摘要:目的:研究人肝刺激因子(hHSS)对肝细胞的促增殖和抗凋亡作用的机制,探索线粒体上可能与hHSS有相互作用的蛋白质,并阐明其发挥作用的机制.方法:用Flag-HSS-pcDNA3.0转染肝肿瘤细胞系BEL-7402细胞,经G418筛选确立稳定表达融合蛋白Flag-HSS的细胞株,用转染空载体pcDNA3.0的BEL-7402细胞作为阴性对照.采用免疫共沉淀(co-IP)的方法,探索与HSS可能有相互作用的蛋白质,用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的方法,鉴定SDS-PAGE胶条内的蛋白质并分析.重复co-IP实验,用western blotting的方法验证HSS与相应结合蛋白的存在.梯度截短HSS的五个α螺旋,构建HSS-PGEX 4T 1重组质粒,转化大肠杆菌Drigamin DE3表达HSS蛋白,并与ANT共孵育,进行GST pull down实验、western blotting验证.结果:用Anti-Flag Argarose从过表达HSS的细胞裂解液中沉淀Flag-HSS,并沉淀出其它与HSS有结合的蛋白质.在免疫共沉淀之后HSS与ANT同时存在并相结合.结论:肝刺激因子可以抑制肝细胞的凋亡,其机制可能与线粒体膜通透复合体上ANT与HSS的相互作用有关.