Desenvolvimento de metodologias de biologia molecular para a deteção de Cynara scolymus e Silybum marianum em suplementos alimentares à base de plantas

摘要

As plantas Cynara scolymus L. (Alcachofra) e a Silybum marianum (L.) Gaertn (Cardo mariano) têm sido frequentemente incluídas em suplementos alimentares devido às suas propriedades benéficas para a saúde. De acordo com a Diretiva 2002/46/CE, os suplementos alimentares são considerados alimentos, não sendo por isso sujeitos a qualquer avaliação de segurança, qualidade ou eficácia antes da sua comercialização. Esta limitação no seu controlo pode facilitar potenciais adulterações, como a troca intencional ou acidental de material vegetal. Deste modo, metodologias analíticas específicas, tais como as baseadas na análise de ADN constituem ferramentas fundamentais para a avaliação da autenticidade destes produtos.Assim, o objetivo deste trabalho consistiu na deteção de alcachofra e cardo mariano em suplementos alimentares para a perda de peso, usando as técnicas de PCR qualitativa e PCR em tempo real com análise por high resolution melting (HRM). Para tal, foram utilizadas sementes destas plantas, catalogadas por bancos de germoplasma (nacional e internacionais), e de espécies filogeneticamente próximas a estas, totalizando 43 espécies de plantas medicinais, e 17 suplementos alimentares contendo alcachofra e/ou cardo mariano.Os extratos de ADN de todas as amostras de plantas e suplementos alimentares foram amplificados por PCR qualitativa, tendo como alvo regiões nucleares (18S rRNA) e dois genes cloroplastidiais (rbcL e matK). Os primers EG-F/EG-R desenhados na região nuclear foram os que apresentaram maior universalidade e capacidade de amplificação do ADN das amostras de suplementos. A especificidade dos primers com alvo numa região genómica da C. scolymus foi testada por PCR qualitativa, verificando-se que estes permitiam a amplificação de diferentes espécies do género Cynara. A aplicação do método possibilitou a deteção de Cynara spp. em algumas das amostras de suplementos alimentares. O desenvolvimento de um sistema de PCR em tempo real com análise HRM permitiu discriminar a C. scolymus das restantes espécies, com um nível de confiança acima de 99,4% e, ainda, confirmar a presença inequívoca de C. scolymus nos suplementos testados (nível de confiança >98,8%). Para a deteção de S. marianum, conseguiu-se desenvolver um método de PCR qualitativa específico para a espécie, mas a sua aplicação não permitiu detetar a presença de cardo mariano nos suplementos alimentares analisados