胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束及其制备方法和制剂

摘要

本发明胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束及其制备方法和制剂，属于中药制剂及其制备方法技术领域。所述复合胶束包括胸腺肽、磷脂和胆盐，将磷脂制成脂膜，胆盐制成胆盐溶液后，将两者混合，再将胸腺肽加入到磷脂/胆盐空白胶束中获得；其中复合胶束中磷脂与胆盐的摩尔比为1∶0.2～2，磷脂与胸腺肽的重量比为1∶0.1～1。本发明不仅能将胸腺肽分子包埋其中，产生保护作用，还能增加其对小肠壁的粘附和透过作用，从而显著提高胸腺肽的生物利用度；制备方法简便、重现性好，适合工业化生产的优点。

说明书

技术领域

本发明属于中药制剂及其制备方法技术领域，具体涉及胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束 及其制备方法和制剂。

背景技术

胸腺肽是胸腺组织上皮细胞分泌的多肽类激素，它可促进T细胞的成熟，同时参与 神经内分泌系统和免疫系统的交互作用，可以激活细胞免疫。目前胸腺肽制剂可用于治 疗和预防呼吸道感染、慢性咽炎、过敏性哮喘、肝炎、自身免疫性疾病以及肿瘤放疗和 化疗引起的白血球减少等症，是一种无可替代的免疫多肽。

胸腺肽类药物主要分为两类：一类是单一的胸腺肽分子，如单肽α1；另一类是胸腺 肽提取物制剂，其主要成分多为TF₅。市售胸腺肽的剂型以注射剂为主，口服剂型有胶囊、 结肠溶制剂；另外还有片剂、粉针剂、水剂等，这些剂型主要成分大多为TF₅，也有人工 合成的胸腺肽α1，如美国赛生公司的日达仙、成都地奥九泓制药厂的迈普新。

磷脂为含有磷酸根的脂类物质的总称，是动植物细胞中细胞膜、核膜和类脂膜的基 本成分，在生物体代谢中有着重要的生理功能。磷脂广泛存在于动物的脑髓、内脏、血 液、乳汁、蛋黄及植物的种子中，具有来源广泛、无毒等优点。磷脂具有乳化、分散， 助渗、润湿等特性，并对皮肤和粘膜有很强的亲和力，在药剂中用作分散剂、润滑剂、 乳化剂、稳定剂、头皮促进剂、前提药物载体等。

胆酸盐类胆盐包括天然胆汁、去氧胆酸钠，鹅去氧胆酸钠、苷氨胆酸钠及牛黄胆酸 钠等，作为小分子类的肠道吸收促进剂使用时，可明显增加药物在空肠和结肠的透过和 吸收。

胶束是过量的表面活性剂在水中自组装形成的胶体溶液。

发明内容

为了解决上面提到的现有技术所存在的问题，本发明的一个目的是公开了一种胸腺 肽的磷脂/胆盐复合胶束。

本发明的第二个目的在于提供了所述胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供了由胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束制备所得的制剂。

本发明的技术方案如下：

一种胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束，其中，所述复合胶束包括胸腺肽、磷脂和胆盐， 其中复合胶束中磷脂与胆盐的摩尔比为1∶0.2～2，磷脂与胸腺肽的重量比为1∶0.1～ 1。

上述技术方案中所述的胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束，其中，所述复合胶束中磷脂与 胆盐的摩尔比为1∶0.8～1，磷脂与胸腺肽的重量比为1∶0.1～0.5。

上述技术方案中所述的胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束，其中，所述磷脂为豆磷脂或卵 磷脂；胆盐选自天然胆汁、去氧胆酸钠、鹅去氧胆酸钠、甘氨胆酸钠或牛黄胆酸钠中的 一种。

上述技术方案中所述的胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束，其中，所述卵磷脂选自大豆卵 磷脂、蛋黄卵磷脂或氢化卵磷脂中的一种。

由上述技术方案中任一技术方案所述的胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束制备的剂型，其 中，所述剂型为口服制剂或注射制剂，所述口服制剂或注射制剂由胸腺肽的磷脂/胆盐复 合胶束与药学上可接受的载体组成。

上述技术方案中所述的胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束制备的剂型，其中，所述口服制 剂为肠溶胶囊或肠溶片，所述注射制剂为注射液或冻干粉针剂。

