黄连碱类生物碱衍生物及其抗溃疡性结肠炎的用途

摘要

本发明涉及以黄连碱季铵盐为原料经衍生化反应获得的新的13-取代黄连碱季铵盐类衍生物、13-取代二氢黄连碱类生物碱衍生物和13-取代四氢黄连碱类生物碱衍生物、其制备方法及其药物用途；其药物用途特征是：所述黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐在分子水平的活性测试实验中分别显示出一定的或较显著的xbp1启动子转录激活效应，是在治疗溃疡性结肠炎方面具有较高药用价值的化合物。

说明书

技术领域

本发明涉及以黄连碱季铵盐为底物经多种衍生化反应获得的新的黄连碱类生物碱衍生物、其制备方法及其抗溃疡性结肠炎的药物用途。具体黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐包括13-取代黄连碱季铵盐类衍生物、13-取代二氢黄连碱类生物碱衍生物和13-取代四氢黄连碱类生物碱衍生物。本发明属属于医药技术领域。 

背景技术

溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)属慢性非特异性炎性肠道疾病，临床上具有迁延发作、难于根治、亦伴发恶变等特点，是一种公认的严重影响易患人群生活质量甚至威胁生存的恶性疾病。我国UC临床上发病率为每年1.2-20.2例／10万人，并且其患病率每年7.6-206例／10万人；从世界范围看，北欧和北美的人群发病率更高，而亚洲地区发病率相对较低；但我国溃疡性结肠炎发病率有逐年上升趋势，其原因有待探讨[池肇春，溃疡性结肠炎发病的分子机制进展，中国医师进修杂志,2012,35（19）1-3]。此外，部分UC病人会出现恶性变，最终发展为UC癌性变，出现肠道腺体重度发育不良和结、直肠的肿瘤。目前在对UC的治疗中，即便是在达到显效的治疗方面，也极其缺少药物和其它疗法，更没有根治的方法；临床仅有美沙拉嗪（5-氨基水杨酸，为SASP治疗溃疡性结肠炎的活性成分）、免疫抑制剂和类固醇激素等少数几类药物。它们虽具有一定疗效，但仍经常复发，并各自存在较严重的不良反应。因此，寻找和发现特异性高、治疗效果佳 和副作用小的抗UC新药具有显著的必要性。 

在医学上，UC的病因和发病机制虽有多种学说，但至今仍未完全明确。本发明从UC属于炎性肠道疾病(Inflammatory bowel disease,IBD)的范畴出发，通过广泛查阅文献，探讨UC的病因，为建立新的药理模型奠定基础。目前临床上较常见的IBD包括克罗恩病(Crohn’s disease，CD)和溃疡性结肠炎,都具有发病率高、病程长、病情反复发作等临床特点。虽然经过几十年的研究与观察，学术界有观点认为此两种疾病在病因学、免疫学、分子机制、病理及治疗等方面有许多差异，但也存在许多共同点。一项新近的研究发现，基因因素可能是诱发IBD的重要病因：与肠道上皮细胞内的非可控性内质网应激反应相关的下游关键转录因子X-box-binding protein1(缩写为xbp1)的功能异常与IBD的发病有着密切联系(Kaser A et al,Cell2008,134(5):743-756)。患有IBD的病人通常在xbp1基因的编码区会出现某些变异，从而使病人对IBD的诱发因素愈发敏感。xbp1表达的缺失或下调会促进IBD的发生和加重IBD病情的发展。因此，xbp1可能成为治疗IBD潜在的、新的药物作用靶点。然而，目前有关治疗IBD药物研发中以xbp1作为药物作用靶点的化学药物单体还未见报道。 

本发明通过建立以xbp1基因为作用靶点的体外药物筛选模型，结合双荧光素酶报告基因、实时定量聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）和蛋白质印迹（Western Blot）法等细胞和分子生物学研究手段，从xbp1的基因转录调控、mRNA表达及蛋白合成等不同层面寻找并发现xbp1的选择性激动剂。 

