减少或消除爬行动物和/或它们蛋中的沙门氏菌的方法

摘要

本发明涉及通过使用至少一种N，N－二卤代－5，5－二烷基乙内酰脲来减少或消除爬行动物和/或爬行动物蛋中的沙门氏菌的方法，其中每个所述烷基独立地选自含有1－约6个碳原子的烷基。

说明书

发明领域

本发明涉及用于减少或消除爬行动物和/或它们蛋中的沙门氏菌的方法。 更具体地，本发明涉及利用N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲减少或消除爬行动 物和/或爬行动物蛋中的沙门氏菌的方法，其中每个所述烷基独立地选自含有 1～约6个碳原子的烷基。

发明背景

公认的是，爬行动物通常是沙门氏菌的无症状携带者，沙门氏菌通常出现 在肠，例如小肠、结肠、盲肠和/或爬行动物的排泄物中。沙门氏菌从爬行动 物携带者的传播对动物和人的健康构成显著危害，因此，1974年美国食品和 药物管理局(“FDA”)禁止新孵化的海龟的国内销售。

然而，FDA的禁令并不妨碍这些海龟作为宠物在国外市场例如欧亚市场出 口。实际上，这些出口在路易斯安那州已经产生了繁荣产业。目前，路易斯安 那海龟畜牧产业由56个获得许可证的商用海龟饲养场组成，要求饲养场注册 并且获得路易斯安那州农业部的许可证。路易斯安那州的海龟畜牧产业占据了 大于90％的美国宠物市场销售出口的孵化海龟。

与繁荣的出口业一样，海龟的国内销售也是所希望的。努力开放国内市场， 海龟中的沙门氏菌问题过去在研究，现在仍然在深入研究，这导致发现海龟蛋 是沙门氏菌传播到小海龟的主要途径。因此，在过去大约20年里，已经使用 了抗生素硫酸庆大霉素，以尝试通过在真空下同时在硫酸庆大霉素浴液中处理 消毒的海龟蛋来根除海龟蛋中的沙门氏菌。然而，法令和规章例如在路易斯安 那州的那些要求在动物进入销售之前处理海龟蛋，并通过FDA认可实验室的无 沙门氏菌孵化证明，并且硫酸庆大霉素消毒处理并不能提供这些保证。

因此，已经提出许多其它处理以消除或减少海龟中的沙门氏菌的生长。一 些提出的处理包括使用抗生素，抗生素本身也会引起问题。例如，如果细菌对 用于处理海龟蛋的抗生素具有耐药性，那么触摸海龟的孩子就可能具有危险 等。其它建议对爬行动物喂益生菌以尝试消除或减少它们中的沙门氏菌的生 长。例如，参见美国专利5,879,719。

然而、这些处理都不能有效推翻国内销售海龟的禁令，海龟畜牧产业仍然 设法寻求推翻这种禁令，并且恢复潜在的可获利的本国宠物市场。FDA已经表 明该产业必须提交显示非抗生素、杀微生物剂可以用于代替硫酸庆大霉素的数 据，才可以这样做，作为主要目标，因为能够在产品中出现抗庆大霉素的细菌。 此外，FDA补充了他们感到必须在禁令被推翻前表明的另外关注：1)提供确 保海龟在本地环境中不被“再感染”；2)提供证据证明细菌不会对用来处理蛋 的杀微生物剂具有耐药性。

因此，需要一种减少或消除爬行动物和/或爬行动物蛋中的沙门氏菌的非 抗生素方法。

发明内容

本发明涉及减少或消除爬行动物蛋中的沙门氏菌的方法，该方法包括将一 个或多个爬行动物蛋与含有至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲的杀微 生物剂水溶液进行接触，其中每个烷基独立的选自含有1-约6个碳原子的烷 基。

本发明还涉及减少或消除爬行动物中的沙门氏菌的方法，该方法包括将一 个或多个爬行动物与含有至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲的杀微生 物剂水溶液进行接触，其中每个所述烷基独立地选自含有1-约6个碳原子的烷 基。

