一种地特胰岛素注射液的制备方法及其制备的地特胰岛素注射液

摘要

本发明提供一种地特胰岛素注射液的制备方法及其制备得到的地特胰岛素注射液。所述制备方法主要操作包括：用部分注射用水溶解甘油得到甘油溶液，分为三份，分别加入地特胰岛素、间甲酚和苯酚；先将这三种溶液混合均匀，得到混合溶液I，用氢氧化钠溶液调pH＝9.0～9.5；醋酸锌、氯化钠、磷酸氢二钠分别用部分注射用水溶解，然后顺序加入混合溶液I中，再用盐酸溶液调pH＝7.3～7.5；最后用注射用水定容至终体积。本发明所述制备方法能够使地特胰岛素及其它辅料迅速溶解，显著缩短制备周期时间，降低制备过程中产生的工艺杂质，提高地特胰岛素注射液的质量，同时减少工艺能耗，提高生产速度，更适应规模化生产需求。

说明书

技术领域

本发明属于药物制剂学领域，具体涉及一种地特胰岛素注射液的制备 方法及其制备的地特胰岛素注射液。

背景技术

地特胰岛素是长效的人胰岛素类似物，用于成人和儿童I型糖尿病以及 成人II型糖尿病。地特胰岛素经皮下注射后能形成稳定的双六聚体，作用稳 定而持久，并且还可以与血浆白蛋白可逆性结合，具有相对平缓的时间作用 曲线，在有效控制空腹血糖的同时，引起血糖波动及低血糖不良反应较少。 地特胰岛素因其长效特性，患者仅需要每天1-2次在固定的时间皮下注射给 药。I型糖尿病患者和口服降糖药失效的II型糖尿病患者需要终身使用胰岛 素类产品控制血糖，因此在有效的前提下，保证药品的安全显得尤为重要。

现有的地特胰岛素注射液均以中性、均一、澄明的溶液形式注射使用， 为保证其安全、有效、质量可控，地特胰岛素注射液中除有效成分地特胰岛 素外还含有其他辅料。例如，公告号CN1120019C的中国专利公开了通过加 入甘油和/或甘露醇及氯化钠提高地特胰岛素注射液稳定性的方法，以减少在 贮藏过程相关物质和高分子蛋白等杂质的生成。公考号CN101389650B的中 国发明专利公开了具有高锌原子含量的、稳定性提高的地特胰岛素注射液。 上述现有技术都从调整辅料方面入手来解决制剂稳定性的问题，并未考虑通 过优化制备方法减少工艺杂质的产生，从而达到提高地特胰岛素注射液质 量的目的。

公开号CN101389650B的中国专利中描述的地特胰岛素的制备方法为： 将地特胰岛素溶于水后依次加入4％的甘油溶液、醋酸锌溶液、苯酚溶液、 间甲酚溶液、氯化钠溶液和磷酸钠溶液，调节pH至7.5，定容至终体积后过 滤除菌。由于地特胰岛素在制备条件下因物理机械应力发生凝聚的趋势增 加，而注射剂制备过程中不可避免地要使用搅拌等物理手段，从而给制剂 带来不希望的杂质。

药品制备方法的改进是提升其质量的有效手段。因此，有必要开发出 一种新的地特胰岛素注射液的制备方法，达到减少工艺杂质、提高地特胰 岛素注射液质量的目的。

发明内容

针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种地特胰岛素注射液的制 备方法。本发明通过优化地特胰岛素注射液的制备工艺，达到提高地特胰 岛素注射液质量、缩短配制周期、降低工艺能耗的目的。

为了实现上述技术效果，本发明采用如下的技术方案：

一种地特胰岛素注射液的制备方法，所述地特胰岛素注射液由地特胰 岛素、甘油、间甲酚、苯酚、醋酸锌、氯化钠、磷酸氢二钠、盐酸、氢氧 化钠和注射用水组成；包括如下步骤：