本发明通过对黄连碱季铵盐进行结构修饰，得到了一系列黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐，其重要特征在于，通过分子水平的药效学实验，证实了这些黄连碱类生物碱衍生物分别显示出一定的或较显著的xbp1启动子转录激活效应，是在治疗溃疡性结肠炎方 面具有较高药用价值的化合物。此外，与底物比较，这些黄连碱类生物碱衍生物的溶解性能均增强，使它们在底物不易溶解的一些溶剂中均较易溶解或溶解性得到明显改善。 

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种治疗溃疡性结肠炎的药物，即通式I-Ⅴ所示的黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐。 

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案： 

本发明第一方面提供了一种通式I-Ⅴ所示的黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐。 

本发明第二方面提供了通式I-Ⅴ所示的黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐的制备方法。 

本发明第三方面提供了通式I-Ⅴ所示的黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐的药物组合物。 

本发明第四方面提供了通式I-Ⅴ所示的黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐的治疗抗溃疡性结肠炎的用途。 

本发明第一方面提供的通式I-Ⅴ所示的黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐如下： 

（1）如通式Ⅰ所示的黄连碱类生物碱季胺盐衍生物： 

其中，X^-为季铵盐负离子，优选的X^-选自卤素负离子、硫酸根负离子等； 

R₁₃选自CH₂OR₁₃'并且R₁₃'选自H或脂肪烃基，并且R₁₃'烃基通式为C_nH_2n+1，n选自1-13的整数，或R₁₃'脂肪烃基通式为C_mH_2m-1，m选自2-13的整数； 

或R₁₃选自COOR₁₃'并且R₁₃'选自H或烃基，并且R₁₃'烃基通式为C_nH_2n+1，n选自1-5的整数； 

或R₁₃选自CH₂COOR₁₃'并且R₁₃'选自H或烃基，并且R₁₃'烃基通式为C_nH_2n+1，n选自1-5的整数。 

（2）如通式Ⅱ所示的黄连碱类生物碱季胺盐衍生物： 

其中，X^-为季铵盐负离子，优选的X^-选自卤素负离子、硫酸根负离子等； 

R₁₃₂选自H、三氟甲基、氰基、羟基、氨基、硝基、苯基、亚甲二氧基、1,2-亚乙二氧基、卤素、C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，C1-C4的烷硫基，C1-C4的烷酰基、C1-C4的烷酰氧基；上述C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，C1-C4的烷硫基，C1-C4的烷酰基、C1-C4的烷酰氧基中的烷基是直链或支链。 

（3）如通式Ⅲ所示的二氢黄连碱类生物碱衍生物： 

其中，R₁₃₃选自H、三氟甲基、氰基、羟基、氨基、硝基、苯基、 亚甲二氧基、1,2-亚乙二氧基、卤素、C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，C1-C4的烷硫基，C1-C4的烷酰基、C1-C4的烷酰氧基；上述C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，C1-C4的烷硫基，C1-C4的烷酰基、C1-C4的烷酰氧基中的烷基是直链或支链。 

（4）如通式Ⅳ所示的四氢黄连碱类生物碱衍生物： 

其中，R₁₃₄选自CH₂COR₁₃'并且R₁₃'选自OH或烃氧基，并且R₁₃'烃氧基通式为OC_nH_2n+1，n选自1-13的整数。 

（5）如通式Ⅴ所示的四氢黄连碱类生物碱衍生物： 

其中，R₁₃₅选自H、三氟甲基、氰基、羟基、氨基、硝基、苯基、亚甲二氧基、1,2-亚乙二氧基、卤素、C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，C1-C4的烷硫基，C1-C4的烷酰基、C1-C4的烷酰氧基；上述C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，C1-C4的烷硫基，C1-C4的烷酰基、C1-C4的烷酰氧基中的烷基是直链或支链。 

本发明最优选的化合物选自如下式1-24所示化合物群组： 

本发明第二方面提供了本发明化合物的制备方法：所述的黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐可通过如下的合成方法合成： 

(1)本发明的13-羟甲基取代黄连碱季胺盐可通过如下的合成方法合成： 

(2)本发明的其它13-取代黄连碱季铵盐类衍生物、13-取代二氢黄连碱类生物碱衍生物和13-取代四氢黄连碱类生物碱衍生物可通过如下的合成方法合成（其中，X代表卤素，R代表苄基或取代苄基，或R代表羧酸酯基）： 