上述技术方案中任一技术方案所述的胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的制备方法，包括 下述步骤：

(1)将磷脂加至有机溶剂中制成标准液，在氮气下吹干大部分溶剂，再放入真空干燥 箱常温过夜以除去微量的有机溶剂，制成脂膜；

(2)将胆盐溶于pH＝6.5的磷酸盐缓冲液中，制成所需浓度的胆盐溶液(MBS液)；

(3)将脂膜与胆盐溶液(MBS液)在45℃水浴中超声混合45min，即得空白磷脂/胆盐 胶束溶液；

(4)将胸腺肽加入到磷脂/胆盐空白胶束中，充氮密封，置恒温磁力搅拌器上，均匀 搅拌24h，得载药胶束，即胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束。

上述技术方案中所述的胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的制备方法，其中，所述步骤(1) 中的有机溶剂选自氯仿、乙醚、乙醇、石油醚或脂肪油中的一种或几种的任何比例的组 合，所述标准液的质量浓度为30～70mmol/L；所述步骤(2)中的胆盐溶液(MBS液)的质 量浓度为5～20mmol/L。

上述技术方案中所述的胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的制备方法，其中，所述步骤(1) 中的有机溶剂优选为石油醚、氯仿、乙醚、乙醇。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明药物胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束与市场上现有的胸腺肽肠溶胶囊相比可 以提高胸腺肽在大鼠小肠的吸收，使得本发明药物具有更好的治疗作用；

2、本发明所述的方法通过胸腺肽与一定量的磷脂，胆盐在适宜溶剂和条件下形成磷 脂/胆盐胶束，不仅能将胸腺肽分子包埋其中，产生保护作用，还能增加其对小肠壁的粘 附和透过作用，从而显著提高胸腺肽的生物利用度，进而增加临床疗效；

3、本发明药物的制备方法简便、重现性好，适合工业化生产。

附图说明：

1、图1为胸腺肽的磷脂/胆盐胶束冻干粉和胸腺肽肠溶胶囊两种药物在空肠段的吸 收曲线比较。

具体实施方式：

为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的制备

(1)将豆磷脂333.9mg加入10ml石油醚中制成标准液，在氮气下吹干大部分溶剂， 再放入真空干燥箱常温过夜以除去微量的有机溶剂，制成脂膜；

(2)将牛黄胆酸钠40.08mg溶于4.5ml的PBS缓冲液(pH＝6.5的磷酸盐缓冲液)中， 制成所需胆盐溶液(MBS液)；

(3)将脂膜与MBS液在45℃水浴中超声混合45min，即得空白磷脂/胆盐胶束溶液；

(4)将6ml胸腺肽溶液加入到磷脂/胆盐空白胶束中，充氮密封，置恒温磁力搅拌器 上，均匀搅拌24h，得载药胶束，即胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束。

实施例2：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的制备

(1)将豆磷脂333.9mg加入8ml氯仿中中制成标准液，在氮气下吹干大部分溶剂，再 放入真空干燥箱常温过夜以除去微量的有机溶剂，制成脂膜；

(2)将去氧胆酸钠40.08mg溶于4.5ml的PBS缓冲液(pH＝6.5的磷酸盐缓冲液)中， 制成所需MBS液；

(3)将脂膜与MBS液在45℃水浴中超声混合45min，即得空白磷脂/胆盐胶束溶液；

(4)将6ml胸腺肽溶液加入到磷脂/胆盐空白胶束中，充氮密封，置恒温磁力搅拌器 上，均匀搅拌24h，得载药胶束，即胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束。

实施例3：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的制备

(1)将豆磷脂333.9mg加入9ml乙醚中制成标准液，在氮气下吹干大部分溶剂，再放 入真空干燥箱常温过夜以除去微量的有机溶剂，制成脂膜；

(2)将鹅去氧胆酸钠40.08mg溶于4.5ml的PBS缓冲液(pH＝6.5的磷酸盐缓冲液)中， 制成所需MBS液；

(3)将脂膜与MBS液在45℃水浴中超声混合45min，即得空白磷脂/胆盐胶束溶液；

(4)将6ml胸腺肽溶液加入到磷脂/胆盐空白胶束中，充氮密封，置恒温磁力搅拌器 上，均匀搅拌24h，得载药胶束，即胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束。

