摘要：目的:原核表达曼氏迭宫绦虫翻译控制肿瘤蛋白(Sm TCTP),对表达产物进行鉴定及纯化,并对Sm TCTP进行组织定位和观察重组抗原在小鼠抗曼氏裂头蚴感染中的免疫保护效果.rn 方法:构建Sm TCTP重组表达质粒pGEX-4T-1-Sm TCTP,并转入大肠埃希菌BL21菌株中.异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用GST树脂对表达产物进行纯化,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫蛋白印迹(Western blot)进行鉴定.免疫组织化学方法观察Sm TCTP在曼氏迭宫绦虫成虫中的组织定位.用小鼠实验对重组抗原的免疫保护效果进行初步的评价,即将30只小鼠随机分成3组,每组10只,分别为PBS对照组、空质粒对照组以及免疫组.免疫组小鼠注射重组蛋白与等体积完全佐剂混合物,空质粒对照组小鼠注射于重组蛋白等量的GST蛋白与等体积完全佐剂混合物,PBS对照组直接注射相同体积的PBS.每组动物均免疫3次,时间为0、2、4周,采用腹腔内部注射,每次免疫注射量为100μ1/只,抗原剂量为50μg/只.第3次免疫后的第2周,所有小鼠均经灌胃感染曼氏裂头蚴5条/只,并于感染后的第6周处死并解剖所有小鼠,收集曼氏裂头蚴计数,计算曼氏裂头蚴的减虫率.rn 结果:成功构建了pGEX-4T-1-Sm TCTP重组质粒,并在BL21菌中获得可溶性表达并且与GST融合的重组目的蛋白,GST树脂纯化获得重组目的蛋白.SDS-PAGE及Western Blot结果显示,表达及纯化产物为GST融合蛋白,分子量约45 kDa,与SmTCTP与GST融合蛋白理论分子量相符.免疫组化结果显示,Sm TCTP主要分布于曼氏迭宫绦虫成虫的子宫、睾丸和卵黄腺上.小鼠免疫保护性实验结果显示,与PBS对照组相比,免疫组小鼠减虫率为66.7％,统计学上差异有显著性(P＜0.01).rn 结论:成功进行了Sm TCTP的原核表达并获得了纯化的重组蛋白,且重组蛋白具有良好的免疫原性,Sm TCTP主要定位于曼氏迭宫绦虫成虫的子宫、睾丸和卵黄腺上,可诱导小鼠产生显著的抗曼氏迭宫绦虫的免疫保护作用,本工作为今后研究Sm TCTP的生物学功能奠定了理论基础.
