一种从贯叶连翘中制备总黄酮的工艺

摘要

本发明涉及一种总黄酮的制备工艺。本发明采用弱极性或中极性的大孔吸附树脂从贯叶连翘中提取富集总黄酮，操作简单，易于工业化生产，可以方便地得到总黄酮含量不低于85％的浅棕色提取物。可从贯叶连翘直接提取，或者由贯叶连翘提取物进一步精制而成。

说明书

                          技术领域

一种从贯叶连翘中制备总黄酮的工艺，特别涉及到以大孔吸附树脂从贯叶连翘中提取富集总黄酮的制备工艺。

                          背景技术

贯叶连翘(Hypericum perforatum l)又称贯叶金丝桃、圣约翰草，属于藤黄科金丝桃属植物，是一种五瓣黄花多年生草本植物，多生长于土壤干燥和阳光充足之处，地上部分或全草入药，其性平味涩，有清热解毒、收敛止血、利湿之功效，主要产于欧洲、美国及部分亚洲国家。

长期以来，对贯叶连翘的研究主要集中于其抗轻度至中度抑郁症的药理药效上。在欧洲，尤其是德国，主要用于治疗轻度及中度抑郁症。其主要成分有苯并二蒽酮类、黄酮类、挥发油类和间苯三酚类。近年来，关于贯叶连翘抗抑郁作用的机理一直存在着争议，其成分金丝桃素、伪金丝桃素、贯叶金丝桃素、加贯叶金丝桃素、槲皮苷、astilbin、芦丁等均认为具有抗抑郁作用，但其治疗抑郁症的效果也受到了人们的质疑。贯叶连翘富含黄酮类化合物，其含量高达11.7％，主要为金丝桃苷、槲皮素、槲皮苷及芦丁。大量的文献表明，黄酮类成分都具有独特的降低胆固醇、甘三酯及抗动脉粥样硬化的作用，在心血管方面具有独特的疗效。但迄今为止，贯叶连翘的应用还局限于其甲醇提取物制剂用于治疗抑郁症，以含量极低的金丝桃素作为质量标准，其富含的黄酮类成分却未被开发利用。

树脂吸附法对于天然产物的提取分离是一种非常有效的方法。该法生产简单、安全，易于实现工业化生产。本发明的目的是提供一种用大孔吸附树脂富集贯叶连翘中总黄酮的方法，为贯叶连翘的进一步开发利用，特别是在心血管疾病如动脉粥样硬化方面的利用提供基础。

                          发明内容

本发明的目的在于提供一种贯叶连翘中总黄酮的富集方法，且其总黄酮含量不低于85％。

技术方案：

一种从贯叶连翘中制备总黄酮的方法，所述的方法包括以下步骤：

(1)贯叶连翘全草粉碎后，将贯叶连翘与40～80％甲醇溶液的按总重量比为1∶6～12置于提取器中，在70℃回流提取3次，过滤，合并提取液，减压浓缩至干，得贯叶连翘浸提物；

(2)将由步骤(1)制得的贯叶连翘浸提物加水，超声使其悬浮，离心过滤，得澄清溶液，使得贯叶连翘澄清溶液中黄酮浓度为2～4mg/mL；

(3)将由步骤(2)制得的贯叶连翘澄清溶液，以1.25～5BV/h的流速缓慢流过装有预处理好的弱极性或中极性大孔吸附树脂的树脂柱；

(4)用5～10BV的清水洗去树脂中残留的溶液及其他杂质，然后用30～90％洗脱液以2.25～10BV/h的流速进行洗脱，收集部分洗脱液，减压浓缩至干，得到浅棕色提取物，即贯叶连翘总黄酮；

其中：所述的树脂柱内径为1～50cm，树脂层径高比为1∶3～30；

所述的洗脱液为醇液或酮液，醇液为甲醇或乙醇溶液，酮液为丙酮溶液；

所述的树脂为聚苯乙烯型或交联丙烯腈类弱极性或中极性树脂，粒度为0.3～1.25mm。

所述的贯叶连翘浸提物为自提或市售，深棕色，其黄酮含量为30％左右。

所述的洗脱液浓度优选为50～70％。

所述的收集部分洗脱液为0.25～3BV间的洗脱液。

所述的树脂重复利用4次后要进行再生。再生的过程为依次用2％盐酸溶液浸泡，用水洗至中性；再用2％氢氧化钠溶液浸泡，用水洗至中性。

本发明所得提取物总黄酮含量的测定采用NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH络合比色法进行测定，其中总黄酮含量不低于85％。

                       具体实施方式

下面通过以下实施例对本发明做进一步的说明，但所举之例并不限制本发明的内容。

称取1kg贯叶连翘全草，粉碎成粗粉后，加入70％甲醇溶液，热回流提取3次，甲醇的总重量为10kg，合并提取液，减压浓缩至干，得贯叶连翘浸提物223g。

实施例1

称取30g贯叶连翘浸提物，加入1000mL水，超声处理30分钟，使贯叶连翘浸提物悬浮于水中。离心过滤，滤液经络合比色法测定，其黄酮含量为9.1mg/mL，滤液待用。取140mL滤液，用水稀释至400mL，即可上柱分离。

取一定量预处理好的弱极性AB-8树脂，装入内径为1cm的玻璃柱中，使其床体积为20mL，以2BV/h的流速使400mL贯叶连翘溶液缓慢流过树脂床。然后用120mL水洗去柱中残留的溶液，再用浓度为50％的乙醇溶液以4BV/h的流速流过树脂柱，收集0.25～3BV间的洗脱液，减压浓缩至干，即得浅棕色粉末状提取物，其总黄酮含量为86.6％。

实施例2

称取42g贯叶连翘浸提物，加入1400mL水，超声处理30分钟，使贯叶连翘浸提物悬浮于水中。离心过滤，滤液经络合比色法测定，其黄酮含量为8.55mg/mL，用水稀释至3900mL，待用。

取一定量预处理好的中极性DM-301树脂，装入内径为2.6cm的玻璃柱中，使其床体积为180mL，以2.5BV/h的流速使3600mL贯叶连翘溶液缓慢流过树脂床。然后用1200mL水洗去柱中残留的溶液，再用浓度为60％的乙醇溶液以5BV/h的流速流过树脂柱，收集0.25-3BV间的洗脱液，减压浓缩至干，即得浅棕色粉末状提取物，其总黄酮含量为85.4％。