实施例4：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的制备

(1)将卵磷脂333.9mg加入10ml乙醇中制成标准液，在氮气下吹干大部分溶剂，再 放入真空干燥箱常温过夜以除去微量的有机溶剂，制成脂膜；

(2)将牛黄胆酸钠40.08mg溶于4.5ml的PBS缓冲液(pH＝6.5的磷酸盐缓冲液)中， 制成所需MBS液；

(3)将脂膜与MBS液在45℃水浴中超声混合45min，即得空白磷脂/胆盐胶束溶液；

(4)将6ml胸腺肽溶液加入到磷脂/胆盐空白胶束中，充氮密封，置恒温磁力搅拌器 上，均匀搅拌24h，得载药胶束，即胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束。

实施例5：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的制备

(1)将卵磷脂333.9mg加入8ml乙醚中中制成标准液，在氮气下吹干大部分溶剂，再 放入真空干燥箱常温过夜以除去微量的有机溶剂，制成脂膜；

(2)将去氧胆酸钠40.08mg溶于4.5ml的PBS缓冲液(pH＝6.5的磷酸盐缓冲液)中， 制成所需MBS液；

(3)将脂膜与MBS液在45℃水浴中超声混合45min，即得空白磷脂/胆盐胶束溶液；

(4)将6ml胸腺肽溶液加入到磷脂/胆盐空白胶束中，充氮密封，置恒温磁力搅拌器 上，均匀搅拌24h，得载药胶束，即胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束。

实施例6：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的制备

(1)将豆磷脂333.9mg加入9ml氯仿中制成标准液，在氮气下吹干大部分溶剂，再放 入真空干燥箱常温过夜以除去微量的有机溶剂，制成脂膜；

(2)将鹅去氧胆酸钠40.08mg溶于4.5ml的PBS缓冲液(pH＝6.5的磷酸盐缓冲液)中， 制成所需MBS液；

(3)将脂膜与MBS液在45℃水浴中超声混合45min，即得空白磷脂/胆盐胶束溶液；

(4)将6ml胸腺肽溶液加入到磷脂/胆盐空白胶束中，充氮密封，置恒温磁力搅拌器 上，均匀搅拌24h，得载药胶束，即胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束。

实施例7：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束冻干粉的制备：

将实施例1～6制得的胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束，即成品胶束于冷冻干燥机中干 燥48h，即得胸腺肽的磷脂/胆盐胶束冻干粉。

实施例8：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的肠溶胶囊的制备

取过80目筛的胸腺肽的磷脂/胆盐胶束冻干粉20g，加入淀粉95g，微晶纤维素84g 和泊洛沙姆0.1g，置混匀机混合30min后，测量中间体含量，灌装于肠溶胶囊壳中，铝 塑压模，包装。每粒含胸腺肽的磷脂/胆盐胶束冻干粉20mg。

实施例9：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的肠溶片的制备

取过80目筛的胸腺肽的磷脂/胆盐胶束冻干粉20g，加入淀粉95g，微晶纤维素80g 和硬脂酸镁5g，置混匀机混合30min后，测量中间体含量，压片，包肠溶衣，铝塑压模， 包装。每粒含胸腺肽的磷脂/胆盐胶束冻干粉20mg。

实施例10：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束注射液：

取过80目筛的胸腺肽的磷脂/胆盐胶束冻干粉2g及8.5g氯化钠，加至500ml的新 鲜注射用水中，搅拌使溶解。加注射用水至900ml，搅匀，加热至80℃左右，加入针用 活性炭，搅拌，保温吸附30min。脱碳，补水至1000ml，搅匀，含量测定，并用适量氢 氧化钠调pH值在6.0～8.0之间，经0.22um微孔滤膜过滤至澄明，灌装，封口，115℃ 灭菌30min，即得。每支10ml，含胸腺肽的磷脂/胆盐胶束冻干粉20mg。

实施例11：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束冻干粉针

取胸腺肽的磷脂/胆盐胶束溶液10ml，加入甘露醇10g搅拌溶解，调节pH值至7.0， 加入针用碳0.3g，加热至80℃并保温30min，冷至45℃时脱碳，加注射用水至全量，测 定中间体含量，精滤，灌装于西林瓶中，每瓶3ml，塞孔，放入冻干机中按冻干曲线冷冻 干燥，即得。

