几株可用于水中可生物降解有机物和微生物污染监测的细菌

摘要

本发明涉及几株用于水中可生物降解有机物和微生物污染监测的细菌。这几株细菌由生活污水处理厂的二次沉淀池的活性污泥中分离得到，编号为AS1、AS2、AS3、AS4、AS5、AS6、AS7。这几株细菌是由活性污泥经过乙酸碳溶液驯化培养后分离筛选获得的。这几株筛选的菌株可应用于地表水、地下水和微污染水等水体中可同化有机碳（Assimilable Organic Carbon，AOC）的测定。与现有的模式菌株P17和NOX相比，底物谱更广泛，能利用更广多的AOC，生长速度快，所需培养时间更短，测定结果更加准确等优点。

说明书

技术领域

本发明涉及将生活污泥经驯化培养后分离出的几株细菌，能够应用于水中可生物降解有机物和微生物污染的监测，属于微生物学和环境监测领域。

背景技术

近年来，由于污染事故频发和水源水的常态污染，我国的饮用水安全正面临着严峻挑战。在此形势下，饮用水微生物污染的风险预警就显得尤为重要。当水体中含有的可同化有机碳（Assimilable Organic Carbon，AOC）超过一定浓度时，会导致微生物过度生长，从而引发微生物污染事故。因此，AOC是水质监测中的一个重要指标，通过测定水中AOC的水平来间接反映水体的微生物污染风险。现有常用于测定水样AOC的菌株为P17和NOX，NOX生长较慢，P17和NOX必须分开计数，使得整个检测过程耗时长，所获得结果对水质监测风险预警很难起到指导作用。由于只有两株菌株，其底物谱有限，不能够完全利用水样中的各种AOC，导致其测定结果也并不十分准确。

因此，有必要筛选几株底物谱范围较广泛，生长速度较快的菌株，用于替代P17和NOX，从而简化AOC测定实验的操作步骤，缩短测定时间，提高测定结果的准确性。

发明内容

本发明的目的在于筛选几株底物谱范围较广泛，生长速度较快的细菌，用于替代P17和NOX，从而简化AOC测定的操作过程，缩短测定时间，提高测定结果的准确性。

这几株筛选的细菌在应用于水样AOC测定时，选取其中三株或三株以上的组合就可以到达较好的测定结果。

本发明的优点在于，筛选的几株细菌与P17和NOX相比，菌株种类更多，具有更广泛的AOC底物谱，生长速度更快，所需培养时间更短，操作步骤更加简单，测定结果更加准确。

本发明涉及的几株细菌保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是武汉市武汉大学，保藏日期为2014 年11月27日，其保藏编号具体为：克雷伯氏菌（Klebsiella sp.）的保藏号为CCTCC M 2014600，气单胞菌（Aeromonas sp.）的保藏号为CCTCC M 2014601，丛毛单胞菌（Comamonas sp.）的保藏号为CCTCC M 2014602，寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.）的保藏号为CCTCC M 2014603，不动杆菌（Acinetobacter sp.）的保藏号为CCTCC M 2014604，微杆菌（Exiguobacterium sp.）的保藏号为CCTCC M 2014605，希瓦氏菌（Shewanellasp.）的保藏号为CCTCC M 2014606。

.本发明的几株细菌是采用以下过程筛选获得的：

（1）采集活性污泥：从生活污水处理厂二次沉淀池中采集活性污泥；

（2）驯化培养：将活性污泥接入灭菌的乙酸碳溶液，25-28℃恒温培养3-5天；

（3）菌种分离筛选：将培养的菌液稀释涂布在平板上，25-28℃恒温培养1-1.5天；

（4）.鉴定菌株：从平板上挑取单菌落，对菌株进行鉴定。

鉴定结果如下：

 具体实施方式

以下结合具体的实施例对本发明的几株细菌的应用，进行进一步详细描述。

实验步骤：

1.将筛选的几株细菌中的7株细菌均取一环，先接入天然水样培养，再接入乙酸碳溶液培养后，制备成接菌液；

2.无碳化处理所有实验所用的器皿和枪头；

3..配制矿物质盐溶液和3mM磷酸盐缓冲溶液；

4.预处理待测水样，将待测水样过滤处理后，加入矿物质盐溶液和3mM磷酸盐缓冲溶液，按一定倍数将待测水样稀释；

5.配制标准乙酸碳溶液：用浓度较高的乙酸碳母液，加入矿物质盐溶液和3mM磷酸盐缓冲溶液，配制成100μg C/L乙酸碳溶液作为产率对照组。同时，用无碳水配制0μg C/L的碳溶液作为空白对照组；

6.分装、灭菌：将待测水样、产率对照组溶液和空白对照组溶液各取30mL加入无碳化处理的50mL三角瓶，巴氏消毒水样，冷却待用；

7.接种、培养：将接菌液接入巴氏消毒的水样中，25-28℃恒温培养3天；

8.平板计数：将培养的水样按一定比例稀释后涂布于平板上，25-28℃恒温培养，1-1.5天后计数；

9.平行对照实验：为了验证筛选的几株细菌用于测定水样AOC的可行性，同时以P17和NOX为接种液（采用同时接种法）做了平行对照实验，涂布于平板，2天后对P17进行计数，3.5-4天后对NOX进行计数；

10.标准对照实验组：配制了500μg C/L乙酸碳溶液，分别接入筛选的几株细菌混合接菌液和P17与NOX，以同样的操作和条件进行培养，作为标准对照实验组；

 11.产率系数和AOC的计算：

（1）产率系数计算公式

产率系数=[产率对照(cfu/mL)-空白对照(cfu/mL)]x10³ (mL/L)/产率对照组乙酸碳浓度(μg C/L)

（2）AOC计算公式

水样总AOC（μg C/L）=[稀释水样(cfu/mL)-空白对照(cfu/mL)]x10³ / 产率系数

（3）测定结果

筛选的几株细菌的测定结果：

P17和NOX的测定结果：

 实验结果表明,使用筛选的几株细菌测定结果比现有的模式菌株P17和NOX的测定结果更加准确。筛选的几株细菌具有更广谱的AOC利用能力。使用筛选的几株细菌测定AOC时，只需要培养1-1.5天即可计数，只需一次计数，不需要分开计数，菌株培养时间更短，大大缩短了测定时间，简化了操作步骤，提高了测定结果的时效性。