一种仙台病毒抗原肽及其在仙台病毒感染检测中的应用

摘要

本发明提供了一种本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种仙台病毒抗原肽及其在仙台病毒感染检测中的应用。本发明提供的仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。由于本发明提供的仙台病毒抗原肽分子量较小，降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，因此提高了多肽组合的特异性和针对性，从而提高了实验动物微生物检测的准确性。

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种仙台病毒抗原肽及其在仙 台病毒感染检测中的应用。

背景技术

仙台病毒（Sandaivirus）属于副粘病毒科副粘病毒亚科、呼吸道病毒属病 毒，为单股负链RNA病毒，是一种实验啮齿类常见和高发的感染性副流感病 毒，是引起啮齿类动物呼吸系统疾病的主要病原，小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠 等啮齿类实验动物均易感。仙台病毒多数情况下无明显临床表现，但会对实 验动物的免疫系统产生影响，在合并其他细菌性病原体的感染后造成致死性 的影响，是啮齿类实验动物必须排查的病原体，其传染性强，容易扩散，在 多数情况下呈隐性感染，可影响幼鼠发育成长和降低成年鼠的繁殖率，改变 体内细胞免疫反应，且很难从鼠群中清除。1953年在日本仙台的一次新生儿 肺炎流行中首次分离出，又名Hemagglutinating virus of Japan(HVJ)，即Fushimi 株。由于许多特性与流感不同，以后又陆续分离到其他毒株，故命名为副流 感病毒。

仙台病毒几乎可凝集所有种类的红血球，而且有溶血性。其表面具有血 凝素和溶血素，溶血素有溶细胞作用，能溶解某些动物的红细胞，与病毒的 感染性有关，血凝素则能凝集某些哺乳类和禽类的红细胞。仙台病毒感染可 侵犯呼吸道的表层组织，在上皮细胞中增殖，所致的免疫反应不牢固易再次 感染，成人中通常引起轻型呼吸道感染，而5岁以下儿童发病率高、病情重， 表现为急性阻塞性喉-支气管-气管炎和肺炎。由于仙台病毒不仅感染动物，而 且还会导致儿童患严重的呼吸道疾病，所以开发一种能够及时的、准确的检 测仙台病毒感染的产品，对动物和人类的健康具有重要意义。

目前的检测多采用血清学的方法包括ELISA、IFA以及血凝抑制实验等。 这些血清学的检测方法比较经典，在实际应用中却存在一些问题，而最为主 要的是血清学检测使用的抗原质量的稳定性和适用性。在血清学检测中最为 关键的因素是抗原的质量。抗原的特异性和代表性，抗原的免疫原性和抗原 性，这些因素均会影响到最终对血清学检测结果的判定。近年来随着多肽展 示技术的应用，已经针对许多病原体的特异抗原表位进行了相关分析，也找 到了一些有用的多肽表位，有些在微生物检测中也得到了应用。使用的线性 表位多肽库，虽然不能包含天然空间构象表位，但是仍有许多线性表位具有 良好的抗原性，多个抗原表位的组合可以很好的满足血清学检测的需要。

在目前的国家标准推荐的检测方法中使用病毒全颗粒作为抗原物质来检 测实验动物血清中可能存在的抗体。但是由于病毒全颗粒在实验室的扩增培 养以及分离纯化等过程中存在着许多的变量，包括病原体本身的变异、每次 生产病毒可能掺入的非特异性抗原成分等，这些因素均会影响到抗原的稳定 性。虽然病毒全颗粒保证了全部抗原位点的存在，但是抗原暴露的不同方式 也会影响到抗原表位的展示最后影响检测工作的结果。而且病毒全颗粒抗原 会和其他病原体的产生交叉抗原最终影响检测的准确性。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种仙台病毒抗原肽及其 在仙台病毒感染检测中的应用，本发明提供的仙台病毒抗原肽提高了多肽组 合的特异性和针对性，因此可提高实验动物微生物检测的准确性。

本发明提供了一种仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸 序列。

本发明还提供了一种仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基 酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。

优选地，本发明提供的仙台病毒抗原肽的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所 示的氨基酸序列的同源性大于85%。

本发明提供的抗原肽是仙台病毒的优势抗原表位，且分子量较小，因此 降低了与其他分子发生交叉反应的可能，提高了多肽组合的特异性和针对性， 从而提高了对仙台病毒感染检测的准确率。

本发明提供了一种编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子，具有 如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

本发明还提供了一种仙台病毒疫苗，包括本发明提供的仙台病毒抗原肽 及药学上可接受的辅料。

本发明提供的仙台病毒疫苗中抗原肽为具有如SEQ ID NO:1所示的氨基 酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或 多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。

优选地，本发明提供给的仙台病毒疫苗的剂型为口服制剂或注射剂。

由于本发明提供的抗原肽是仙台病毒的优势抗原表位，所以在制备疫苗 时，可减少仙台病毒对动物的危害。

本发明提供的仙台病毒抗原肽在仙台病毒感染检测中的应用。

本发明提供的仙台病毒疫苗中抗原肽为具有如SEQ ID NO:1所示的氨基 酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或 多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。

用抗原的优势表位检测动物体是否感染该抗原的原理是：当动物体感染 抗原后，动物体就会产生针对该抗原的抗体，该抗体分布在动物的血清中， 通过检测血清中该抗体的存在与否，就能得知动物体是否感染抗原。动物体 产生的抗体一般是针对抗原的优势表位，即所产生的抗体能特异性的与抗原 的优势表位相结合。所以通过抗原优势表位检测血清中是否存在与其结合的 抗体，就能得知动物体是否感染该病毒。

