的制备：取枳实提取物0.3g(实施例1制备)，精密称定，置 圆底烧瓶中，加入甲醇30ml，摇匀，置水浴中回流提取1h，取出，冷却至室 温，滤过，用甲醇分次洗涤容器、滤纸和药渣，洗液与滤液合并，蒸干，残 渣加甲醇溶解并定容至25ml，备用。(提取物12mg/ml)

进样量：20ul

实验结果：枳实提取物中柚皮苷含量：2.695％W/W，陈皮苷含量： 0.841％W/W。

实施例3 本发明枳实提取物中辛弗林含量测定

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸二氢钾水溶 液(取磷酸二氢钾0.6g，十二烷基磺酸钠1.0g，冰醋酸1ml，加水溶解并稀 释至1000ml)(50∶50)为流动相；检测波长为275nm。

对照品溶液的制备：变色硅胶干燥24小时，辛弗林对照品30ug/ml水。

供试品溶液的制备：取枳实提取物约1g(实施例1制备)，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1.5小时，放冷， 再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml， 蒸干，残渣加水10ml使溶解，摇匀，通过聚酰胺柱(60～90目，2.5g，内径 1.5cm，干法装柱)，用水25ml洗脱，收集洗脱液，转移至25ml量瓶中，加 水至刻度，摇匀，即得。(提取物8mg/ml)

进样量：20ul(满环进样)

实验结果：本发明枳实提取物中辛弗林含量为2.578％W/W。

以下通过药效学试验进一步证明本发明的有益效果。

本发明的药效实验中，均采用冰醋酸、芥末油制作肠易激综合征(IBS) 模型，对目标药物进行药效研究。本发明所用具体造模方法，是采用朱力阳 等报道的内脏高敏感性模型建立的(朱力阳，等，《中国药理学通报》，2010 年26卷2期，267-269页)。使用该造模方法，在一段时间内连续给予化学刺 激后，实验动物出现了明显的IBS临床表现，实验表明，该方法重复性良好。

实验例1 枳实提取物治疗冰醋酸内脏高敏感性IBS疾病模型的实验研究

1.1 材料和方法

1.1.1 药物

1.1.1.1 受试药物：枳实提取物(实施例1制备)，实验前用蒸馏水配制成 浓度为3.7％、1.85％、0.926％

1.1.1.2 阳性药物：曲美布丁片，天津田边制药有限公司生产，生产批号： 0905005，规格：0.1g/片×20片/盒。实验时用蒸馏水配制成浓度为2％(每毫 升含曲美布丁0.02g)的药液，备用。

1.1.1.3 主要试剂：0.5％冰醋酸(体积分数)，1.5％戊巴比妥钠，生理盐水， 液体石蜡。

1.1.2 动物

SD大鼠，雌雄兼有，体重200±20g，由成都中医药大学实验动物研究中 心提供，许可证号：SCXK(川)2008-11，检疫后备用。

1.1.3 器材

电子天平PA2003(上海天平仪器厂生产)

8F导尿管(湛江市事达实业有限公司)

BL-420E生理机能仪(成都泰盟科技有限公司生产)

秒表、温度计、卷尺、注射器

1.1.4 实验方法

SD大鼠雌雄兼有，随机分为空白组，模型组，自然恢复组，阳性药组， 枳实提取物高、中、低剂量组。所有需造模大鼠禁食24h后，在清醒状态下 用钝针头经肛门插入直肠灌注0.5％冰醋酸(体积分数)，5ml/kg，首剂剂量浓 度加倍，连续6天，灌注后使大鼠头部朝下，肛门朝上托10秒。从第7天开 始，除空白组、模型组外，各组分别灌胃生理盐水，2％曲美布丁，各组分高、 中、低剂量药液，10ml/kg。1次/天，连续3天。

末次给药/造模前禁食24h，末次给药/造模后1h经肛门直肠扩张(CRD) 后，观察动物腹部撤离反射(AWR)，评价动物的内脏敏感性。肠敏感性测定 结束后，立即用1.5％戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉动物，按外科常规手 术行下腹正中切口，将自制针灸针银电极埋置于结肠浆膜面，距回盲部约2cm， 双极的间距5mm，用BL-420E生理记录仪同步描记胃肠电，时间常数5s，高 频滤波0.3Hz。待波形稳定后，记录5分钟内的电生理活动，计算频率、峰电 位、峰峰值、峰面积。