本发明还涉及减少或消除爬行动物中的沙门氏菌的方法，该方法包括对一 个或多个爬行动物给药(administering)：i).至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基 乙内酰脲，其中每个所述烷基独立地选自含有1-约6碳原子的烷基；或(ii). 含有至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲的杀微生物剂水溶液，其中每个 所述烷基独立地选自含有1-约6碳原子的烷基；或者(iii).(i)和(ii)两者。

本发明还涉及减少或消除爬行动物中的沙门氏菌的方法，该方法包括将一 个或多个爬行动物与a)和b)接触一次或多次，其中a)是次氯酸钠溶液；b) 是：i)至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲，其中每个所述烷基独立地 选自含有1～约6个碳原子的烷基，或(ii)含有至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷 基乙内酰脲的杀微生物剂水溶液，其中每个所述烷基独立地选自含有1～约6 个碳原子的烷基，或(iii).(i)和(ii)两者，并且a)和b)可以以任意顺序 进行。

本发明还涉及减少或消除爬行动物蛋中的沙门氏菌的方法，该方法包括将 一个或多个爬行动物蛋与a)和b)接触一次或多次，其中a)是次氯酸钠溶液； b)是i)至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲，其中每个所述烷基独立地 选自含有1-约6个碳原子的烷基，或(ii)含有至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷 基乙内酰脲的杀微生物剂水溶液，其中每个所述烷基独立地选自含有1-约6 个碳原子的烷基，或(iii).(i)和(ii)两者，并且a)和b)可以以任意顺序 进行。

发明详细描述

在加工鸡肉中使用N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲控制沙门氏菌是众所 周知的。例如参见美国专利6,908,636和6,919,364；美国专利申请10/313,243、 10/313,245、11/103,703、11/180,054、10/603,132和10/603,130；和PCT申请 US04/14762、US04/43732和US04/43381。然而，至今，并没有提出使用N，N- 二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲控制爬行动物和/或它们蛋中的沙门氏菌。本发明 人已经出乎意料地发现使用N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲和/或含有N，N-二 卤代-5，5-二烷基乙内酰脲的水溶液可以控制或基本上消除爬行动物和/或爬行 动物蛋中的沙门氏菌。

适于本发明处理的爬行动物的非限制性实例包括海龟、鳄鱼、蜥蜴、蛇和 大蜥蜴。适于本发明处理的爬行动物蛋的非限制性实例包括海龟蛋、鳄鱼蛋、 蜥蜴蛋、蛇蛋和大蜥蜴的蛋。通过本发明的方法处理过的爬行动物可以是海龟， 因此通过发明方法处理的爬行动物蛋是海龟蛋。

在实施本发明中，一个或多个爬行动物和/或一个或多个爬行动物蛋与含 有至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲的水溶液进行接触，因此，所使用 的N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲可以是水溶性的。适于使用的N，N-二卤代 -5，5-二烷基乙内酰脲是其中每个所述烷基独立地含有1-约6个碳原子的那些。 N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲可以是其中两个所述卤素原子选自溴的那些， 或者N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲可以是其中一个卤素原子是氯而另一个 卤素原子是溴或氯的那些。该类型的合适化合物包括：例如，所述化合物如1，3- 二溴-5，5-二甲基乙内酰脲、1，3-二氯-5，5-二甲基乙内酰脲、1，3-二氯-二乙基乙内 酰脲、1，3-二氯-5，5-二正丁基乙内酰脲、1，3-二氯-5-乙基5-甲基乙内酰脲、N，N′- 溴氯-5，5-二甲基乙内酰脲、N，N′-溴氯-5-乙基-5-甲基乙内酰脲、N，N′-溴氯-5- 丙基-5-甲基乙内酰脲、N，N′-溴氯-5-异丙基-5-甲基乙内酰脲、N，N′-溴氯-5-丁基 -5-甲基乙内酰脲、N，N′-溴氯-5-异丁基-5-甲基乙内酰脲、N，N-溴氯-5-仲丁基-5- 甲基乙内酰脲、N，N′-溴氯-5-叔丁基5-甲基乙内酰脲、N，N′-溴氯-5，5-二乙基乙 内酰脲以及上述任何两种或多种的混合物。N，N′-溴氯-5，5-二甲基乙内酰脲可 从科聚亚公司(Chemtura Corporation)在商标BROMICIDE杀微生物剂下销售 获得。另一适合的溴氯乙内酰脲混合物由主要量的N，N′-溴氯-5，5-二甲基乙内 酰脲和少量的1，3-二氯-5-乙基-5-甲基乙内酰脲构成。后者类型的混合物可由龙 沙公司(Lonza Corporation)在商标DANTOBROM杀微生物剂下市售获得。

