Synthesis and identification of artificial complete antigen 25-hydroxyvitamin D_3

摘要

目的:合成25-羟基维生素d3人工完全抗原,并制备抗25-羟基维生素d3的特异性抗体。方法:将25-羟基维生素d3进行化学修饰加入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的25-羟基维生素d3-半琥珀酸酯。采用碳二亚胺法,将25-羟基维生素d3-半琥珀酸酯,分别与牛血清白蛋白(bSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,合成人工完全抗原25-羟基维生素d3-半琥珀酸酯-bSA和25-羟基维生素d3-半琥珀酸酯-OVA。通过紫外吸收光谱,SdS-PAgE和MAldI-TOf进行偶联鉴定。用25-羟基维生素d3-半琥珀酸酯-bSA免疫小鼠,获得抗25-羟基维生素d3抗体免疫血清。结果:25-羟基维生素d3-半琥珀酸酯与bSA的偶联比为(12±0.16)∶1,免疫小鼠后获得高效价(效价为6.25x10-4)的抗体,且标准品浓度在37.5~600 ng/Ml范围具有显著的竞争性线性关系,检测的灵敏度为37.5 ng/Ml。结论:成功合成了25-羟基维生素d3人工完全抗原,制备出25-羟基维生素d3的抗体且其线性关系显著,灵敏度较高,为进一步研制检测25-羟基维生素d3的试剂盒奠定了基础。