以下通过胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束及对照药的小肠吸收及药效学实验的比较，来 进一步说明本发明胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束的有益效果和实用性。

试验例一、比较胸腺肽的磷脂/胆盐胶束及胸腺肽肠溶胶囊在小肠的吸收情况

1、材料和方法：

药物：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束冻干粉是由本发明实施例制备所得、胸腺肽肠溶 胶囊(上海宝龙药业)。

配制方法：精密称取胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束冻干粉及胸腺肽肠溶胶囊内容物， 用Krebs Ringer’s小肠营养液配制成每100ml含胸腺肽15mg的溶液。

动物：Wistar大鼠，购自解放军第三○二医院实验动物中心，也可从市场购买。雄 性大鼠200g±5g，每组大鼠6只，试验前动物禁食20h。

试验步骤：

(1)大鼠肠吸收试验：

a、取三颈烧瓶，加入含药Krebs Ringer’s小肠营养液100ml，作为供药体系。

b、取试验大鼠，腹腔注射10％的乌拉坦麻醉。沿腹中线打开腹腔，胃幽门以下10cm 处开始向下剪取10cm空肠段。

c、将剪下的肠段放入盛有0℃Krebs Ringer’s试液的培养皿中冲洗，去除肠系膜 和血管，一端用细线扎紧，用细玻璃棒轻柔地将肠管翻转使粘膜面朝外，另一端绑扎与 塑料套管的一端，从塑料套管向肠囊内注入空白Krebs Ringer’s液2ml。然后将其放入 三颈烧瓶中，受药体系液面高于供药体系液面，在烧瓶中通入气体(95％氧气及5％二氧化 碳)，整个装置放入37℃恒温水浴中进行实验，分别于15min、20min、45min、60min、 90min、120min取出受药体系溶液200ul，同时补充相同体积空白K-R试液；作为供试 品待测。

(2)测定方法：采用紫外分光光度法进行测定。

试剂：碱性铜溶液(配制方法：取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解， 作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解， 将两者混合，作为乙液。临用前，合并两液，并加水至500ml)；福林酚储备液；牛血清 白蛋白对照品；

操作方法：

a、对照品溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml含0.3mg的溶液。

b、标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml， 分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加碱性铜试液1ml，摇匀，各加福林酚试液 4.0ml(取福林酚储备液1ml加水至8ml)，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5min，再 置冷水浴中10min，在650nm的波长处测定吸收度，同时以0号管作为空白。以吸收度与 相应的对照品溶液浓度作线性回归。

回归方程为：Y＝12.074X+0.0426  R²＝0.999

c、测定法将供试品溶液200ul，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入碱性 铜试液”起，依法测定，由回归方程计算供试品浓度及累积透过量，结果见表1所示。 并以时间为变量(X)，累积透过量为应变量(Y)作图，比较两种药物在空肠段的吸收状况， 见图1所示。

表1两种药物在大鼠小肠累积吸收结果

表1结果表明：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束可以提高胸腺肽在大鼠小肠的吸收，与 对照药的累积透过量具有显著性差异。

试验例二、胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束及对照药的药效学研究

1、材料和方法

药物：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束冻干粉是由本发明实施例制备所得、胸腺肽肠溶 胶囊(上海宝龙药业)。

配制方法：胸腺肽的磷脂/胆盐复合胶束冻干粉及对照药内容物蒸馏水配制成每ml 含胸腺肽1.95mg的溶液。

动物：昆明种小鼠，购于解放军第三○二医院动物试验中心，也可从市场购买；雌 雄各半20g±0.5g。

2、试验主要步骤：

取健康小鼠32只随即分为四组，及正常对照组、CCl₄模型组、对照药组、胸腺肽的 磷脂/胆盐复合胶束组，每组8只。每日ig给药2次，每次0.3ml/10g，对照组及模型组 给予相同容积的蒸馏水，连续给药7天后，除正常对照组外，小鼠ip0.1％CCl₄0.2ml/10g， 造模后24小时，摘除小鼠眼球采血，测血清ALT、AST值，结果见表2。

表2三种药物对CCl₄致小鼠急性肝损伤的影响

表2结果表明，各给药组小鼠血清ALT、AST值均低于模型对照组，胸腺肽的磷脂/ 胆盐复合胶束组与对照药组相比具有显著性差异。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限制， 凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技 术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时， 凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍 属于本发明的技术方案的范围内。