1.2 实验结果

见表1、2。

表1 枳实提取物对冰醋酸所致IBS模型大鼠肠敏感性的影响

注：与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01。

表2 枳实提取物对冰醋酸所致IBS模型大鼠结肠肌电的影响

1.3 结论

由以上结果知，枳实提取物高、低剂量组能对抗冰醋酸所致大鼠肠敏感 性，使抬腹、拱背阈值增高，还能有效改善冰醋酸所致大鼠结肠肌电频率。

实验例2 枳实提取物治疗芥末油内脏高敏感性IBS疾病模型的实验研究

1.1 材料及方法

1.1.1 药物

1.1.1.1 受试药物：枳实提取物(实施例1制备)，实验前用蒸馏水配制成浓 度为3.7％、1.85％、0.926％。

1.1.1.2 阳性药物：曲美布丁片，天津田边制药有限公司生产，生产批号： 0905005，规格：0.1g/片×20片/盒。实验时用蒸馏水配制成浓度为2％(每毫 升含曲美布丁0.02g)的药液，备用。

1.1.1.3 主要试剂：5％芥末油(体积分数)，1.5％戊巴比妥钠，生理盐水，液 体石蜡。

1.1.1.4 动物

SD大鼠，雌雄兼有，体重200±20g，由成都中医药大学实验动物研究中心提 供，许可证号：04-11号，检疫后备用。

1.1.1.5 器材

电子天平PA2003(上海天平仪器厂生产)

8F导尿管(湛江市事达实业有限公司)

BL-420E生理机能仪(成都泰盟科技有限公司生产)

秒表、温度计、卷尺、注射器

1.1.2 实验方法

SD大鼠雌雄兼有，随机分为空白组，模型组，自然恢复组，阳性药组， 枳实提取物高、中、低剂量组。

所有需造模大鼠禁食24h后，在清醒状态下用钝针头经肛门插入直肠灌 注5％芥末油(体积分数)，4ml/kg，首剂剂量浓度加倍，连续6天，灌注后 使大鼠头部朝下，肛门朝上托10秒。从第7天开始，除空白组、模型组外， 各组分别灌胃生理盐水，2％曲美布丁，各组分高、中、低剂量药液，10ml/kg。 1次/天，连续3天。

末次给药/造模前禁食24小时，末次给药/造模后1小时经肛门直肠扩张 (CRD)后，观察动物腹部撤离反射(AWR)，评价动物的内脏敏感性。肠敏 感性测定结束后，立即用1.5％戊巴比妥钠35mg/kg腹腔注射麻醉动物，按外 科常规手术行下腹正中切口，将一对针灸针自制银电极埋置于结肠浆膜面， 距回盲部约2cm，双极的间距5mm，用BL-420E生理记录仪同步描记胃肠电， 时间常数5s，高频滤波0.3Hz。待波形稳定后，记录五分钟内的电生理活动， 计算频率、峰电位、峰峰值、峰面积。

1.2 实验结果

1.2.1 枳实提取物对芥末油所致IBS模型大鼠肠敏感性和结肠肌电的影响

表3 枳实提取物对芥末油所致IBS模型大鼠肠敏感性的影响

注：与模型组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01。

表4 枳实提取物对芥末油所致IBS模型大鼠结肠肌电的影响

注：与模型组比较^*P＜0.05。

1.3 结论

根据剂量换算可知，每人每日用枳实提取物给药量高、中、低剂量分别 为58.98、29.49、14.74mg/kg。

由上述实验可知，枳实提取物高、中、低剂量组能对抗大鼠肠敏感性， 使抬腹、拱背阈值增高，表明枳实提取物能够很好地抑制肠易激综合征所致 的腹痛；同时，枳实提取物高、中、低剂量组还能改善结肠频率、峰电位、 峰峰值及峰面积，表明枳实提取物能够对结肠功能紊乱有调节作用，改善肠 易激综合征所致的便秘或腹泻现象。

综上所述，枳实提取物可通过改善肠敏感性，降低结肠频率、峰电位、 峰峰值及峰面积，从而在对肠易激综合征的治疗过程中发挥显著疗效，能够 抑制肠易激综合征所致的腹痛，改善结肠功能紊乱的现象，为临床用药提供 了一种新的选择。