摘要：目的:本研究采用新西兰大白兔作为实验对象,制作胫骨骨缺损模型,研究应用Ilizarov技术在兔胫骨骨缺损过程中持续牵拉作用对血清一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的影响,初步探讨牵张成骨再生可能的分子学机制.rn 方法:取健康新西兰大白兔18只(辽宁医学院动物饲养中心提供),年龄＜6个月,体重(2.5±0.25)kg,雌雄不限,所有新西兰大白兔在实验室适应性饲养7天后,按照随机对照表将实验动物随机分为实验组、对照组,每组9只(n=9).在麻醉状态下严格消毒后,于右侧胫骨下胫腓关节上方3厘米处截骨1厘米制作骨缺损模型并安装微型Ilizarov外固定架予以固定.各组按相应处理措施处理,分别在固定时间取耳缘静脉血2毫升,测定术后当时、开始牵张第1天(即术后第7天)、开始牵张第1周(即术后第14天)、牵张结束时(即术后第17天)、开始牵张第2周(即术后第21天)时诱导型一氧化氮合酶(iNOS),对比观察其含量的变化;于开始牵张第1天、第1周、第2周分别处死3只实验动物,于右侧胫骨缺损处取材,观察缺损处大体情况,并制作石蜡块行组织学检测,同一部位的相邻切片行免疫组化染色,用SABC法观察iNOS.所有计量资料均以((x)±s)表示,采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析,对iNOS阳性单位值(Pu)分析采用单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果血清诱导性一氧化氮合酶含量测定结果显示,术后当时两组诱导性一氧化氮合酶(iNOS)含量差异无统计学差异(p＞0.05);开始牵张第1天(术后第7天),实验组iNOS含量明显高于对照组,差异有统计学意义(p＜0.01);开始牵张第1周(即术后第14天),实验组iNOS含量也明显高于对照组,且明显高于术后第7天时含量,差异均有统计学意义(p＜0.01);牵张结束时(即术后第17天)实验组iNOS含量高于对照组,差异有统计学意义(p＜0.05),且低于开始牵张第1周(术后第14天),但差异无统计学意义(p＞0.05);开始牵张第2周(即术后第21天)时两组iNOS含量无明显差异,均高于术后当时测定含量,但均无统计学差异(p＞0.05).免疫组化观察阳性信号为胞浆内棕色颗粒.rn 结果:显示正常骨组织iNOS仅有少量的阳性表达,实验组iNOS呈现阳性表达主要在牵张区成纤维细胞、间充质细胞、成骨细胞以及少量软骨细胞中的细胞胞浆,在胞核有少量表达.开始牵张第1天,表达明显,iNOS可见大量间充质细胞呈阳性表达;开始牵张第1周,可见iNOS肉芽组织、软骨岛中出现大量阳性细胞,血管内皮细胞也有阳性表达;开始牵张第2周,iNOS可见少量阳性细胞,阳性程度减弱;开始牵张第1周时达到顶峰,随后呈现随时间延长阳性表达逐渐减弱.各时间点实验组牵张成骨区域iNOS表达均高于对照组,两组间差异有显著性(p＜0.05).rn 结论:伊利扎洛夫技术牵张成骨在兔胫骨缺损新骨形成过程中可促进诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的高表达,这可能是新骨形成骨再生的分子生物学机制之一.
