一种治疗外阴阴道念珠菌病的药物组合物

摘要

本发明公开了一种治疗外阴阴道念珠菌病的药物组合物，包括重量百分含量为0.02%～0.5%的司来普伐肽或其药学上可接受的盐或酯，以及药学上可接受的赋形剂和/或载体。本发明还提供了一种司来普伐肽或其可药用盐或酯在制备用于治疗外阴阴道念珠菌病药物中的用途。司来普伐肽在体内外均能有效抑制白色念珠菌的活性，用于外阴阴道局部给药，能有效治疗外阴阴道念珠菌病病症，无副作用，具有广阔的应用前景。

说明书

技术领域

本发明涉及制药学领域，特别涉及一种治疗外阴阴道念珠菌病的药物组合物。

背景技术

外阴阴道念珠菌病（Vulvovaginal candidiasis，VVC）是念珠菌侵犯外阴和/或阴道黏膜细胞所导致的外阴、阴道炎症。它是仅次于细菌性阴道炎的常见阴道炎，以往称为霉菌性阴道炎、念珠菌性阴道炎等，其病原为真菌中的酵母菌，其中以白色念珠菌（Candida albicans）为主，占80%～90%，非白色念珠菌如光滑念珠菌（C.torulopsisglabrata）、热带念珠菌（C.tropicalis）、近平滑念珠菌（C.parapsilosis）等占少数。该病表现出来的症状比较严重，发病率高且治疗后极易复发。据统计，有75％的妇女在她们的一生中至少会感染一次VVC，有40％～50％的妇女甚至会感染两次或更多，约5％的妇女诊断为复发性或慢性VVC。每年医生能遇到5,000,000～10,000,000此类病人。某些因素能使妇女患VVC的几率增加，如孕期、糖尿病以及使用一些常见的抗菌药和避孕药。首次确诊的VVC患者进行规范治疗，对减少其复发有极其重要的作用，但目前尚缺乏高效、低毒的治疗药物和方法。

80％～90％的VVC患者使用咪唑类药物治疗，它可以缓解症状并防止炎症的并发，但约有7％的病人伴有阴道瘙痒、灼烧和刺激等副作用，大多属局部过敏反应，这些副作用可引起红肿、肥大、风疹和外阴部裂伤，且有一些罕见的系统影响，包括尿频、抽筋、痛经、感觉异常、头痛、发热和畏寒；酮康唑治疗VVC，给病人带来潜在的系统毒性。氟康唑、伊曲康唑等三唑类药物是临床上治疗念珠菌病的常用药物。但是，此类药物的长期使用导致耐药株广泛出现。41个国家多中心研究发现，白色念珠菌对氟康唑的耐药株已从2000年的0.9%上升到了2007年的1.4%。Wroblewska等从临床上分离了851株白色念珠菌，其中37.2%对氟康唑耐药、47.6%对伊曲康唑耐药。白色念珠菌对唑类药物的耐药已经成为临床棘手的问题。

唑类抗真菌药可能会杀死有机体，但对于一些白色念珠菌及非白色念珠菌属感染处理效果并不好，临床失败的可能性较大，像氟康唑这样的药物，对于治疗和有效抑制白色念珠菌和白色念珠菌引起的阴道炎症效果不太明显。因此，寻求一种针对耐药性白色念珠菌种的抗菌新药对于VVC的治疗具有重要的临床意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题为提供一种治疗外阴阴道念珠菌病的药物组合物。

具体地，本发明所提供的治疗外阴阴道念珠菌病的药物组合物，包括式I所示化合物或其药学上可接受的盐或酯，以及药学上可接受的赋形剂和/或载体；所述式I化合物或其药学上可接受的盐或酯在药物组合物中的重量百分含量为0.02%～0.5%；

式I。

上述式I所示化合物又称司来普伐肽，其化学名称为：(乙酰基-半胱氨酸-赖氨酸-脯氨酸-缬氨酸-氨基)₂，为两条具有生物活性的短肽链通过二硫键连成的二聚体，是一种抗菌双肽。

优选地，所述式I化合物或其药学上可接受的盐或酯在药物组合物中的重量百分含量为0.05%～0.1%。

优选地，所述药物组合物的每个制剂单位中含式I所示化合物或其药学上可接受的盐或酯的量为1～5mg。

本发明还提供了一种上述药物组合物的栓剂，100重量份的制剂中包括0.05重量份的式I化合物、15重量份的明胶、60重量份的甘油、12.5重量份的聚乙二醇400和0.05重量份的羟苯乙酯，所述制剂的pH值为4.3±0.1。