本发明提供了一种非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法，包括以下步 骤：

步骤1：将本发明提供的抗原肽包被到酶标板上，经第一洗涤后封闭，获 得封闭后的酶标板；

步骤2：取待测样品加入封闭后的酶标板中，经孵育、第二洗涤、标记二 抗、第三洗涤后显色，获得受检溶液；

步骤3：取受检溶液，用酶标仪检测OD₄₅₀值，采用Cut off值法判断检 测结果；

Cut off值法判断的标准为：

受检溶液的OD₄₅₀值≥+3SD为阳性，

受检溶液的OD₄₅₀值≤+2SD为阴性，

+3SD≥受检溶液的OD₄₅₀的值≥+2SD为可疑，重新测受检溶液的 OD₄₅₀值，受检溶液的OD₄₅₀值小于+3SD则判为阴性；

其中，为所有阴性对照样品的OD₄₅₀平均值，SD为所有阴性样品OD₄₅₀的标准差；阴性对照样品与待测样品的检测方法一致；

其中，本发明提供的仙台病毒疫苗中抗原肽为具有如SEQ ID NO:1所示 的氨基酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加 一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。

值和SD值对某一物种而言为固定值，可在检测后保存，再次检测时可 不对阴性对照进行检测。

作为优选，包被具体为：将100μL含有10μg/mL抗原肽的包被缓冲液加 入酶标板上，4℃条件下放置过夜。

优选地，包被缓冲液的pH为9.6。

更优选地，包被缓冲液的溶剂为蒸馏水。

更优选的，包被缓冲液中Na₂CO₃的质量-体积浓度为1.59g/L，NaHCO₃的质量体积浓度为2.93g/L。

作为优选，第一洗涤采用洗涤缓冲液。

优选地，洗涤缓冲液洗涤缓冲液pH值为7.4。

更优选地，洗涤缓冲液的溶剂为蒸馏水。

更优选地，洗涤缓冲液中各组分的含量为：

作为优选，封闭具体为：在酶标板上加入样品稀释液，37℃条件下放置 不少于1小时。

优选地，样品稀释液为牛血清白蛋白与洗涤缓冲液的混合物。

更优选地，样品稀释液中，牛血清蛋白的含量为1g/L。

作为优选，待测样品为动物血清与样品稀释液的混合物。

优选地，待测样品中动物血清与样品稀释液的体积比为1:2。

作为优选，待测样品的添加量为，每孔50μL。

作为优选，孵育具体为：在室温条件下，放置1小时。

作为优选，第二洗涤采用洗涤缓冲液。

作为优选，二抗采用辣根过氧化物酶标记。

优选地，采用样品稀释液稀释二抗，制备稀释后的二抗。

更优选地，二抗与样品稀释液的体积比为1:10000。

最优选地，标记二抗具体为：取100μL稀释后的二抗加入酶标板，37℃ 条件下放置1小时。

作为优选，第三洗涤采用洗涤缓冲液。

作为优选地，显色具体为：在酶标板上加入底物缓冲液，放置5min后， 加入终止液。

优选地，底物缓冲液的pH值为5.0。

更优选地，底物缓冲液的溶剂的为水，其中各组分的含量为：

Na₂HPO₄   0.1028mol/L

柠檬酸    0.0486mol/L

更优选地，终止液采用浓度为2mol/L的H₂SO₄水溶液。

本发明提供了一种仙台病毒感染检测试剂盒，包括包被有本发明提供的 抗原肽的平板、洗涤缓冲液、样品稀释液、终止液和底物缓冲液。

其中，本发明提供的仙台病毒疫苗中抗原肽为具有如SEQ ID NO:1所示 的氨基酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加 一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。