应值得注意的是，当上述两种或多种N，N′-溴氯-5，5-二烷基乙内酰脲的混 合物用于实施本发明时，该混合物的N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲可以相互 之间以任何比例。还应当理解的是，在名称例如N，N′-溴氯-5，5-二甲基乙内酰 脲中的命名N，N是指这种化合物可以是(1)1-溴-3-氯-5，5-二甲基乙内酰脲、或 (2)1-氯-3-溴-5，5-二甲基乙内酰脲或者(3)1-溴-3-氯-5，5-二甲基乙内酰脲和1- 氯-3-溴-5，5-二甲基乙内酰脲的混合物。此外，可以想到的是，一些1，3-二氯-5，5- 二甲基乙内酰脲和1，3-二溴-5，5-二甲基乙内酰脲可以与(1)、(2)或(3)形成 混合物。

如果用于实施本发明的至少一种(有时仅一种)N，N-二卤代-5，5-二烷基乙 内酰脲是二溴N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲，N，N-二溴-5，5-二烷基乙内酰脲 是其中一个烷基是甲基而另一个烷基含有1-约6或1-4个碳原子的1，3-二溴-5，5- 二烷基乙内酰脲。因此，N，N-二溴-5，5-二烷基乙内酰脲可以包括1，3-二溴-5，5- 二甲基乙内酰脲、1，3-二溴-5-乙基-5-甲基乙内酰脲、1，3-二溴-5-正丙基-5-甲基 乙内酰脲、1，3-二溴-5-异丙基-5-甲基乙内酰脲、1，3-二溴-5-正丁基-5-甲基乙内 酰脲、1，3-二溴-5-异丁基-5-甲基乙内酰脲、1，3-二溴-5-仲丁基-5-甲基乙内酰脲、 1，3-二溴-5-叔丁基-5-甲基乙内酰脲以及上述任意两种或多种的混合物。在这些 混合物中，N，N-二溴-5，5-二烷基乙内酰脲、1，3-二溴-5-异丁基-5-甲基乙内酰脲、 1，3-二溴-5-乙基-5-甲基乙内酰脲和1，3-二溴5-正丙基-5-甲基乙内酰脲是最经济 合算的。根据本发明可以使用的上述N，N-二溴5，5-二烷基乙内酰脲中，1，3-二 溴-5，5-二甲基乙内酰脲可以被用作所述组分之一，例如1，3-二溴-5，5-二甲基乙 内酰脲和1，3-二溴-5-乙基-5-甲基乙内酰脲的混合物中的一种组分。在本发明 中，至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲可以是至少1，3-二溴-5，5-二甲基 乙内酰脲和至少一种其它的N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲例如1，3-二溴-5-乙 基-5-甲基乙内酰脲的混合物。

本文所使用的至少一种(有时仅一种)N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲可 以是水溶的1，3-二溴-5，5-二烷基乙内酰脲，其中一个烷基是甲基，另一个烷基 含有1-约6，或者1-4个碳原子，例如1，3-二溴-5，5-二甲基乙内酰脲。该化合物 可以在市场中于商标ALBROM IOOT杀微生物剂和ALBROM IOOPC杀微生物 剂(两者都可以从雅宝公司购得)以片剂或颗粒形式获得。

应值得注意的是，当在实施本发明中使用上述两种或多种1，3-二溴-5，5-二 烷基乙内酰脲的混合物时，该混合物的每种N，N-二溴-5，5-二烷基乙内酰脲相互 之间可以为任意比例。