本发明还提供了式I所示化合物或其药学上可接受的盐或酯在制备用于治疗外阴阴道念珠菌病药物中的应用。发明人通过体外抑菌试验、大鼠白色念珠菌性阴道炎模型试验以及随机对照临床试验验证了式I所示化合物对于外阴阴道念珠菌病的治疗作用，结果显示：式I化合物能明显降低白色念珠菌形成菌落的能力，能有效抑制白色念珠菌在体外生长；式I化合物对于大鼠白色念珠菌性阴道炎有显著的抗菌作用，且具有较好的组织保护作用；随机对照临床试验结果显示，包含式I化合物的阴道栓可有效杀灭白色念珠菌，缓解外阴阴道念珠菌病的临床症状且无副作用。

上述应用中，所述药物为局部用药制剂。

具体地，所述药物为栓剂、凝胶剂、软膏剂、片剂、胶囊剂或喷雾剂。

本发明发现，式I化合物在体内外均能有效抑制白色念珠菌的活性，用于外阴阴道局部给药，能有效治疗外阴阴道念珠菌病的病症，无副作用，具有较好的临床应用前景。

具体实施方式

本发明公开了一种药物组合物，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1 本发明药物组合物的栓剂制备

（1）100枚本发明药物组合物的阴道栓处方：

成分用量司来普伐肽0.20g

明胶60g甘油240g聚乙二醇40050g羟苯乙酯0.20gNaOH调pH至4.3±0.1纯化水约50ml，加至400g

（2）制备过程

取处方量明胶加入适量纯化水使浸润膨胀，加入甘油、聚乙二醇400和羟苯乙酯，搅拌均匀；取处方量的司来普伐肽，加入适量纯化水溶解配制成司来普伐肽溶液，将该溶液加入前述基质，充分搅拌5分钟混匀；滴加1mol/LNaOH溶液，边加边搅拌，调节pH至4.3±0.1。补足纯化水至处方量，搅拌至少5分钟。混匀后置于恒温箱中，70℃恒温脱泡2小时，取出后灌注于事先涂有液状石蜡的阴道栓模具中，待凝固后，脱模，包装，即得。共制备100枚司来普伐肽阴道栓，每枚重4g，每枚含司来普伐肽2mg。

实施例2 司来普伐肽的体外抑菌试验

（1）试验目的

考察不同浓度的司来普伐肽对白色念珠菌生长的抑制程度。

（2）试验方法

挑取菌株至100ml真菌培养基中培养24小时；移取0.5ml菌液至液体培养基中，分别加入四种浓度（10^-8、10^-7、10^-6、10^-5mol/L，相当于0.01、0.1、1.0、10.0mg/ml）的司来普伐肽溶液1.0ml，另一份样品加入菌液培养基作为空白对照；培养2小时，培养温度为28℃。将培养2小时后的菌液用0.9％生理盐水稀释至适宜的浓度；取稀释液1.0ml涂布在琼脂平板上，观察菌落数，计算抑菌率。

（3）试验结果

如表1所示。

表1、不同浓度司来普伐肽的体外抑菌率

司来普伐肽浓度10^-5mol/L10^-6mol/L10^-7mol/L10^-8mol/L

抑菌率89.6%78.5%56.8%20.0%

表1结果表明，司来普伐肽能明显降低白色念珠菌形成菌落的能力，能有效地抑制白色念珠菌在体外生长，并且随着司来普伐肽浓度的增高，其抑菌能力增强。

实施例3 司来普伐肽治疗大鼠白色念珠菌性阴道炎的药效学试验

（1）试验目的

研究司来普伐肽对大鼠白念珠菌性阴道炎的治疗作用。

（2）试验方法

A、大鼠白色念珠菌性阴道炎模型建造：

i.造模大鼠双侧卵巢切除：取体重80～100g性成熟未交配雌性健康Wistar大鼠若干，7%水合氯醛腹腔麻醉（0.5ml/100g），无菌条件下摘除双侧卵巢。术后肌肉注射青霉素10万U/只，每天一次，连续3天，防治感染。

ii.制造假动情期，造成免疫功能低下：术后第7天开始灌胃给予戊酸雌二醇，每天800μg/100g，连续4天。

iii.感染过程：白念菌细胞（临床分离阴道病菌株SA-40）用MH肉汤培养基以200rpm速度振摇，30℃培养5小时。生长数目用紫外分光光度计检测。在对动物接种前，用生理盐水稀释至4×10⁷个/100μl，50μl/只接种。造模大鼠取头朝下位，将菌液注入阴道内，原位停留1～2min，防止菌液溢出。感染后造模动物隔日灌胃给予戊酸雌二醇（1200μg/100g）一次，以保持假动情期和全身免疫功能低下状态，增加白色念球菌在阴道内的易感性。

感染4天后（手术后第15天），可见造模大鼠外阴红肿（不一定），伴少量白色分泌物，用无菌棉签蘸取分泌物，涂于沙氏培养基表面，30℃培养24小时，肉眼观察可见大小不等的白色菌落，分泌物镜检可见假菌丝和成群孢子，所取大鼠全部呈阳性，造模成功。