优选的，包被有本发明提供的包被有本发明提供的抗原肽的平板的基质 为：玻片、酶标板、多肽芯片或蛋白芯片。

更优选地，包被有本发明提供的抗原肽的平板的基质为：多肽芯片。

优选地，洗涤缓冲液洗涤缓冲液pH值为7.4。

更优选地，洗涤缓冲液的溶剂为蒸馏水。

优选地，洗涤缓冲液中各组分的含量为：

优选地，样品稀释液为牛血清白蛋白与洗涤缓冲液的混合物。

更优选地，样品稀释液中，牛血清蛋白的含量为1g/L。

优选地，终止液为浓度为2mol/L的H₂SO₄水溶液。

优选地，底物缓冲液的pH值为5.0。

更优选地，底物缓冲液的溶剂的为水。

更优选地，底物缓冲液中各组分的含量为：

Na₂HPO₄   0.1028mol/L

柠檬酸    0.0486mol/L

作为优选，本发明提供的仙台病毒感染检测试剂盒的使用方法为：

步骤1：取样品稀释液稀释待测样品后加入包被有本发明提供的抗原肽的 平板中，经孵育、第四洗涤、标记二抗、第五洗涤后显色，获得受检溶液；

步骤2：取受检溶液，用酶标仪检测OD₄₅₀值，采用Cut off值法判断检 测结果；

Cut off值法判断的标准为：

受检溶液的OD₄₅₀值≥+3SD为阳性，

受检溶液的OD₄₅₀值≤+2SD为阴性，

+3SD≥受检溶液的OD₄₅₀的值≥+2SD为可疑，重新测受检溶液的 OD₄₅₀值，受检溶液的OD₄₅₀值小于+3SD则判为阴性；

其中，为所有阴性对照样品的OD₄₅₀平均值，SD为所有阴性样品OD₄₅₀的标准差，阴性对照样品与待测样品的检测方法一致。

值和SD值对某一物种而言为固定值，可在检测后保存，再次检测时可 不对阴性对照进行检测。

优选地，待测样品中动物血清与样品稀释液的体积比为1:2。

作为优选，待测样品的添加量为，每孔50μL。

作为优选，孵育具体为：在室温条件下，放置1小时。

作为优选，第二洗涤采用洗涤缓冲液。

作为优选，二抗采用辣根过氧化物酶标记。

优选地，采用样品稀释液稀释二抗，制备稀释后的二抗。

更优选地，二抗与样品稀释液的体积比为1:10000。

最优选地，标记二抗具体为：取100μL稀释后的二抗加入酶标板，37℃ 条件下放置1小时。

作为优选，第三洗涤采用洗涤缓冲液。

作为优选地，显色具体为：在酶标板上加入底物缓冲液，放置5min后， 加入终止液。

本发明提供了一种仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸 序列或在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或 多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。并提供了其在仙台病毒感染检测中的应 用。本发明采用蛋白杂交技术，筛选出仙台病毒的优势抗原，该优势抗原为 仙台病毒的NP（nucleocapsid protein）蛋白，仙台病毒的NP蛋白有524个氨 基酸残基。本发明根据优势抗原NP蛋白的氨基酸序列，采用overlapping方 式设计抗原多肽阵列并合成了抗原多肽阵列芯片，筛选出了仙台病毒特异性 强而分子量小的线性表位。由于本发明提供的仙台病毒抗原肽分子量较小， 降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，因此提高了多肽组合的特异性和 针对性，从而提高了实验动物微生物检测的准确性。本发明还提供了一种仙 台病毒疫苗，包括本发明提供的仙台病毒抗原肽及药学上可接受的辅料，由 于本发明提供的抗原肽是仙台病毒的优势抗原，所以在制备疫苗时，可减少 仙台病毒对动物的危害。通过对抗原肽与梯度稀释的阴性及阳性血清的结合 反应进行研究，结果表明：本发明提供的抗原肽与阳性血清具有良好的量效 关系，且本发明提供的抗原肽与阳性血清中仙台病毒的抗体可产生特异性的 结合。

附图说明

图1示仙台病毒抗原与大鼠仙台病毒阴性对照和阳性对照抗血清杂交电 泳图，其中，泳道N示仙台病毒抗原与大鼠仙台病毒阴性对照血清杂交电泳， 泳道P示仙台病毒抗原与大鼠仙台病毒阳性对照血清杂交电泳，箭头a示条 带分子量为70kDa，箭头b示条带分子量为57kDa；

图2示仙台病毒NP蛋白多肽阵列模式图；

图3示抗原多肽阵列与大鼠血清结合实验图，图3（a）示大鼠仙台病毒 阴性对照血清与仙台病毒NP蛋白多肽阵列反应后所得图像（源自成像仪分析 软件生成图像），图3（b）示大鼠仙台病毒阳性血清与仙台病毒NP蛋白多肽 阵列反应后所得图像，其中，1号框示抗原表位212，2号框示抗原表位229～ 232、3号框示抗原表位241～243，4号框示抗原表位258～259；

图4 天然抗原及筛选出的优势抗原肽分别与阴性血清和阳性血清的结合 实验图，其中，纵坐标为OD₄₅₀值，■示抗原与阳性血清结合的实验结果，□ 示抗原与阴性血清结合的实验结果，柱A示筛选出的优势抗原肽A分别与阴 性血清和阳性血清结合的实验结果，柱B示筛选出的优势抗原肽B分别与阴 性血清和阳性血清结合的实验结果，柱C示筛选出的优势抗原肽C分别与阴 性血清和阳性血清结合的实验结果，柱D示筛选出的优势抗原肽D分别与阴 性血清和阳性血清结合的实验结果，柱Sev示天然抗原分别与阴性血清和阳 性血清结合的实验结果；

图5示抗原肽C与梯度稀释的阳性血清和阴性对照血清的结合实验图， 其中，横坐标为稀释比例，纵坐标为OD₄₅₀值，曲线1示抗原肽C与梯度稀 释的阳性血清结合的实验结果，曲线2示抗原肽C与梯度稀释的阴性血清结 合的实验结果。

具体实施方式

本发明提供了提供一种仙台病毒抗原肽及其在仙台病毒感染检测中的应 用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要 指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它 们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了 描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方 法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供了一种仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸 序列。

本发明还提供了一种仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基 酸序列中取代、缺失或添加一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。

本发明提供的仙台病毒抗原肽的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基 酸序列的同源性大于85%。

本发明提供的抗原肽是仙台病毒的优势抗原，且分子量较小，因此降低 了与其他分子发生交叉反应的可能，提高了多肽组合的特异性和针对性，从 而提高了对仙台病毒感染检测的准确率。

本发明提供的抗原肽的筛选方法为：首先，采用蛋白杂交技术，筛选出 仙台病毒的优势抗原；然后，根据优势抗原的氨基酸序列，采用overlapping 方式设计抗原多肽阵列并合成了抗原多肽阵列芯片，筛选出了仙台病毒线性 表位。

本发明的筛选出的仙台病毒优势抗原是仙台病毒的NP（nucleocapsid  protein）蛋白。

设计抗原多肽阵列时以14～18个氨基酸残基为多肽长度，以2个氨基酸 位移来设计抗原多肽阵列。

抗原肽阵列的合成采用自动单点多肽合成仪。

筛选出的优势抗原肽表位位于NP蛋白的C端。

本发明提供的抗原肽是仙台病毒的优势抗原表位，且分子量较小，因此 降低了与其他分子发生交叉反应的可能，提高了多肽组合的特异性和针对性， 从而提高了对仙台病毒感染检测的准确率。

抗原肽的制备可采用生物学的方法或化学合成。

本发明提供了一种编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子，具有 如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

本发明还提供了一种仙台病毒疫苗，包括本发明提供的仙台病毒抗原肽 及药学上可接受的辅料。

本发明提供的仙台病毒疫苗中抗原肽为具有如SEQ ID NO:1所示的氨基 酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或 多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。

为方便使用，本发明提供给的仙台病毒疫苗的剂型为口服制剂或注射剂。

由于本发明提供的抗原肽是仙台病毒的优势抗原表位，所以在制备疫苗 时，可减少仙台病毒对动物的危害。

本发明提供的仙台病毒抗原肽在仙台病毒感染检测中的应用。

本发明提供的仙台病毒疫苗中抗原肽为具有如SEQ ID NO:1所示的氨基 酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或 多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。