(1)甘油用部分注射用水溶解，配制成甘油溶液；

(2)所述甘油溶液分为三份，分别加入地特胰岛素、间甲酚和苯酚， 混合均匀，得到地特胰岛素-甘油溶液、间甲酚-甘油溶液和苯酚-甘油溶液；

(3)将所述地特胰岛素-甘油溶液、间甲酚-甘油溶液和苯酚-甘油溶 液混合，搅拌均匀，得到混合溶液I；

(4)搅拌下，向所述混合溶液I中加入氢氧化钠溶液至pH＝9.0～9.5 且溶液澄清；

(5)醋酸锌、氯化钠、磷酸氢二钠分别用部分注射用水溶解，配制 成醋酸锌溶液、氯化钠溶液和磷酸氢二钠溶液；

(6)向步骤4中得到的溶液中依次顺序加入步骤5中得到的醋酸锌 溶液、氯化钠溶液和磷酸氢二钠溶液，搅拌均匀；

(7)搅拌下，向步骤6中得到的溶液中加入盐酸溶液至pH＝7.3～7.5；

(8)用注射用水定容至终体积。

优选的，所述步骤1中，注射用水的用量占所述地特胰岛素注射液总体 积的60％～80％。

优选的，所述步骤2中，用于制备所述地特胰岛素-甘油溶液的甘油溶 液不少于所述甘油溶液总体积的30％；用于制备所述间甲酚-甘油溶液的甘 油溶液不少于所述甘油溶液总体积的50％；剩余的甘油溶液用于制备所述苯 酚-甘油溶液。

更优选的，所述步骤2中，用于制备所述地特胰岛素-甘油溶液的甘油 溶液占所述甘油溶液总体积的30％～40％。

更优选的，所述步骤2中，用于制备所述间甲酚-甘油溶液的甘油溶液 占所述甘油溶液总体积的50％～60％。

进一步优选的，所述步骤2中，所述甘油溶液按照体积比3～4:5～6:2～1 分为三份(三份甘油溶液的体积百分比之和为100％)，分别加入地特胰岛 素、间甲酚和苯酚，混合均匀，得到地特胰岛素-甘油溶液、间甲酚-甘油 溶液和苯酚-甘油溶液。

优选的，所述步骤4中，所述氢氧化钠溶液的浓度为0.1mol/L。

还优选的，所述步骤4中，调节pH＝9.1～9.2。

优选的，所述步骤5中，配制所述醋酸锌溶液、氯化钠溶液和磷酸氢 二钠溶液的注射用水的用量各自独立地占所述地特胰岛素注射液总体积的 0.3％～0.5％。

优选的，所述步骤7中，所述盐酸溶液的浓度为0.1mol/L。

还优选的，所述步骤7中，调节pH＝7.4。

作为一个优选的实施方式，本发明提供一种地特胰岛素注射液的制备 方法，所述地特胰岛素注射液由地特胰岛素、甘油、间甲酚、苯酚、醋酸 锌、氯化钠、磷酸氢二钠、盐酸、氢氧化钠和注射用水组成；具体的操作 步骤包括：

(1)甘油用占所述地特胰岛素注射液总体积60％～80％的注射用水溶 解，配制成甘油溶液；

(2)所述甘油溶液按照体积比3～4:5～6:2～1分为三份(三份甘油溶液 的体积百分比之和为100％)，分别加入地特胰岛素、间甲酚和苯酚，混合 均匀，得到地特胰岛素-甘油溶液、间甲酚-甘油溶液和苯酚-甘油溶液；

(3)所述地特胰岛素-甘油溶液、间甲酚-甘油溶液和苯酚-甘油溶液 混合，搅拌均匀，得到混合溶液I；

(4)搅拌下，向所述混合溶液I中加入0.1mol/L氢氧化钠溶液至 pH＝9.1～9.2且溶液澄清；

(5)醋酸锌、氯化钠、磷酸氢二钠各自独立地用占所述地特胰岛素注 射液总体积0.3％～0.5％的注射用水溶解，配制成醋酸锌溶液、氯化钠溶液 和磷酸氢二钠溶液；

(6)向步骤4中得到的溶液中依次顺序加入步骤5中得到的醋酸锌 溶液、氯化钠溶液和磷酸氢二钠溶液，搅拌均匀；

(7)搅拌下，向步骤6中得到的溶液中加入0.1mol/L盐酸溶液至 pH＝7.4；

(8)用注射用水定容至终体积。

本发明所述制备方法，还包括过滤除菌。

本发明的另一个目的，在于提供一种通过上述制备方法得到的地特胰 岛素注射液。

优选的，所述地特胰岛素注射液中，含有地特胰岛素40-500IU/mL、 甘油14.72-18.4mg/mL、间甲酚0.5-4.0mg/mL、苯酚0.5-4.0mg/mL、锌 52-111.8μg/mL、氯化钠0.29-3.5mg/mL、磷酸氢二钠0.85-0.9mg/mL。

