ERK1/2抑制剂通过刺激巨噬细胞干扰素γ表达抑制肿瘤生长

摘要

本发明涉及一种治疗肿瘤的新方法。IFNγ是抗病毒、抗肿瘤的重要细胞因子，LXR是配体激活转录分子，ERK1/2抑制剂是进行临床II期实验的治疗肿瘤候选药物。我们的研究中发现：

说明书

技术领域

本发明涉及ERK1/2抑制剂调控巨噬细胞干扰素伽马(interferon γ，IFNγ)在抑制肿瘤中发挥极大作用 以及建立一种机理明确的预防和治疗肿瘤的新途径。

背景技术

肺肿瘤是当前肿瘤治疗的研究热点之一，并且是目前处于死亡率首位的肿瘤，对其防治具有显著的理 论与应用价值。IFNγ作为抗病毒感染、抗肿瘤的重要细胞因子，其表达调控一直被局限在T细胞和NK细 胞中，并且如何调控IFNγ表达的组织、细胞特异性与相关信号通路并不明确。LXR是近年来开展研究的 一个重要转录因子，虽然LXR在胆固醇与脂质代谢中的功能有较详细的研究，但LXR是否在肿瘤、免疫 系统中发挥功能尚不清晰。在我们的前期研究中发现：LXR配体刺激巨噬细胞IFNγ表达、抑制肿瘤增长； ERK1/2抑制剂激活LXR去刺激IFNγ表达。巨噬细胞是体内分布广泛的细胞，由于抗感染、抗病毒、增 强免疫等方面的要求，巨噬细胞在肺部中非常丰富，理论上，巨噬细胞是否表达IFNγ及其调控一直是该领 域的空白，在实际应用中，由于巨噬细胞分布的广泛性和数量庞大，ERK1/2抑制剂通过刺激巨噬细胞IFNγ 表达来抑制肿瘤的增长具有明显的可行性。

发明内容

为了解决肺肿瘤的治疗，本发明涉及ERK1/2抑制剂刺激巨噬细胞IFNγ表达、抑制肿瘤生长的作用 以及建立一种机理明确的预防和治疗肿瘤的新途径。本发明的目的之一是阐明ERK1/2抑制剂抑制肿瘤生 长的机理，并以此为基础研究其预防和治疗肿瘤的效果。

本发明的有益效果是：首先ERK1/2抑制剂能够刺激巨噬细胞IFNγ的表达，并且通过转录水平的单一 信号通路调节，机理明确，而且巨噬细胞分布广泛，尤其在肺部，通过刺激肺部巨噬细胞IFNγ表达来抑制 肿瘤的增长，从而达到预防和治疗的目的。

附图说明：

附图1：ERK1/2抑制剂刺激体外巨噬细胞IFNγ表达

附图2：ERK1/2抑制剂上调小鼠体内组织IFNγ的水平

附图3：ERK1/2抑制剂U0126抑制移植肺肿瘤细胞的体内生长

具体实施方式

1.测试ERK1/2抑制剂对肺肿瘤的预防效果：A).我们将平行采用野生型小鼠和IFNγ敲除小鼠，给 小鼠喂食ERK1/2抑制剂7-10天，之后建立小鼠肺肿瘤模型，在此期间持续给药，每天观察小鼠的肿瘤 体积和生长情况，测试控制组和给药组之间的差别。并且通过IFNγ敲除小鼠组判断其预防肿瘤的效果与 IFNγ之间的关系。B).对不同组的小鼠进行血清中IFNγ浓度检测，观察IFNγ浓度变化与肿瘤生长状况之 间的关系。依据我们前期对野生小鼠的实验结果观察发现，在肿瘤移植1周后出现可测肿瘤，在肿瘤出现 后的3-4周，半数小鼠将陆续死亡。因此，对移植肿瘤模型鼠，在给药3-4周左右对存活的部分小鼠终止 实验，收集肿瘤、组织、血液等样本，分析野生小鼠血清中IFNγ浓度，对组织、肿瘤等进行切片、免疫组 化分析，观察肿瘤的内部结构的变化。其余的存活部分小鼠则持续给药观察能否延长生命、改善由肿瘤造 成的各种损害。而采用致癌剂诱导的肺肿瘤出现并导致死亡则一方面需要更长的时间(18-24周)，另一方 面则是肿瘤块出现在肺部，无法目测，采用活体成像技术来检测肺肿瘤出现的时间、大小等。在实验进行 到18周左右，将对部分存活小鼠终止实验，通过对样本的收集、分析，确定ERK1/2抑制剂对致癌剂诱 导的肺肿瘤预防效果，并比较野生小鼠与IFNγ敲除小鼠之间的差异，从而确定预防效果对IFNγ的依赖性。 余下的存活小鼠则持续给药，进一步地观察更长时期的预防效果。

2.测试ERK1/2抑制剂对肺肿瘤的治疗效果，分别采用早、中、晚期阶段进行。肿瘤细胞在移植1 周后出现可测肿瘤块，2周之后肿瘤增长明显加快，4周左右过半数小鼠死亡；而致癌物诱导的肺肿瘤则 在16周左右出现，而出现死亡则在24周左右。因此，早、中、晚期将依据于模型而变动。对移植型，我 们拟采用肿瘤细胞移植后1周、2周和3周开始给药。对致癌物诱导型则在致癌物注射后的10周、15周 和20周左右开始给药。在给药前后分别通过用卡尺测量和活体成像技术对移植型和诱导型肿瘤的出现、 增长进行详细的观察、记录。实验分别在4周和24周结束，结束前对部分存活小鼠进行血清中IFNγ量的 检测，并与肿瘤生长相关联，对于实验结束前死亡的小鼠进行组织取样、免疫组化分析等，以确定药物功 效和对IFNγ表达的刺激作用。