用抗原的优势表位检测动物体是否感染该抗原的原理是：当动物体感染 抗原后，动物体就会产生针对该抗原的抗体，该抗体分布在动物的血清中， 通过检测血清中该抗体的存在与否，就能得知动物体是否感染抗原。动物体 产生的抗体一般是针对抗原的优势表位，即所产生的抗体能特异性的与抗原 的优势表位相结合。所以通过抗原优势表位检测血清中是否存在与其结合的 抗体，就能得知动物体是否感染该病毒。

本发明提供了一种非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法，包括以下步 骤：首先，将本发明提供的抗原肽包被到酶标板上，经第一洗涤后封闭，获 得封闭后的酶标板；然后，取待测样品加入封闭后的酶标板中，经孵育、第 二洗涤、标记二抗、第三洗涤后显色，获得受检溶液；然后，取受检溶液， 用酶标仪检测OD₄₅₀值，采用Cut off值法判断检测结果；

Cut off值法判断的标准为：

受检溶液的OD₄₅₀值≥+3SD为阳性，

受检溶液的OD₄₅₀值≤+2SD为阴性，

+3SD≥受检溶液的OD₄₅₀的值≥+2SD为可疑，重新测受检溶液的 OD₄₅₀值，受检溶液的OD₄₅₀值小于+3SD则判为阴性；

其中，为所有阴性对照样品的OD₄₅₀平均值，SD为所有阴性样品OD₄₅₀的标准差；阴性对照样品与待测样品的检测方法一致；

其中，本发明提供的仙台病毒疫苗中抗原肽为具有如SEQ ID NO:1所示 的氨基酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加 一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。

值和SD值对某一物种而言为固定值，可在检测后保存，再次检测时可 不对阴性对照进行检测。

本发明提供的非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法中，包被具体为： 将100 μL含有10 μg/mL抗原肽的包被缓冲液加入酶标板上，4℃条件下放置 过夜。

包被采用的包被缓冲液的pH为9.6。

包被缓冲液的溶剂为蒸馏水。

包被缓冲液中Na₂CO₃的质量-体积浓度为1.59 g/L，NaHCO₃的质量体积 浓度为2.93g/L。

本发明提供的非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法中，第一洗涤采用 洗涤缓冲液。

洗涤缓冲液洗涤缓冲液pH值为7.4。

洗涤缓冲液的溶剂为蒸馏水。

洗涤缓冲液中各组分的含量为：

本发明提供的非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法中，封闭具体为： 在酶标板上加入样品稀释液，37℃条件下放置不少于1小时。

样品稀释液为牛血清白蛋白与洗涤缓冲液的混合物。

样品稀释液中，牛血清蛋白的含量为1g/L。

本发明提供的非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法中，待测样品为动 物血清与样品稀释液的混合物。

待测样品中动物血清与样品稀释液的体积比为1:2。

待测样品的添加量为每孔50μL。

本发明提供的非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法中，孵育具体为： 在室温条件下，放置1小时。

本发明提供的非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法中，第二洗涤采用 洗涤缓冲液。

本发明提供的非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法中，二抗采用辣根 过氧化物酶标记。

采用样品稀释液稀释二抗，制备稀释后的二抗。

二抗与样品稀释液的体积比为1:10000。

标记二抗具体为：取100μL稀释后的二抗加入酶标板，37℃条件下放置 1小时。

本发明提供的非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法中，第三洗涤采用 洗涤缓冲液。

本发明提供的非诊断目的的检测仙台病毒感染的方法中，显色具体为： 在酶标板上加入底物缓冲液，放置5min后，加入终止液。

底物缓冲液的pH值为5.0。

底物缓冲液的溶剂的为水，其中各组分的含量为：

Na₂HPO₄  0.1028mol/L

柠檬酸   0.0486mol/L

终止液采用浓度为2mol/L的H₂SO₄水溶液。

本发明提供了一种仙台病毒感染检测试剂盒，包括包被有本发明提供的 抗原肽的平板、洗涤缓冲液、样品稀释液、终止液和底物缓冲液。

其中，本发明提供的仙台病毒疫苗中抗原肽为具有如SEQ ID NO:1所示 的氨基酸序列或具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加 一个或多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。

包被有本发明提供的包被有本发明提供的抗原肽的平板的基质为：玻片、 酶标板、多肽芯片或蛋白芯片。

包被有本发明提供的抗原肽的平板的基质为：多肽芯片。

洗涤缓冲液洗涤缓冲液pH值为7.4。

洗涤缓冲液的溶剂为蒸馏水。

洗涤缓冲液中各组分的含量为：

样品稀释液为牛血清白蛋白与洗涤缓冲液的混合物。

样品稀释液中，牛血清蛋白的含量为1g/L。

终止液为浓度为2mol/L的H₂SO₄水溶液。

底物缓冲液的pH值为5.0。

底物缓冲液的溶剂的为水。

底物缓冲液中各组分的含量为：

Na₂HPO₄  0.1028mol/L

柠檬酸   0.0486mol/L

本发明提供的仙台病毒感染检测试剂盒的使用方法为：首先，取样品稀 释液稀释待测样品后加入包被有本发明提供的抗原肽的平板中，经孵育、第 四洗涤、标记二抗、第五洗涤后显色，获得受检溶液；然后，取受检溶液， 用酶标仪检测OD₄₅₀值，采用Cut off值法判断检测结果；