更优选的，所述地特胰岛素注射液含有地特胰岛素100IU/mL、甘油16 mg/mL、间甲酚2.06mg/mL、苯酚1.8mg/mL、锌65.4μg/mL、氯化钠1.17 mg/mL、磷酸氢二钠0.89mg/mL。

还优选的，所述地特胰岛素注射液含有地特胰岛素100IU/mL、甘油 17mg/mL、间甲酚2.2mg/mL、苯酚1.5mg/mL、锌65.4μg/mL、氯化钠1.1 mg/mL、磷酸氢二钠0.89mg/mL。

本发明通过优化地特胰岛素注射液的制备工艺，使制备周期由现有技术 的120分钟缩短到40分钟左右，节省近三分之二的时间。由于制备时间的 缩短，使成品的工艺杂质大幅减少，从而提高了注射液的质量，保证患者用 药安全。

具体实施方式

以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些 实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。凡是不背离 本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施 例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。

制备方法1(本发明提供的制备方法)：(1)取1L烧杯，加入转子，置 于磁力搅拌器上，加入甘油和600mL注射用水，搅拌使甘油溶解配制成甘 油溶液；(2)地特胰岛素、间甲酚、苯酚分别用180mL、300mL、120mL 所述甘油溶液预溶，得到地特胰岛素-甘油溶液、间甲酚-甘油溶液和苯酚- 甘油溶液；(3)所述地特胰岛素-甘油溶液、间甲酚-甘油溶液和苯酚-甘油 溶液混合，搅拌均匀，得到混合溶液I；(4)搅拌下，向所述混合溶液I中 加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液至pH＝9.0～9.5，使地特胰岛素迅速溶解，溶液 澄清；(5)取3只25mL烧杯，分别加入醋酸锌、氯化钠和磷酸氢二钠，并 分别加入5mL注射用水溶解配制成醋酸锌溶液、氯化钠溶液和磷酸氢二钠 溶液；(6)向混合溶液I中依次顺序加入醋酸锌溶液、氯化钠溶液和磷酸氢 二钠溶液，搅拌均匀；(7)用注射用水定容至900mL，加入0.1mol/L的盐 酸溶液调节pH＝7.4；(8)用注射用水定容至1L，过滤除菌即得。

制备方法2(本发明提供的制备方法)：(1)取1L烧杯，加入转子，置 于磁力搅拌器上，加入甘油和800mL注射用水，搅拌使甘油溶解配制成甘 油溶液；(2)地特胰岛素、间甲酚、苯酚分别用320mL、400mL、80mL所 述甘油溶液预溶，得到地特胰岛素-甘油溶液、间甲酚-甘油溶液和苯酚-甘 油溶液；(3)所述地特胰岛素-甘油溶液、间甲酚-甘油溶液和苯酚-甘油溶 液混合，搅拌均匀，得到混合溶液I；(4)搅拌下，向所述混合溶液I中加 入0.1mol/L的氢氧化钠溶液至pH＝9.1～9.2，使地特胰岛素迅速溶解，溶液澄 清；(5)取25mL烧杯3只，分别加入醋酸锌、氯化钠和磷酸氢二钠，并分 别加入3mL注射用水溶解配制成醋酸锌溶液、氯化钠溶液和磷酸氢二钠溶 液；(6)向混合溶液I中依次顺序加入醋酸锌溶液、氯化钠溶液和磷酸氢二 钠溶液，搅拌均匀；(7)用注射用水定容至900mL，加入0.1mol/L的盐酸 溶液调节pH＝7.4；(8)用注射用水定容至1L，过滤除菌即得。

制备方法3(中国专利CN101389650B“实施例7”记载的制备方法)：(1) 取1L烧杯，加入转子，置于磁力搅拌器上，加入500mL注射用水和地特胰 岛素，搅拌均匀，得到地特胰岛素混悬液；(2)另取500mL烧杯，加入甘 油和400mL注射用水配制成4％的甘油溶液；(3)取25mL烧杯5只，分别 加入醋酸锌、苯酚、间甲酚、氯化钠和磷酸钠，并分别加入10mL注射用水 溶解配制成醋酸锌溶液、苯酚溶液、间甲酚溶液、氯化钠溶液和磷酸钠溶液； (4)向地特胰岛素混悬液中依次加入4％的甘油溶液、醋酸锌溶液、苯酚溶 液、间甲酚溶液、氯化钠溶液和磷酸钠溶液，调节pH至7.5；(5)用注射用 水定容至1L，过滤除菌即得。