在实施本发明中，在水介质中溶解上述至少一种(有时仅一种)N，N-二卤 代-5，5-二烷基乙内酰脲以形成杀微生物剂水溶液。所述水介质可以是水，或者 是合适的安全无害的水溶性有机溶剂，例如含水或不含水的乙腈。如果使用水 溶性有机溶剂，则可以在与杀微生物剂水溶液接触后，用清水清洗爬行动物和 /或爬行动物蛋以除去这种溶剂的残留物。

通过以任何顺序和利用任何已知的方法将杀微生物剂水溶液的组分进行 组合、混合来形成用于实施本发明的杀微生物剂水溶液，它们混合的顺序对于 本发明并不重要，可以使用任何能够将所述至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙 内酰脲基本上完全溶解在水介质中的方法。例如，在多数情况下，通过将所述 至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲自身(即未稀释形式)添加到水中， 可以形成根据本发明所使用的杀微生物剂水溶液。能够形成含有所述至少一种 N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲和水的浓缩溶液，然后，当需要杀微生物剂水 溶液时，向浓缩的溶液中添加额外的水，以形成杀微生物剂水溶液。如果在制 备杀菌水溶液中使用水溶性有机溶剂，则所述至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基 乙内酰脲可以直接溶解到有机溶剂中。如果组合使用有机溶剂和水，则所述至 少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲可以溶解于水中，然后引入有机溶剂， 所述至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲首先溶解于有机溶剂中，然后引 入水，所述至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲溶解于预先形成的有机溶 剂混合物中等。

杀微生物剂水溶液中至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲的浓度变 化取决于各种因素，例如，所使用的具体N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲、在 前杀菌处理的性质和次数、所出现的沙门氏菌的类型和性质、沙门氏菌可获得 的营养物的量和种类、净化处理的性质和程度(如果有的话，结合杀菌处理)、 要处理的沙门氏菌的表面或位置等。在任何情况下，有效杀菌量的杀微生物剂 水溶液将会应用到爬行动物和/或爬行动物蛋上，或者与其接触。

典型地，杀微生物剂水溶液含有有效杀菌量的至少一种(有时仅为一种) N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲，这是指杀微生物剂水溶液通常具有约2-约 1000ppm(重量/重量)或约2-约500ppm(重量/重量)或约25-约250ppm(重 量/重量)的活性卤素浓度，通过使用美国专利6,908,636中所描述的常规DPD 测试方法来测定活性卤素。如果溶液中的实际活性卤素由活性氯组成，则所使 用的稀释溶液的浓度可以比上述范围的最小值高至少2-3倍。在根据本发明所 使用的1，3-二溴-5，5-二烷基乙内酰脲的情况下，用于通常情况下的特别有效的 范围为约50-约150ppm(重量/重量)的活性溴。当爬行动物和/或爬行动物蛋 与由至少一种1，3-二溴-5，5-二烷基乙内酰脲形成的水溶液接触时，使用含有杀 菌有效量活性溴的溶液对爬行动物蛋的“壳”或爬行动物的皮或壳不具有显著 或仅具有略微漂白作用。所述量典型地为约0.5-约30ppm(重量/重量)或约 5-约25ppm(重量/重量)由DPD测试方法测定的活性溴。应当理解的是，当 认为这是必要或希望时，可以偏离上述的范围，这种偏离是在本发明的实质和 范围之内。因此，取决于杀微生物剂水溶液的具体应用，杀微生物剂水溶液中 的N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲的浓度可以从约2ppm N，N-二卤代-5，5-二 烷基乙内酰脲到最高至所使用的具体N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲在这种 杀微生物剂水溶液所使用的温度下的最大水溶解度。