Cut off值法判断的标准为：

受检溶液的OD₄₅₀值≥+3SD为阳性，

受检溶液的OD₄₅₀值≤+2SD为阴性，

+3SD≥受检溶液的OD₄₅₀的值≥+2SD为可疑，重新测受检溶液的 OD₄₅₀值，受检溶液的OD₄₅₀值小于+3SD则判为阴性；

其中，为所有阴性对照样品的OD₄₅₀平均值，SD为所有阴性样品OD₄₅₀的标准差；阴性对照样品与待测样品的检测方法一致。

值和SD值对某一物种而言为固定值，可在检测后保存，再次检测时可 不对阴性对照进行检测。

本发明提供的仙台病毒感染检测试剂盒的使用方法中，待测样品中动物 血清与样品稀释液的体积比为1:2。

待测样品的添加量为，每孔50μL。

孵育具体为：在室温条件下，放置1小时。

第二洗涤采用洗涤缓冲液。

二抗采用辣根过氧化物酶标记。

采用样品稀释液稀释二抗，制备稀释后的二抗。

二抗与样品稀释液的体积比为1:10000。

标记二抗具体为：取100μL稀释后的二抗加入酶标板，37℃条件下放置 1小时。

第三洗涤采用洗涤缓冲液。

显色具体为：在酶标板上加入底物缓冲液，放置5min后，加入终止液。

本发明提供了一种仙台病毒抗原肽，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸 序列或在具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中取代、缺失或添加一个或 多个氨基酸残基得到的氨基酸序列。并提供了其在仙台病毒感染检测中的应 用。本发明采用蛋白杂交技术，筛选出仙台病毒的优势抗原，该优势抗原为 仙台病毒的NP（nucleocapsid protein）蛋白，仙台病毒的NP蛋白有524个氨 基酸残基。本发明根据优势抗原NP蛋白的氨基酸序列，采用overlapping方 式设计抗原多肽阵列并合成了抗原多肽阵列芯片，筛选出了仙台病毒特异性 强而分子量小的线性表位。由于本发明提供的仙台病毒抗原肽分子量较小， 降低了与其他分子发生交叉反应的可能性，因此提高了多肽组合的特异性和 针对性，从而提高了实验动物微生物检测的准确性。本发明还提供了一种仙 台病毒疫苗，包括本发明提供的仙台病毒抗原肽及药学上可接受的辅料，由 于本发明提供的抗原肽是仙台病毒的优势抗原，所以在制备疫苗时，可减少 仙台病毒对动物的危害。通过对抗原肽与梯度稀释的阴性及阳性血清的结合 反应进行研究，结果表明：本发明提供的抗原肽与阳性血清具有良好的量效 关系，且本发明提供的抗原肽与阳性血清中仙台病毒的抗体可产生特异性的 结合。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1仙台病毒的优势抗原蛋白的确定

首先，配制SDS-PAGE电泳所用溶液：

1.0mol/L Tris（pH6.8）溶液：取12g Tris溶于80mL蒸馏水，调pH值 至6.8，用蒸馏水定容至100mL；

1.5mol/L Tris（pH8.8）溶液：取18g Tris溶于80mL蒸馏水，调pH值 至8.8，用蒸馏水定容至100mL；

10%SDS溶液：取10g SDS溶于80mL蒸馏水，调节pH值至7.2，用蒸 馏水定容至100mL；

10%过硫酸铵溶液：取1g过硫酸胺溶于10mL蒸馏水；

5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：Tris15.1g，甘氨酸94g，完全溶于800mL蒸 馏水后加入SDS5g，定容至1L，使用前稀释至1×；

30%丙烯酰氨贮存液：取1g亚甲基双丙烯酰胺溶于80mL水，加热溶解。 然后加入29g丙烯酰胺搅拌溶解，用蒸馏水定容至100mL；

5×上样缓冲液：取1mol/L Tris-Cl（pH6.8）溶液1.25mL，0.5g SDS， 25mg溴酚蓝，2.5mL甘油，加入去离子水溶解定容至5mL，使用前加250μL β-巯基乙醇或2.5mL1mol/L DTT；

确定仙台病毒的优势抗原蛋白的方法为：

取仙台病毒抗原80μL与20μL的上样缓冲液混匀，于沸水中煮5min ～10min后上样于聚丙烯酰胺凝胶进行SDS-PAGE电泳，样品在基层胶时采用 60V电压，到分离胶时采用120V电压。待上样缓冲液跑出后，根据Marker 将目的条带附近的胶切下。按照由黑到白（转印夹）由胶到膜（硝酸纤维素 膜）的顺序放置好样品，60V电压下转印3h。将硝酸纤维素膜用5%的脱脂奶 粉室温封闭1h。分别取正常大鼠血清和感染仙台病毒的大鼠血清用5%的脱脂 奶粉以1：500稀释，于4℃孵育过夜。第二天将膜用TBS-T溶液洗三次，每 次10min。取二抗（羊抗鼠）IgG-HRP，用5%的脱脂奶粉以1：2000稀释， 室温与膜孵育1h。用TBS-T溶液洗膜三次，每次10min。加增强发光液在暗 室显影。

正常大鼠血清和感染仙台病毒的大鼠血清与仙台病毒抗原杂交结果如图 1所示。箭头a指示条带分子量为70kDa，箭头b指示条带分子量为57kDa。 表明只有与感染仙台病毒的大鼠血清孵育的电泳泳道才有杂交显影条带，而 且箭头b所指示分子量为57kDa的条带含量最高。由于仙台病毒NP （nucleocapsid protein）蛋白的分子量约为57kDa，而且研究表明在仙台病毒 感染过程中，动物体产生针对NP蛋白的抗体的滴度非常高，所以箭头b所指 示的条带为仙台病毒NP蛋白。上述实验结果显示仙台病毒的优势抗原为仙台 病毒NP蛋白。

实施例2仙台病毒优势抗原多肽表位的筛选

根据NP蛋白的524个氨基酸的蛋白序列，用多肽阵列技术制作了2张多 肽阵列。阵列芯片以overlapping方式设计，以14个氨基酸多肽长度，2个氨 基酸位移来计算，每张多肽阵列上排列264条多肽，两张阵列芯片共528条 多肽。