本发明第三方面还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量%。 

本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。 

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂（包括真溶液和胶体溶液）、乳剂（包括o/w型、w/o型和复乳）、混悬剂、注射剂（包括水针剂、粉针剂和输液）、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂（包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片）、胶囊剂（包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊）、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气（粉）雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。 

本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。 

为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。 

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。 

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有 效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。 

为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。 

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。 

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。 

本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-150mg/Kg体重，优选为0.1-100mg/Kg体重，更优选为1-60mg/Kg体重，最优选为2-30mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。 

本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。 

本发明第四方面提供了化合物在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的 应用。本发明所述黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐在分子水平的活性测试实验中分别显示出一定的或较显著的xbp1启动子转录激活效应，是在治疗溃疡性结肠炎方面具有较高药用价值的化合物。此外，与底物比较，这些黄连碱类生物碱衍生物的溶解性能均增强，使它们在底物不易溶解的一些溶剂中均较易溶解或溶解性得到明显改善。 

附图说明

图1MTT法检测各化合物对体外培养肠上皮细胞IEC-6的毒性结果。 

图2本发明不同化合物对xbp1基因上游启动子的激活效应实验结果。 

具体实施方式

实施例1  化合物1-24的制备工艺及结构鉴定数据 

化合物1的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(206mg,0.55mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，3-氟溴苄(0.2mL,1.63mmol)，NaI(82mg,0.55mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(2mL)，室温反应1h，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体160mg，收率57.1％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.15(br s,2H,NCH₂CH₂),4.75(s,2H, ArCH₂Ar),4.80(br s,2H,NCH₂CH₂),6.08(s,2H,OCH₂O),6.55(s,2H,OCH₂O),6.92(s,1H,ArH),7.00-7.16(m,3H,ArH),7.16(s,1H,ArH),7.36-7.43(m,1H,ArH),7.59(d,J=8.7Hz,1H,ArH),7.92(d,J=8.7Hz,1H,ArH),10.10(s,1H,ArH). 

化合物2的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(200mg,0.53mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，对氰基溴苄(317mg,1.62mmol)，NaI(80mg,0.53mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(2mL)，室温反应1h，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体142mg，收率52.0％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.14(t,J=3.9Hz,2H,NCH₂CH₂),4.80(br s,2H,NCH₂CH₂),4.83(s,2H,ArCH₂),6.08(s,2H,OCH₂O),6.55(s,2H,OCH₂O),6.83(s,1H,ArH),7.15(s,1H,ArH),7.37(d,J=5.7Hz,2H,ArH),7.54(d,J=6.9Hz,1H,ArH),7.82(d,J=6.3Hz,2H,ArH),7.90(d,J=6.6Hz,1H,ArH),10.10(s,1H,ArH). 

化合物3的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(203mg,0.54mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，2,4-二氟溴苄(0.2mL,1.56mmol)，NaI(80mg,0.53mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(2mL)，室温反应1h，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体160mg，收率56.3％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.13(br s,2H,NCH₂CH₂),4.62(s,2H,ArCH₂),4.80(br s,2H,NCH₂CH₂),6.10(s,2H,OCH₂O),6.56(s,2H,OCH₂O),6.86(s,1H,ArH),6.90-7.01(m,2H,ArH),7.16(s,1H,ArH),7.37-7.44(m,1H,ArH),7.62(d,J=9.3Hz,1H,ArH),7.94(d,J=8.7Hz,1H,ArH),10.10(s,1H,ArH). 

化合物4的制备 

称取黄连碱(100mg,0.28mmol)于反应瓶中，加入5N NaOH(1.5mL)，逐滴加入丁酮(0.2mL,2.23mmol)，滴完后60℃加热反应3h，停止反应，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相水洗至中性，加入无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，然后加入80%乙醇(3mL)，逐滴加入HOAc(0.5mL)，甲醛(0.7mL,7.03mmol)，回流反应3h，原料反 应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(2mL)，室温反应1h，然后用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=20:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体23mg，收率21.2％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.12(br s,2H,NCH₂CH₂),4.78(s,2H,NCH₂CH₂),4.81(s,2H,CH₂OH),6.18(s,2H,OCH₂O),6.55(s,2H,OCH₂O),7.16(s,1H,ArH),7.52(s,1H,ArH),7.98(d,J=9.0Hz,1H,ArH),8.09(d,J=9.0Hz,1H,ArH),10.06(s,1H,ArH). 