应值得注意的是，尽管根据DPD方法测量上述卤素浓度，但是有两种不 同类型的方法用来测定活性卤素的含量，无论是活性氯、活性溴或是两者。对 于测量浓度高于约500ppm(重量/重量)活性溴或高于约1100ppm活性氯， 可使用淀粉-碘滴定法，在美国专利6,908,636中描述了该方法。另一方面，浓 度低于这些附近水平的，常规DPD测试方法更为适合，因为所述测试被设计 为测量极低活性卤素的浓度，例如，0至约11-12ppm(重量/重量)活性氯浓 度，或者0-约5ppm(重量/重量)活性溴浓度。实际上，如果活性氯的实际 浓度在约11-12ppm和约1100ppm(重量/重量)之间，或者如果活性溴的实 际浓度在约5ppm和约100ppm(重量/重量)之间，则通常用纯水稀释测试样 品，以在进行DPD分析之前降低所述实际浓度到约4至约11-12ppm的活性氯 和约2-约5ppm的活性溴。因此可以看出，尽管在使用过程间没有严格的必须 遵守的浓度分界线，但是上面给出的近似值表示实际的近似分界线，因为当使 用DPD测试方法时更高浓度溶液的水稀释液的量随最初活性卤素浓度的增加 而增加，当分析更高浓度的溶液时，可以通过使用淀粉-碘滴定法容易地避免 这种大量稀释。总之，对于适度稀释的溶液，推荐使用DPD测试方法；而对 于更高浓度的溶液，则推荐使用淀粉-碘滴定法。

通过本领域中任何已知的方法可以将爬行动物和/或爬行动物蛋与杀微生 物剂水溶液进行接触。合适方法的非限制性实例包括：用已经应用有杀微生物 剂水溶液的毛巾擦拭爬行动物和/或爬行动物蛋；将爬行动物和/或爬行动物蛋 浸渍在杀微生物剂水溶液中；用杀微生物剂水溶液喷涂爬行动物和/或爬行动 物蛋等。爬行动物蛋可以浸入杀微生物剂水溶液中。

在爬行动物和/或爬行动物蛋与杀微生物剂水溶液接触之前，可以首先将 爬行动物和/或爬行动物蛋与次氯酸钠溶液接触一次或多次。本领域普通技术 人员容易地选择次氯酸钠溶液的浓度，因为诸如这样浓度的次氯酸钠溶液通常 用于处理爬行动物蛋中的沙门氏菌。

本发明涉及对爬行动物给药(administering)：(i).至少一种N，N-二卤代 -5，5-二烷基乙内酰脲，其中每个所述烷基独立地选自含有1-约6或者1-4个碳 原子的烷基；或者(ii)含有至少一种N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲的杀微 生物剂水溶液，其中每个所述烷基独立地选自含有1-约6或者1-4个碳原子的 烷基；或者(iii).(i)和(ii)两者的方法。与未处理的爬行动物相比，对爬 行动物给药(i)、(ii)或(iii)基本上控制、抑制或消除沙门氏菌在被处理的 爬行动物中的群集或感染。可以对爬行动物给药杀微生物剂水溶液。

例如根据爬行动物的种类、爬行动物的重量和/或寿命等，对有效控制、 抑制、减少和/或消除沙门氏菌的典型杀微生物剂水溶液量可以变化。然而， 例如，可对爬行动物每日给药约1/10到约一茶匙量的杀微生物剂水溶液。

通过强制喂食或者任何其它能够引入到爬行动物的消化系统、胃和/或肠 道的方式，对爬行动物给药一剂或多剂的杀微生物剂水溶液。N，N-二卤代-5，5- 二烷基乙内酰脲可以与爬行动物的普通食物或水混合，或者与应用于爬行动物 食物中的杀微生物剂水溶液混合。根据对爬行动物给药的杀微生物剂水溶液和 食物的总重量，对给定爬行动物所给药的剂量可以从约10重量％-约50重量％ 变化。

本发明的方法具有几个优点。例如，1，3-二溴-5，5-二甲基乙内酰脲 (DBDMH)是干燥的化合物，当添加水时，该化合物被自发活化。其中的两 个溴都被释放出来，以形成次溴酸和二甲基乙内酰脲(惰性)。在较高的pH 值(例如为7.5及更高)下，溴是比氯更好的杀微生物剂。杀微生物剂的剂量 为0.5-2.0ppm的游离溴。溴具有比氯更低的挥发性，因此，蒸发损失更少。 基于溴的杀微生物剂在含有氨水的污染物(像蛋白质)中是更为有效的。