配置所需溶液：

浓度为0.25mol/L的Fmoc-氨基酸溶液；

封闭液I为含有2%(v/v)乙酸酐的二甲基甲酰胺溶液；

封闭液II为2%(v/v)的乙酸酐及2%(v/v)的N，N-二异丙基乙胺的二甲 基甲酰胺溶液；

Fmoc-移除液为含有20%(v/v)哌啶的二甲基甲酰胺溶液。

首先，合成多肽阵列：

把活化的PEG-纤维素膜放置在Autos potter上，根据程序自动添加0.1μL 的Fmoc-氨基酸溶液到活化的PEG-纤维素膜上的特定位置与膜进行反应，反 应20分钟，再重复一遍该点膜过程；把PEG-纤维素膜先浸入封闭液I中反应 5分钟在浸入封闭液II中反应20分钟，进行侧链封闭，然后用DMF清洗4 次。然后，把PEG-纤维素膜加入Fmoc-移除液中反应5min，重复1次，以移 除氨基端的Fmoc保护基团；去保护基团后，用DMF清洗3次，每次30秒 钟，而后再用乙醇干燥；重复以上步骤，直至各个多肽全部合成。全部合成 后，先用TFA cocktail去除侧链保护基团，再用CH₂Cl₂清洗4次，而后用乙 醇干燥。产物于-20℃保存，用于下一步免疫反应实验。

根据实验设计，多肽自动合成仪合成多肽阵列，多肽阵列模式图如图2 所示，每张多肽阵列横向为11个多肽点，纵向为24个多肽点，图中对多肽 芯片上每个多肽点进行了位置编号标注，每个编号对应相应的多肽序列。以 下所有多肽阵列实验结果分析中的阳性表位数字与上述标注数字及多肽序列 编号一一对应。

将两张多肽阵列芯片与两种实验大鼠血清，阴性对照组大鼠血清1份， 阳性组大鼠血清1份，分别进行了免疫反应检测，包括以下步骤：

封闭：用含有质量分数为4%脱脂牛奶和质量分数为5%蔗糖的TBS-T缓 冲液，室温反应4小时；一抗孵育：取大鼠血清按体积比为1：500稀释；与 多肽阵列反应，4℃下过夜；洗膜：用TBS-T缓冲液漂洗3次，每次10分钟； 二抗孵育：二抗（羊抗鼠）IgG-HRP，用封闭液按1：2000的体积比稀释，室 温下封闭2小时；洗膜：用TBS-T缓冲液漂洗3次，每次10分钟；显色：加 入ECL发光试剂，数字成像。

多肽阵列与大鼠血清结合结果如图3所示，其中，图3（a）为对照血清 与阵列反应后所得图像（源自成像仪分析软件生成图像），图3（b）为阳性血 清与阵列反应后所得图像。从多肽阵列检测图的整体对比来看，血清中阳性 反应点主要集中于芯片的后1/3部位，表明仙台病毒NP蛋白的主要抗原表位 主要集中在该蛋白的C端。同时可以观察到具有明显差别的主要四个抗原表 位区域，分别用1、2、3和4号框框出。通过对上述两图中显色点的比较， 阴性对照血清中针对229～232（2号框）、241～243（3号框）以及258～259 （4号框）抗原表位几乎没有反应，而阳性血清对上述表位反应较强烈，且为 连续多个多肽点显色，表明上述表位能够激发较强的免疫反应，可能是主要 的抗原表位。1号框的多肽表位阳性血清反应强度明显高于阴性血清，但其未 形成连续的差异显色位点，判断其可能为抗原表位，还需进一步验证。针对 其他表位的抗体反应，在两组中不存在明显的差异。针对出现的非特异性显 色点，可能是由于多肽对抗体识别位点的暴露，以及血清中抗体的交叉反应 造成。由于阴性对照血清中针对229～232（2号框）抗原表位几乎没有反应， 而阳性血清对上述表位反应较强烈，且为连续多个多肽点显色，表明上述表 位能够激发较强的免疫反应，所以本发明选取2号框中的4条多肽做进一步 的研究。

实施例3仙台病毒抗原多肽的制备及功能鉴定

采用化学合成的方法制备本发明实施例2筛选出的4条多肽，分别命名 为抗原A、抗原B、抗原C、抗原D，并以1mg/mL浓度包被至ELISA反应 板中，分别与仙台病毒阳性血清和仙台病毒阴性血清做反应，结果如图4所 示。结果表明与天然抗原SeV（仙台病毒）相比，4条肽免疫原性弱。但抗原 C仍表现出较好的免疫原性。抗原C的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

选择抗原C包被ELISA平板，并将阴性及阳性血清按以下稀释度稀释： 1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280、1:2560、1:5120、1:10240、1:20480， 并将稀释的血清与抗原肽C做结合实验，实验结果结果如图5所示，结果显 示本发明所筛选的抗原肽C与倍比稀释的免疫血清显示了较好的量效关系。

实施例4仙台病毒感染的检测方法准确度检测

采用本发明实施例提供的具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的抗原肽C 通过ELISA方法对10只感染仙台病毒的大鼠进行检测，另取5只没有感染仙 台病毒的大鼠作为阴性对照，测试本发明提供的仙台病毒感染检测方法的准 确度。

首先，配制ELISA实验中常规试剂：

包被缓冲液：取1.59克Na₂CO₃和2.93克NaHCO₃溶解于蒸馏水，调节 pH值为9.6，加蒸馏水至1000mL；

洗涤缓冲液：取0.2克KH₂PO₄、2.9克Na₂HPO₄·12H₂O、8.0克NaCl、 0.2克KCl、0.05%的Tween-20水溶液0.5mL，溶解与水，调节pH值为7.4， 用蒸馏水定容至1000mL；