化合物5的制备 

称取13-(2-氟苄基)黄连碱(48mg,0.09mmol)于反应瓶中，加入甲醇(4mL)，K₂CO₃(39mg,0.28mmol)，称取NaBH₄(6mg,0.16mmol)溶解于5%NaOH(0.5mL)中，逐滴加入到反应瓶中，室温搅拌反应2h，原料反应完全，将反应液过滤，滤饼分别用水洗涤至中性，干燥得黄色固体31mg，收率76.5％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.74(br s,2H,NCH₂CH₂),3.07(br s,2H,NCH₂CH₂),3.95(s,2H,ArCH₂Ar),4.29(s,2H,NCH₂Ar),5.94(s,2H,OCH₂O),5.99(s,2H,OCH₂O),6.35(d,J=8.0Hz,1H,ArH),6.59(s,1H,ArH),6.63(d,J=8.0Hz,1H,ArH),6.86(s,1H,ArH),6.94-6.98(m,1H,ArH),7.10-7.27(m,3H,ArH). 

化合物6的制备 

称取13-(3-氟苄基)黄连碱(45mg,0.09mmol)于反应瓶中，加入甲醇(4mL)，加入K₂CO₃(38mg,0.27mmol)，称取NaBH₄(5mg,0.13mmol)溶解于5%NaOH(0.5mL)中，逐滴加入到反应瓶中，室温搅拌2h，原料反应完全，将反应液过滤，滤饼用水洗至中性，干燥得黄色固体24mg，收率63.2％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.75(t,J=4.8Hz,2H,NCH₂CH₂),3.09(t,J=4.8Hz,2H,NCH₂CH₂),4.05(s,2H,ArCH₂Ar),4.29(s,2H,NCH₂Ar),5.95(s,2H,OCH₂O),6.00(s,2H,OCH₂O),6.40(d,J=8.4Hz,1H,ArH),6.64(d,J=8.4Hz,1H,ArH),6.67(s,1H,ArH),6.88(s,1H,ArH),6.99-7.14(m,3H,ArH),7.32-7.40(m,1H,ArH). 

化合物7的制备 

称取13-(4-氟苄基)黄连碱(68mg,0.13mmol)于反应瓶中，加入甲醇(4mL)，加入K₂CO₃(54mg,0.39mmol)，称取NaBH₄(7mg,0.19mmol)溶解于5%NaOH(0.5mL)中，逐滴加入到反应瓶中，室温搅拌2h，原料反应完全，将反应液过滤，滤饼用水洗至中性，干燥得黄色固体40mg，收率70.2％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.73(t,J=4.5Hz,2H,NCH₂CH₂),3.07(br s,2H,NCH₂CH₂),3.99(s,2H,ArCH₂Ar),4.27(s,2H,NCH₂Ar),5.93(s,2H,OCH₂O),5.99(s,2H,OCH₂O),6.39(d,J=8.7Hz,1H,ArH),6.62(d,J=8.1Hz,1H,ArH),6.66(s,1H,ArH),6.86(s,1H,ArH),7.09-7.15(m,2H,ArH),7.26-7.30(m,2H,ArH). 

化合物8的制备 

称取13-(2,4-二氟苄基)黄连碱(50mg,0.09mmol)于反应瓶中，加入甲醇(3mL)，加入K₂CO₃(37mg,0.27mmol)，称取NaBH₄(5mg,0.13mmol)溶解于5%NaOH(0.5mL)中，逐滴加入到反应瓶中，室温搅拌2h，原料反应完全，将反应液过滤，滤饼用水洗至中性，干燥得黄色固体27mg，收率63.5％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.75-2.77(m,2H,NCH₂CH₂),3.07-3.09(m,2H,NCH₂CH₂),3.93(s,2H,ArCH₂Ar),4.30(s,2H,NCH₂Ar),5.96(s,2H,OCH₂O),6.01(s,2H,OCH₂O),6.36(d,J=8.4Hz,1H,ArH),6.57(s,1H,ArH),6.65(d,J=8.4Hz,1H,ArH),6.88(s,1H,ArH),6.97-7.02(m,1H,ArH),7.16-7.31(m,2H,ArH). 