上述制备方法中，各步搅拌时，转子的转速在200～400转/分钟范围内 调节转速，以既可以搅拌均匀、产生的泡沫又可以接受为度。

实施例1不同方法制备的地特胰岛素注射液

本实施所述地特胰岛素注射液含有地特胰岛素100IU/mL、甘油16 mg/mL、间甲酚2.06mg/mL、苯酚1.8mg/mL、锌65.4μg/mL、氯化钠1.17 mg/mL、磷酸氢二钠0.89mg/mL、盐酸、氢氧化钠及注射用水，pH＝7.4；按 照上述的制备方法1、制备方法2和制备方法3分别制备地特胰岛素注射液， 并记录制备周期所需时间，结果见表1。

实施例2不同方法制备的地特胰岛素注射液

本实施所述地特胰岛素注射液含有地特胰岛素100IU/mL、甘油 17mg/mL、间甲酚2.2mg/mL、苯酚1.5mg/mL、锌65.4μg/mL、氯化钠1.1 mg/mL、磷酸氢二钠0.89mg/mL、盐酸、氢氧化钠及注射用水，pH＝7.4；按 照上述的制备方法1、制备方法2和制备方法3分别制备地特胰岛素注射液， 并记录制备周期所需时间，结果见表1。

实施例3不同方法制备的地特胰岛素注射液

本实施所述地特胰岛素注射液含有地特胰岛素200IU/mL、甘油 18mg/mL、间甲酚2.7mg/mL、苯酚0.7mg/mL、锌55μg/mL、氯化钠 0.9mg/mL、磷酸氢二钠0.89mg/mL、盐酸、氢氧化钠及注射用水，pH＝7.4。 按照上述的制备方法1、制备方法2和制备方法3分别制备地特胰岛素注射 液，并记录制备周期所需时间，结果见表1。

实施例4不同方法制备的地特胰岛素注射液

本实施所述地特胰岛素注射液含有地特胰岛素60IU/mL、甘油 14mg/mL、间甲酚1.7mg/mL、苯酚1.5mg/mL、锌75μg/mL、氯化钠 0.5mg/mL、磷酸氢二钠0.89mg/mL、盐酸、氢氧化钠及注射用水，pH＝7.4。 按照上述的制备方法1、制备方法2和制备方法3分别制备地特胰岛素注射 液，并记录制备周期所需时间，结果见表1。

实施例5不同方法制备的地特胰岛素注射液

本实施所述地特胰岛素注射液含有地特胰岛素300IU/mL、甘油 18mg/mL、间甲酚3.2mg/mL、苯酚0.9mg/mL、锌96μg/mL、氯化钠 2.5mg/mL、磷酸氢二钠0.89mg/mL、盐酸、氢氧化钠及注射用水，pH＝7.4。 按照上述的制备方法1、制备方法2和制备方法3分别制备地特胰岛素注射 液，并记录制备周期所需时间，结果见表1。

实施例6不同方法制备的地特胰岛素注射液

本实施所述地特胰岛素注射液含有地特胰岛素150IU/mL、甘油 17mg/mL、间甲酚3.1mg/mL、苯酚1.9mg/mL、锌80μg/mL、氯化钠 2.3mg/mL、磷酸氢二钠0.89mg/mL、盐酸、氢氧化钠及注射用水，pH＝7.4。 按照上述的制备方法1、制备方法2和制备方法3分别制备地特胰岛素注射 液，并记录制备周期所需时间，结果见表1。

表1 实施例1-6地特胰岛素注射液的制备周期时间

不同处方的原料分别采用本发明提供的制备方法与现有技术制备地特 胰岛素注射液。表1数据显示，本发明提供的制备方法1和制备方法2的制 备周期时间平均仅为39.83±4.07和40.67±2.66分钟，而现有技术需要 116.67±8.66分钟。采用t检验对表1中的数据进行统计学分析，制备方法1 和2的制备周期时间无显著性差异(P>0.05)；但它们分别与现有技术制备 方法3相比，均具有显著性差异(P<0.05)。