样品稀释液：取0.1克牛血清白蛋白（BSA）溶解于100mL配制好的洗 涤缓冲液；

终止液：取蒸馏水178.3mL，逐滴加入21.7mL浓硫酸（体积分数为98%）；

底物缓冲液：取浓度为28.4克/L的Na₂HPO₄25.7mL、浓度为19.2克/L 的柠檬酸24.3mL，蒸馏水50mL混合均匀调节pH值至5.0；

检测仙台病毒抗体的ELISA实验步骤，如下：

将本发明实施例提供的具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的抗原肽C包 被到ELISA板上，每孔100μL，抗原肽C的浓度为10μg/mL，4℃过夜。洗 涤液清洗酶标板3次，37℃下用样品稀释液封闭酶标板1h以上。准备待测样 品，抽取待测大鼠的静脉血，离心收集血清。用样品稀释液按1:2的比例稀释 血清，取稀释后的血清加入酶标板中，每孔50μL，室温孵育1h。每个样品 包被2个孔。洗涤液清洗酶标板3次，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，二 抗按1：10000的比例稀释，分别加入孔中，每孔100μL，37℃孵育1h，再用 洗涤液清洗3次。加辣根过氧化物酶底物缓冲液100μL，显色5min后，加入 终止液100μL，终止显色。用酶标仪检测OD₄₅₀的值，采用Cut off值法判断 检测结果；

Cut off值法判断的标准为：

受检溶液的OD₄₅₀值≥+3SD为阳性，

受检溶液的OD₄₅₀值≤+2SD为阴性，

+3SD≥受检溶液的OD₄₅₀的值≥+2SD为可疑，重新测受检溶液的 OD₄₅₀值，受检溶液的OD₄₅₀值小于+3SD则判为阴性；

其中，为所有阴性对照样品的OD₄₅₀平均值，SD为所有阴性样品OD₄₅₀的标准差；阴性对照样品与待测样品的检测方法一致。

采用本发明提供的方法对大鼠感染仙台病毒情况进行鉴定，结果如表1 所示：

表1 本实施例对大鼠感染仙台病毒鉴定结果

实验结果表明，采用本发明提供的方法对大鼠感染仙台病毒情况进行鉴 定，准确度可达到100%，说明本发明提供的检测方法，是一种快速有效鉴定 仙台病毒感染的方法，其鉴定结果准确可靠。

实施例5 仙台病毒感染的检测方法准确度检测

取本发明提供的与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源性大于 85%的抗原肽通过ELISA方法对10只感染仙台病毒的大鼠进行检测，另取5 只没有感染仙台病毒的大鼠作为阴性对照，测试本发明提供的仙台病毒感染 检测方法的准确度。其中，与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源 性大于85%的仙台病毒抗原肽具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

首先，配制ELISA实验中常规试剂：

包被缓冲液：取1.59gNa₂CO₃和2.93gNaHCO₃溶解于蒸馏水，调节pH值 为9.6，加蒸馏水至1000mL；

洗涤缓冲液：取0.2gKH₂PO₄、2.9gNa₂HPO₄·12H₂O、8.0gNaCl、0.2gKCl、 0.05%的Tween-20水溶液0.5mL，溶解与水，调节pH值为7.4，用蒸馏水定 容至1000mL；

样品稀释液：取0.1g牛血清白蛋白（BSA）溶解于100mL配制好的洗涤 缓冲液；

终止液：取蒸馏水178.3 mL，逐滴加入21.7 mL浓硫酸（体积分数为98%）；

底物缓冲液：取浓度为28.4g/L的Na₂HPO₄ 25.7 mL、浓度为19.2 g/L的 柠檬酸24.3mL，蒸馏水50 mL混合均匀调节pH值至5.0；

检测仙台病毒抗体的ELISA实验步骤，如下：

将本发明提供的与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源性大于 85%的抗原肽包被到ELISA板上，每孔100μL，其的浓度为10μg/mL，4℃ 过夜。洗涤液清洗酶标板3次，37℃下用样品稀释液封闭酶标板1h以上。准 备待测样品，抽取待测大鼠的静脉血，离心收集血清。用样品稀释液按1:2的 比例稀释血清，取稀释后的血清加入酶标板中，每孔50 μL，室温孵育1h。 每个样品包被2个孔。洗涤液清洗酶标板3次，加入辣根过氧化物酶标记的 二抗，二抗按1：10000的比例稀释，分别加入孔中，每孔100 μL，37℃孵育 1h，再用洗涤液清洗3次。加辣根过氧化物酶底物缓冲液100 μL，显色5min 后，加入终止液100 μL，终止显色。用酶标仪检测OD₄₅₀的值，采用Cut off 值法判断检测结果；

Cut off值法判断的标准为：

受检溶液的OD₄₅₀值≥+3SD为阳性，

受检溶液的OD₄₅₀值≤+2SD为阴性，

+3SD≥受检溶液的OD₄₅₀的值≥+2SD为可疑，重新测受检溶液的 OD₄₅₀值，受检溶液的OD₄₅₀值小于+3SD则判为阴性；

其中，为所有阴性对照样品的OD₄₅₀平均值，SD为所有阴性样品OD₄₅₀的标准差；阴性对照样品与待测样品的检测方法一致。

采用本发明提供的方法对大鼠感染仙台病毒情况进行鉴定，结果如表2 所示：

表2 本实施例对大鼠感染仙台病毒鉴定结果

实验结果表明，采用本发明提供的方法对大鼠感染仙台病毒情况进行鉴 定，准确度可达到100%，说明本发明提供的检测方法，是一种快速有效鉴定 仙台病毒感染的方法，其鉴定结果准确可靠。

实施例6仙台病毒疫苗（糖丸剂）的制备方法

取具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的仙台病毒抗原肽添加药学上 可接受的辅料，采用常规方法制成糖丸剂。

实施例7仙台病毒疫苗（口服液剂）的制备方法

取具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的仙台病毒抗原肽添加药学上 可接受的辅料，采用常规方法制成口服液剂。