化合物9的制备 

称取13-(4-氰基苄基)黄连碱(64mg,0.12mmol)于反应瓶中，加入甲醇(4mL)，加入K₂CO₃(50mg,0.36mmol)，称取NaBH₄(6mg,0.16mmol)溶解于5%NaOH(0.5mL)中，逐滴加入到反应瓶中，室温搅拌2h，原料反应完全，将反应液过滤，滤饼用水洗至中性，干燥得黄色固体39mg，收率72.0％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.75(br s,2H,NCH₂CH₂),3.09(br s,2H,NCH₂CH₂),4.12(s,2H,ArCH₂Ar),4.30(s,2H,NCH₂Ar),5.95(s,2H,OCH₂O),6.00(s,2H,OCH₂O),6.35(d,J=8.4Hz,1H,ArH),6.58(s,1H,ArH),6.62(d,J=8.4Hz,1H,ArH),6.88(s,1H,ArH),7.47(d,J=8.1Hz,1H,ArH),7.77(d,J=8.1Hz,1H,ArH). 

化合物10的制备 

称取13-(4-甲氧基苄基)黄连碱(52mg,0.10mmol)于反应瓶中，加入甲醇(4mL)，K₂CO₃(41mg,0.30mmol)，称取NaBH₄(6mg,0.16mmol)溶解于5%NaOH(0.5mL)中，逐滴加入到反应瓶中，室温搅拌反应2h，原料反应完全，将反应液过滤，滤饼分别用水洗涤至中性，干燥得黄 色固体35mg，收率79.5％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.73(br s,2H,NCH₂CH₂),3.06(br s,2H,NCH₂CH₂),3.71(s,3H,OCH₃),3.93(s,2H,ArCH₂Ar),4.25(s,2H,NCH₂Ar),5.92(s,2H,OCH₂O),5.98(s,2H,OCH₂O),6.40(d,J=8.0Hz,1H,ArH),6.61(d,J=8.0Hz,1H,ArH),6.73(s,1H,ArH),6.85(s,1H,ArH),6.86(d,J=8.0Hz,1H,ArH),7.16(d,J=8.0Hz,1H,ArH). 

化合物11的制备 

称取13-(2-萘甲基)黄连碱(56mg,0.10mmol)于反应瓶中，加入甲醇(4mL)，K₂CO₃(43mg,0.31mmol)，称取NaBH₄(6mg,0.16mmol)溶解于5%NaOH(0.5mL)中，逐滴加入到反应瓶中，室温搅拌反应2h，原料反应完全，将反应液过滤，滤饼分别用水洗涤至中性，干燥得黄色固体39mg，收率81.6％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.76(br s,2H,NCH₂CH₂),3.11(br s,2H,NCH₂CH₂),4.17(s,2H,ArCH₂Ar),4.34(s,2H,NCH₂Ar),5.88(s,2H,OCH₂O),5.99(s,2H,OCH₂O),6.42(d,J=8.0Hz,1H,ArH),6.57(d,J=8.0Hz,1H,ArH),6.76(s,1H,ArH),6.86(s,1H,ArH),7.45-7.49(m,3H,ArH),7.71(s,1H,ArH),7.79-7.80(m,1H,ArH),7.86-7.88(m,2H,ArH). 

化合物12的制备 

称取13-(3-三氟苄基)黄连碱(51mg,0.09mmol)于反应瓶中，加入甲醇(4mL)，加入K₂CO₃(38mg,0.27mmol)，称取NaBH₄(7mg,0.19mmol)溶解于5%NaOH(0.5mL)中，逐滴加入到反应瓶中，室温搅拌3h，原料反应完全，将反应液过滤，滤饼用水洗至中性，干燥得黄色固体32mg，收率72.7％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.44-2.51(m,1H),2.56-2.65(m,2H),2.70-2.76(m,1H),2.92-3.02(m,1H),3.09-3.13(m,1H),3.45(d,J=15.6Hz,1H),3.55(br s,1H),3.72(br s,1H),4.05(d,J=15.6Hz,1H),5.89(s,1H),5.93-6.00(m,4H),6.55(d,J=8.1Hz,1H,ArH),6.66(s,1H,ArH),6.95(s,1H,ArH),7.05(s,1H,ArH),7.18(d,J=6.9Hz,1H,ArH),7.35-7.45(m,2H,ArH). 