实施例

实验背景

进行以下实验以证实本发明的优点。目标是通过用次氯酸盐漂白剂和根据 本发明使用具体的N，N-二卤代-5，5-二烷基乙内酰脲，即1，3-二溴-5，5-二甲基乙 内酰脲(DBDMH)所以清洗的蛋来比较杀死沙门氏菌的效力。进行试验以测 定DBDMH处理的浓度和时间：(A)有效杀死海龟蛋上的沙门氏菌；以及(B) 当与传统使用次氯酸盐漂白剂体系相比，具有可接受的海龟蛋孵化率。

目前，海龟饲养人员的通常做法是用次氯酸钠(Clorox)、氯[次氯酸盐] 消毒剂清洗海龟蛋。然而，在海龟农业中通常可接受的是，使用次氯酸盐会对 海龟蛋的孵化率有负面影响。而使用本发明的方法不会出现对蛋孵化率的负面 影响。

沙门氏菌检测过程

将10ml的均浆(homogenate)与另外40ml新制的乳糖在37℃下培养24 小时。通过将1ml放入增菌管(enrichment tube)中来制备预增菌烧瓶 (pre-enrichment flask)：2管7ml的连四硫酸盐[TT]肉汤(Tetrationate[TT] broth)和2管7ml的亚硒酸盐胱氨酸[SC]肉汤(Selenite Cysterine[SC]broth)。 将SC孵育24小时，将TT孵育48小时，然后，将菌环分别在沙门氏菌鉴别、 亚硫酸铋和XLT4的选择性琼脂培养基上进行划线。此外，将这些增菌肉汤的 两个1ml的样品在埃彭道夫管(eppendorftube)进行粒化。将粒化的细胞裂解， 通过沙门氏菌InvA基因的PCR分析筛选DNA。

对比研究-不进行杀微生物处理

5个海龟饲养场提供海龟蛋以进行对比评价。由沙门氏菌分析的结果(以 每个对于的蛋匀浆样品的细菌总数表示)如下：

饲养场1：10⁷

饲养场2：10⁶

饲养场3：10⁶

饲养场4：10⁵

饲养场5：10⁷

使用类似过程以获得以下数据，其中使用多种杀微生物处理。其结果以每 个对比的蛋匀浆样品的细菌总数来表示。

对比研究-氯(次氯酸盐)杀菌处理

饲养场编号     细菌计数      孵化率

饲养场1：      10⁴           N/A(不适用)

饲养场2：      0             N/A

饲养场3：      10⁵           N/A

饲养场4：      10³           N/A

饲养场5：      nd^*           N/A

(^*nd＝没有测量)

对比研究-氯(次氯酸盐)杀微生物处理，之后20分钟水清洗

饲养场编号    细菌计数     孵化率

饲养场1：     10³            48％

饲养场2：     0            64％

饲养场3：     0            57％

饲养场4：     0            62％

饲养场5：     10⁵          82％

DBDMH活性研究A-溴(DBDMH)杀微生物处理(100ppm 10分钟)

饲养场编号    细菌计数     孵化率

饲养场1：     10³          69％

饲养场2：     0            71％

饲养场3：     0            57％

饲养场4：     0            35％

饲养场5：     10⁵          76％

DBDMH活性研究A-溴(DBDMH)杀微生物处理(100ppm 20分钟)

饲养场编号    细菌计数     孵化率

饲养场1：     0            92％

饲养场2：     10²          58％

饲养场3：     0            67％

饲养场4：     0            65％

饲养场5：     10⁴          0^*

(^*蛋由于被蝇类感染而没有孵化)

DBDMH活性研究A-溴(DBDMH)杀微生物处理(500ppm 10分钟)

饲养场编号    细菌计数     孵化率

饲养场1：     0            54％

饲养场2：     10³          58％

饲养场3：     0            89％

饲养场4：     0            54％

饲养场5：     10⁴          65％

DBDMH活性研究A-溴(DBDMH)杀微生物处理(500ppm 20分钟)

饲养场编号    细菌计数     孵化率

饲养场1：     10²          87％

饲养场2：      0         56％

饲养场3：      0         63％

饲养场4：      0         63％

饲养场5：      10⁵       84％

上述描述是关于本发明的几个实施方案。本领域技术人员将认识到可以设 计其它同样有效的方式来实现本发明的实质。还应当注意的是，本发明预料到 在此讨论的所有范围包括从任何较低量到任何较高量的范围。