实施例8 仙台病毒疫苗（糖浆剂）的制备方法

取具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的仙台病毒抗原肽添加药学上 可接受的辅料，采用常规方法制成糖浆剂。

实施例9仙台病毒疫苗（胶囊剂）的制备方法

取与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源性大于85%的仙台病 毒抗原肽添加药学上可接受的辅料，采用常规方法制成胶囊剂。

其中，与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源性大于85%的仙 台病毒抗原肽具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

实施例10仙台病毒疫苗（粉针剂）的制备方法

取与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源性大于85%的仙台病 毒抗原肽添加药学上可接受的辅料，采用常规方法制成粉针剂。

其中，与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源性大于85%的仙 台病毒抗原肽具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

实施例11仙台病毒疫苗（注射液）的制备方法

取与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源性大于85%的仙台病 毒抗原肽添加药学上可接受的辅料，采用常规方法制成注射液。

其中，与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源性大于85%的仙 台病毒抗原肽具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

实施例12仙台病毒感染检测试剂盒的制备方法

取具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的仙台病毒抗原肽采用常规方 法，包被在酶标板上。

配制溶液（10份量）：

洗涤缓冲液：取0.2gKH₂PO₄、2.9gNa₂HPO₄·12H₂O、8.0gNaCl、0.2gKCl、 0.05%的Tween-20水溶液0.5mL，溶解与水，调节pH值为7.4，用蒸馏水定 容至1000mL；

样品稀释液：取0.1g牛血清白蛋白（BSA）溶解于100mL配制好的洗涤 缓冲液；

终止液：取蒸馏水178.3mL，逐滴加入21.7mL浓硫酸（体积分数为98%）；

底物缓冲液：取浓度为28.4g/L的Na₂HPO₄25.7mL、浓度为19.2g/L的柠 檬酸24.3mL，蒸馏水50mL混合均匀调节pH值至5.0；

将包被有具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的仙台病毒抗原肽的酶 标板、洗涤缓冲液、样品稀释液、终止液盒底物缓冲液分装包装，即得。

实施例13仙台病毒感染检测试剂盒的制备方法

取与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列同源性大于85%的仙台病毒 抗原肽采用常规方法，包被在酶标板上。其中，与具有如SEQ ID NO:1所示 的氨基酸序列的同源性大于85%的仙台病毒抗原肽具有如SEQ ID NO:3所示 的氨基酸序列。

配制溶液（10份量）：

洗涤缓冲液：取0.2g KH₂PO₄、2.9g Na₂HPO₄·12H₂O、8.0g NaCl、0.2g KCl、 0.05%的Tween-20水溶液0.5mL，溶解与水，调节pH值为7.4，用蒸馏水定 容至1000mL；

样品稀释液：取0.1g牛血清白蛋白（BSA）溶解于100mL配制好的洗涤 缓冲液；

终止液：取蒸馏水178.3mL，逐滴加入21.7mL浓硫酸（体积分数为98%）；

底物缓冲液：取浓度为28.4g/L的Na₂HPO₄25.7mL、浓度为19.2g/L的柠 檬酸24.3mL，蒸馏水50mL混合均匀调节pH值至5.0；

将包被有与具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列同源性大于85%的仙 台病毒抗原肽的酶标板、洗涤缓冲液、样品稀释液、终止液盒底物缓冲液分 装包装，即得。

实施例14仙台病毒感染检测试剂盒的使用

采用本发明实施例12～13任一项提供的仙台病毒感染检测试剂盒对10只 感染仙台病毒的大鼠进行检测，另取5只没有感染仙台病毒的大鼠作为阴性 对照，测试本发明提供的仙台病毒感染检测方法的准确度。

抽取待测大鼠的静脉血，离心收集血清。用本发明提供的试剂盒中的样 品稀释液按1:2的比例稀释血清，取稀释后的血清加入本发明提供的试剂盒中 的酶标板中，每孔50μL，室温孵育1h。每个样品包被2个孔。取本发明提供 的试剂盒中的洗涤液清洗酶标板3次，加入本发明提供的试剂盒中的辣根过 氧化物酶标记的二抗，二抗按1：10000的比例稀释，分别加入孔中，每孔100 μL，37℃孵育1h，再用本发明提供的试剂盒中的洗涤液清洗3次。加本发明 提供的试剂盒中的辣根过氧化物酶底物缓冲液100μL，显色5min后，加入 本发明提供的试剂盒中的终止液100μL，终止显色。用酶标仪检测OD₄₅₀的 值，采用Cut off值法判断检测结果；

Cut off值法判断的标准为：

受检溶液的OD₄₅₀值≥+3SD为阳性，

受检溶液的OD₄₅₀值≤+2SD为阴性，

+3SD≥受检溶液的OD₄₅₀的值≥+2SD为可疑，重新测受检溶液的 OD₄₅₀值，受检溶液的OD₄₅₀值小于+3SD则判为阴性；

其中，为所有阴性对照样品的OD₄₅₀平均值，SD为所有阴性样品OD₄₅₀的标准差；阴性对照样品与待测样品的检测方法一致。

采用本发明实施例12提供的仙台病毒感染检测试剂盒对大鼠感染仙台病 毒情况进行鉴定，结果如表3所示：

表3采用本发明提供的仙台病毒感染检测试剂盒对大鼠感染仙台病毒鉴 定结果

实验结果表明，采用本发明提供的试剂盒对大鼠感染仙台病毒情况进行 鉴定，准确度可达到100%，说明本发明提供的仙台病毒感染检测试剂盒可快 速有效鉴定的仙台病毒感染情况，其鉴定结果准确可靠。

本发明实施例13提供的仙台病毒感染检测试剂盒对大鼠感染仙台病毒的 检测结果与此相似，说明本发明提供给的试剂盒皆可快速有效的对动物仙台 病毒的感染进行鉴定。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普 通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润 饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。