化合物13的制备 

称取13-黄连碱乙酸乙酯(46mg,0.10mmol)于反应瓶中，加入甲醇(4mL)，加入K₂CO₃(43mg,0.31mmol)，称取NaBH₄(6mg,0.16mmol)溶解于5%NaOH(0.3mL)中，逐滴加入到反应瓶中，室温搅拌3h，原料反应完全，用2N HCl调节PH=5，将反应液过滤，滤饼用水洗至中性，干燥得浅黄色固体25mg，收率62.5％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.13(d,J=15.2Hz,1H),2.20-2.29(m,1H),2.40-2.45(m,1H),2.55(d,J=15.2Hz,1H),2.83-2.90(m,1H),3.04-3.06(m,1H),3.42(d,J=15.2Hz,1H),3.63-3.64(m,1H),3.67(s,1H),3.98(d,J=15.2Hz,1H),5.94-6.01(m,4H,OCH₂O),6.59(d,J=8.0Hz,1H,ArH),6.68(s,1H,ArH),6.74(d,J=8.0Hz,1H,ArH),6.88(s,1H,ArH). 

化合物14的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(105mg,0.28mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(4mL)，溴苄(0.1mL,0.84mmol)，NaI(42mg,0.28mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2NHCl(1.0mL)，室温反应1h，然后用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体85mg，收率62.0％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.14(br s,2H,NCH₂CH₂),4.73(s,2H,ArCH₂),4.81(br s,2H,NCH₂CH₂),6.07(s,2H,OCH₂O),6.55(s,2H,OCH₂O),6.96(s,1H,ArH),7.15(s,1H,ArH),7.18-7.36(m,5H,ArH),7.59(d,J=8.7Hz,1H,ArH),7.92(d,J=8.7Hz,1H,ArH),10.08(s,1H,ArH). 

化合物15的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(203mg,0.54mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，对氟溴苄(0.2mL,1.45mmol)，NaI(80mg,0.53mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(1.0mL)，室温反应1h，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体163mg，收率59.4％。 

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm):3.22(br s,2H,NCH₂CH₂),4.63(s,2H,ArCH₂),5.29(br s,2H,NCH₂CH₂),6.00(s,2H,OCH₂O),6.44(s,2H,OCH₂O),6.88(d,J=4.5Hz,2H,ArH),7.03-7.07(m,4H,ArH),7.41(d,J=6.9Hz,1H,ArH),7.53(d,J=6.6Hz,1H,ArH),10.88(s,1H,ArH). 

化合物16的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(200mg,0.53mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，间三氟甲基溴苄(0.25mL,1.64mmol)，NaI(80mg,0.53mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(1.0mL)，室温反应1h，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶 柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体186mg，收率62.8％。 

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm):3.24(t,J=2.4Hz,2H,NCH₂CH₂),4.73(s,2H,ArCH₂),5.33(br s,2H,NCH₂CH₂),6.01(s,2H,OCH₂O),6.47(s,2H,OCH₂O),6.80(s,1H,ArH),6.89(s,1H,ArH),7.36(d,J=8.7Hz,1H,ArH),7.44-7.61(m,5H,ArH),11.00(s,1H,ArH). 

化合物17的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(200mg,0.53mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，对硝基溴苄(347mg,1.61mmol)，NaI(80mg,0.53mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(1.0mL)，室温反应1h，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体53mg，收率18.7％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.15(t,J=3.9Hz,2H,NCH₂CH₂),4.80(br s,2H,NCH₂CH₂),4.88(s,2H,ArCH₂),6.07(s,2H,OCH₂O),6.55(s,2H,OCH₂O),6.84(s,1H,ArH),7.16(s,1H,ArH),7.44(d,J=6.0Hz,2H,ArH),7.55(d,J=6.6Hz,1H,ArH),7.90(d,J=6.9Hz,1H,ArH),8.19(d,J=6.0Hz,2H,ArH),10.10(s,1H,ArH). 