B、给药治疗：

12只白色念珠菌性阴道炎大鼠分为三组：阳性对照（达克宁软膏；提供单位：先声药店；规格：15mg/20g/管）组4只，司来普伐肽凝胶（按本领域常规方法自制，司来普伐肽的重量百分含量为0.1%）组4只，生理盐水组4只。阳性对照药物与实验药物的物质的量相同，阳性药的剂量为25μg/100g，司来普伐肽的剂量为50μg/100g，生理盐水50μl/只，每日上午、下午各给药一次。期间持续隔日灌胃给予戊酸雌二醇（1200μg/100g）一次，隔日取阴道液涂板培养，共三次，试验后期，隔三日取阴道液涂板培养，共两次。

C、病理学检测：

病原体检查：取大鼠阴道分泌物进行检查。

病理组织学检查：动物处死后立即采取阴道组织置中性福尔马林，进行组织包埋、切片、染色。

（3）试验结果

A、大鼠阴道液霉菌培养结果：三组分别于给药前，给药后2天、4天、8天、12天取阴道液，注入100μl生理盐水灌洗，每管灌洗液取5μl，用生理盐水稀释至100μl接种培养，阴道液培养数据及照片显示，经生理盐水治疗后菌落数没有显著减少；与生理盐水组比较，经达克宁与司来普伐肽治疗12天后，白念珠菌菌落数均显著减少，其中司来普伐肽组疗效优于达克宁组；表明：司来普伐肽有较显著的抗白色念珠菌的作用，且抗菌作用强于达克宁。

B、大鼠外阴检查：每组取两只动物的外阴组织进行外观检查，结果显示：达克宁组出现红肿、糜烂溃疡现象，司来普伐肽组及生理盐水组外阴干燥，未出现红肿等异常现象；表明：司来普伐肽没有明显副作用。

C、切片染色结果：最后一天接菌后，取大鼠阴道组织浸入中性福尔马林中，24小时后进行切片及HE、PAS染色。HE染色结果显示：等摩尔量司来普伐肽组的免疫细胞数明显少于达克宁组，提示司来普伐肽对阴道炎有较好的抗炎作用，且优于阳性对照药达克宁。PAS染色结果显示：司来普伐肽组及达克宁组均未见明显菌丝，未见明显阴道粘膜或上皮溃疡等组织损伤现象，表明司来普伐肽和达克宁对阴道炎均具有较好的组织保护作用。

综上结果，司来普伐肽对于大鼠白色念珠菌性阴道炎具有显著的抗菌消炎作用，其作用强于现有药物达克宁，且未见明显副作用。

实施例4 司来普伐肽治疗外阴阴道念珠菌病的随机对照临床试验

（1）试验目的

通过随机对照临床试验，比较司来普伐肽阴道栓（由实施例1制备）和咪康唑栓剂的阴道局部用药对外阴阴道念珠菌病（VVC）的治疗效果。

（2）试验方案

入选病例33例，有VVC症状，包括瘙痒症、烧灼感或分泌物等临床表现，用棉签在阴道穹隆上方取得的分泌物进行镜检有假菌丝存在。将33例病人随机分为两组：试验组23人，使用实施例1所制备的司来普伐肽阴道栓；对照组10人，使用规格为200mg的咪康唑栓剂。每天睡前一次，连续用药一周。治疗期间禁止性生活，不得使用其它的阴道药物处理，包括阴道避孕器、阴道冲洗。在治疗的最后阶段，即第7天，病人回到诊所继续接受观察、阴道分泌物培养以及CBC（全血细胞计数）和肝肾功能检测。询问患者与药物有关的副作用。

（3）试验结果

司来普伐肽阴道栓治疗的23名病人中，13名病人假菌丝为阴性并且症状得到完全控制（占56.5%），7名病人症状得到改善（占30.4%），2名病人假菌丝显阴性（占8.7%），阴道壁腐蚀得到改善，临床症状得到控制，1名病人假菌丝显阳性（占4.3%），且阴道壁腐蚀得到控制；其假菌丝的控制率达95.7%，症状控制及改善率达100%。

对照组用咪康唑治疗10名病人，5名病人假菌丝呈阴性且症状得到控制（占50%），2名病人症状得到改善（占20%），其余3名病人症状没有完全消退并且假菌丝呈阳性（占30%）；其假菌丝控制率仅70%左右，症状控制及改善率为70%。

上述结果显示：司来普伐肽阴道栓可使VVC患者的瘙痒、红斑、腐蚀、灼烧感等症状均得到改善，与咪康唑阴道栓相比，司来普伐肽阴道栓在治疗外阴阴道白色念珠菌病方面更加有效；表明：司来普伐肽阴道栓可有效杀灭白色念珠菌，缓解VVC临床症状且无副作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。