相较现有技术，本发明的制备方法使制备周期缩短了近三分之二，从而 减少了地特胰岛素在注射液制备过程中因不可避免的机械应力而发生质变 的可能性；同时因为制备周期的缩短，能耗也相应大幅降低，使工艺过程更 环保。

试验例1地特胰岛素注射液质量的考察

考察实施例1-6制得的地特胰岛素注射液样品的质量，考察项目包括： pH、效价、总相关物质、最大相关物质、高分子蛋白和冰点下降。其中pH 采用pH计检测；效价、总相关物质和最大相关物质采用高效液相色谱法检 测；高分子蛋白采用分子排阻色谱法检测；冰点下降采用冰点法检测；具体 检测方法参见2010版《中国药典》附录。

高效液相色谱法检测总相关物质和最大相关物质的具体操作如下：

色谱条件：Waters高效液相色谱仪，Kromasil C4柱(柱长＝150mm，直 径4.6mm；100A-3.5um)，流动相为硫酸铵缓冲液-乙腈体系，流速1.0ml/min， 柱温50℃，检测波长214nm。

流动相具体配制方法如下：

流动相A：硫酸铵缓冲液(pH＝2.3)(硫酸铵缓冲液：取硫酸铵40g，加水 1900mL溶解后，用1moL/L硫酸调pH至2.3，加水至2000mL，混匀后用 0.45μm的滤膜过滤备用)∶乙腈＝1800∶200。

流动相B：乙腈∶水＝800∶225，过滤，脱气。

按下表进行梯度洗脱：

供试品的配制：分别精密量取由制备方法1、2和3制得的地特胰岛素 注射液样品2.5mL，置10mL量瓶中，加入2moL/L的醋酸溶液，并定容至 刻度。

测定法：取供试品溶液约10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，记录色 谱图，扣除醋酸、苯酚和间甲酚的吸收峰，按峰面积归一化法计算，即得总 相关物质和最大相关物质含量。

实施例1制备的3种地特胰岛素注射液，在上述色谱条件下共检测到包 括地特胰岛素在内的十几个吸收峰(扣除醋酸、苯酚和间甲酚的吸收峰，色 谱图略)，各峰的峰面积归一化法计算结果见表2-表4。

表2 地特胰岛素注射液HPLC图谱积分结果(实施例1制备方法1)

表3 地特胰岛素注射液HPLC图谱积分结果(实施例1制备方法2)

表4 地特胰岛素注射液HPLC图谱积分结果(实施例1制备方法3)

分子排阻色谱法检测高分子蛋白的具体操作如下：

色谱条件：Waters高效液相色谱仪，Waters Insulin HMWP柱,流动相为 冰醋酸-异丙醇-水(200：50：250)，流速为每分钟0.5ml；检测波长为276nm。

供试品的配制：分别精密量取由制备方法1、2和3制得的地特胰岛素 注射剂样品直接作为供试品溶液。

测定法：取供试品溶液15μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，保留时间 小于地特胰岛素主峰的所有峰面积之和按峰面积归一化法计算，即得高分子 蛋白含量。

实施例1和实施例2制得的地特胰岛素注射液样品的质量考察检测结果 见表5和表6。

表5 实施例1的制备工艺质量考察结果

表6 实施例2的制备工艺质量考察结果

实施例1和实施例2中采用本发明提供的制备方法制得的地特胰岛素注 射液，pH、效价和冰点下降与现有技术制得的地特胰岛素注射液无明显差异； 但总相关物质、最大相关物质均明显降低，高分子蛋白也并未检出。

另外，实施例3-6制备的地特胰岛素注射液，经过质量检测，结果与实 施例1和2的一致：与方法3得到的地特胰岛素注射液比较，采用本发明提 供的制备方法制得的注射液的总相关物质和最大相关物质含量明显降低，高 分子蛋白未检出(具体结果及色谱图略)。

因此，上述实验结果证明本发明提供的制备方法能够有效降低地特胰岛 素注射液的工艺杂质，从而提高药品质量和用药安全。

总之，本发明的制备方法使地特胰岛素注射液的制备周期时间由约120 分钟缩短为约40分钟，缩短了近三分之二，提高了制备效率，降低了工艺 耗能。更重要的是，在绿色环保的同时，本发明的制备方法减少了相关物质 和高分子蛋白等工艺杂质的生成，提高了地特胰岛素注射液的质量。另外， 本方法操作简单易行，适合规模化大生产。

以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可 以根据本发明做出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本 发明所附权利要求的范围。