化合物18的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(203mg,0.54mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，3,5-双三氟甲基氯苄(425mg,1.62mmol)，NaI(80mg,0.53mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体58mg，收率18.5％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.10(t,J=3.9Hz,2H,NCH₂CH₂),4.78(br s,2H,NCH₂CH₂),4.99(s,2H,ArCH₂),6.05(s,2H,OCH₂O),6.56(s,2H,OCH₂O),6.88(s,1H,ArH),7.10(s,1H,ArH),7.69(d,J=6.6Hz,1H,ArH),7.83(s,2H,ArH),7.94(d,J=6.9Hz,1H,ArH),7.98(s,1H,ArH),10.11(s,1H,ArH). 

化合物19的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(205mg,0.54mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，邻氟溴苄(0.2mL,1.66mmol)，NaI(82mg,0.55mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(1.0mL)，室温反应1h，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机 相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体110mg，收率40.1％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.14(br s,2H,NCH₂CH₂),4.65(s,2H,ArCH₂),4.80(br s,2H,NCH₂CH₂),6.08(s,2H,OCH₂O),6.56(s,2H,OCH₂O),6.82-6.84(m,1H,ArH),6.86(s,1H,ArH),7.05-7.10(m,1H,ArH),7.16(s,1H,ArH),7.33-7.37(m,2H,ArH),7.61(d,J=5.7Hz,1H,ArH),7.93(d,J=5.7Hz,1H,ArH),10.11(s,1H,ArH). 

化合物20的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(205mg,0.54mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，2-溴甲基萘(362mg,1.64mmol)，NaI(80mg,0.53mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(1.0mL)，室温反应1h，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体192mg，收率65.8％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.17(br s,2H,NCH₂CH₂),4.87(br s,3H,NCH₂CH₂,ArCH₂),6.02(s,2H,OCH₂O),6.56(s,2H,OCH₂O),6.99(s,1H,ArH),7.16(s,1H,ArH),7.44-7.50(m,4H,ArH),7.61-7.70(m,2H,ArH),7.86-7.98(m,3H,ArH),10.14(s,1H,ArH). 

化合物21的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(203mg,0.54mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，对甲氧基溴苄(0.25mL,1.71mmol)，NaI(83mg,0.55mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(1.0mL)，室温反应1h，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体248mg，收率86.7％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):3.14(br s,2H,NCH₂CH₂),4.63(s,2H,ArCH₂),4.81(br s,2H,NCH₂CH₂),6.07(s,2H,OCH₂O),6.54(s,2H,OCH₂O),6.91(d,J=8.4Hz,2H,ArH),6.99(s,1H,ArH),7.07(d,J=8.4Hz,2H,ArH),7.15(s,1H,ArH),7.59(d,J=9.0Hz,1H,ArH),7.92(d,J=9.3Hz,1H,ArH),10.07(s,1H,ArH). 

化合物22的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(208mg,0.55mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，对甲基溴苄(308mg,1.66mmol)，NaI(83mg,0.55mmol)，加完后回流反应5h，原料反应完全，将反应液浓缩， 加入2N HCl(1.0mL)，室温反应1h，用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体222mg，收率80.0％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):2.29(s,3H,ArCH₃),3.15(br s,2H,NCH₂CH₂),4.67(s,2H,ArCH₂),4.82(br s,2H,NCH₂CH₂),6.08(s,2H,OCH₂O),6.56(s,2H,OCH₂O),6.97(s,1H,ArH),7.07(d,J=7.5Hz,2H,ArH),7.16(s,1H,ArH),7.17(d,J=7.2Hz,2H,ArH),7.57(d,J=9.0Hz,1H,ArH),7.92(d,J=9.0Hz,1H,ArH),10.09(s,1H,ArH). 

化合物23的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(200mg,0.53mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，氯甲酸乙酯(0.2mL,2.09mmol)，NaI(80mg,0.53mmol)，加完后回流反应8h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(1.5mL)，室温反应1h，然后用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体40mg，收率17.6％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):1.30(t,J=6.9Hz,3H,CH₂CH₃),3.16(br s,2H,NCH₂CH₂),4.51(q,J=6.9Hz,2H,CH₂CH₃),4.81(br s,2H,NCH₂CH₂),6.18(s,2H,OCH₂O),6.60(s,2H,OCH₂O),7.10(s,1H,ArH),7.17(s,1H,ArH),7.66(d,J=9.3Hz,1H,ArH),8.08(d,J=9.0Hz,1H,ArH),10.17(s,1H,ArH). 

化合物24的制备 

称取化合物8-丙酮基取代二氢黄连碱(230mg,0.61mmol)于反应瓶中，依次加入乙腈(6mL)，溴乙酸乙酯(0.2mL,1.81mmol)，NaI(92mg,0.61mmol)，加完后回流反应8h，原料反应完全，将反应液浓缩，加入2N HCl(1.0mL)，室温反应1h，然后用氯仿/甲醇(v/v=10:1)萃取，有机相用无水MgSO₄干燥，过滤，减压蒸除溶剂，粗品经硅胶柱层析[v/v=30:1(氯仿/甲醇)]纯化得黄色固体120mg，收率44.4％。 

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ(ppm):1.24(t,J=7.2Hz,3H,CH₂CH₃),3.09(br s,2H,NCH₂CH₂),4.22(q,J=7.2Hz,2H,CH₂CH₃),4.42(s,2H,ArCH₂),4.77(br s,2H,NCH₂CH₂),6.18(s,2H,OCH₂O),6.56(s,2H,OCH₂O),7.15(s,1H,ArH),7.17(s,1H,ArH),7.80(d,J=8.7Hz,1H,ArH),8.07(d,J=8.7Hz,1H,ArH),10.04(s,1H,ArH). 

药理实验 

实验例1 

化合物的抗溃疡性结肠炎生物学研究实施实例 

1、化合物的细胞毒性检测 

（1）实验方法：将体外培养生长至90%汇合状态的IEC-6肠上皮细胞以0.25%胰酶/0.1%EDTA消化并接种于96孔细胞培养板，每孔细胞数为2×103。培养次日去除原培养基，每孔加入含1×10^-5mol/L的待测化合物工作液继续培养。于IEC-6细胞与待测药物共培养后的0h，24h和72h通过MTT法检测待测药物对细胞的毒性(n=5)。 

（2）结果：在实验测定的时间范围内，1×10^-5mol/L本发明所涉 及的系列化合物对于肠上皮细胞IEC-6均无显著的细胞毒性，统计学上检测无显著性差异（见图1）。 

（3）结论：本发明涉及系列新的黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐适于在IEC-6细胞模型上用于下游实验的筛选。 

本发明所涉及系列新的黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐在浓度为1uM时对肠上皮IEC-6细胞毒性检测结果如图1所示。实验表明：化合物1-13在该浓度下与IEC-6细胞共孵育24h后无明显细胞毒作用，共孵育3d后检测结果与24h一致（此处未展示），均未表现出明显的细胞毒效应。 

2、13个无明显IEC-6细胞毒的化合物对pGL3-pxbp1的转录激活效应。 

（1）实验方法：将处于生长旺盛期的IEC-6细胞接种于48孔板中，每孔细胞数为5×104，使细胞在孔内均匀分散，放置于37℃、5%CO₂加湿细胞培养箱培养。待细胞汇片至70%-80%，对细胞进行相应质粒的转染（0.6μg/孔），4h后加入1×10^-5mol/L的各化合物与转染细胞共孵育(n=3)。待共培养36h-48h后收样，利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒(Promega，USA)对实验样品进行荧光素酶活性检测。 

（2）结果：以无转染质粒细胞为对照组1，以转染pGL-xbp1不加药细胞组为对照组2，经统计学分析结果显示有13个化合物对xbp1基因上游启动子具有激活效应。 

（3）结论：本发明所涉及系列新的黄连碱类生物碱衍生物或其生理上可接受的盐对xbp1基因的表达具有转录激活效应。 

实验结果见图2。 

不同化合物对xbp1基因启动子具有一定的转录激活效应。图中con1为本底对照，con2为pGL3空载体对照。结果表明，该类新结构化合物不同程度上能激活xbp1分子的转录，具有一定的转录激活效应 。