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Proteomics study on the protective mechanism of soybean isoflavone against inflammation injury of bovine mammary epithelial cells induced by Streptococcus agalactiae

机译:蛋白质组学研究大豆异黄酮对链球菌诱导牛乳腺上皮细胞炎症损伤的保护机理研究

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摘要

This study aimed to verify the anti-inflammatory effect of soybean isoflavones (SI) on the inflammatory response induced by Streptococcus agalactiae ( S. agalactiae ) of bovine mammary epithelial cells (bMECs) and to elucidate its possible mechanism. BMECs were pretreated with SI of different concentrations (20, 40, 60, 80, 100?μg/mL) for 0.5, 3, 6, 9, 12, 15, 18, 24?h. And then, S. agalactiae was used to infect bMECs for 6?h (MOI?=?50:1) to establish the inflammation model. Cell viability, growth curves of S. agalactiae , cytotoxicity, and S. agalactiae invasion rate were determined. A proteomics technique was used to further detect differential proteins and enrichment pathways. SI (40?μg/mL) improved the viability of bMECs at 12?h ( p ?
机译:该研究旨在验证大豆异黄酮(Si)对牛乳腺上皮细胞(BMEC)的链球菌嗜醛(Si)诱导的炎症反应的抗炎作用,并阐明其可能的机制。用不同浓度的Si(20,40,60,80,100×μg/ ml)预处理BMEC,用于0.5,3,6,9,12,15,18,24μl。然后,S.AlAlactiae用于感染BMEC 6?H(MOI?= 50:1)以建立炎症模型。确定细胞活力,S.嗜虾症,细胞毒性和S.嗜患症的生长曲线。蛋白质组学技术用于进一步检测差异蛋白质和富集途径。 Si(40×μg/ ml)改善了BMECs在12?H(p≤05)和60℃和80×μg/ ml的可行性(p≤0.01)。此外,60〜μg/ ml的Si保护细胞损伤细胞(p?<β05)。 Si可以以时间和剂量依赖的方式抑制血糖酰胺生长和内化进入BMECs。此外,蛋白质组学结果表明,上调133个蛋白质,89个蛋白质显着下调。差异显着表达的蛋白质(DSEPS)主要与细胞增殖,分化,细胞凋亡和迁移有关。 GO注释表明,222例DSEPS分为23个生物过程(BP)术语,14个细胞组分(CC)术语和12个分子函数(MF)术语。 DSEPS在10种途径中显着富集,其中免疫途径是主要的富集途径。关键词:大豆异黄酮,乳制品上皮细胞,链球菌性乳腺癌,保护机制,蛋白质组织表明S. Alalactiae是导致乳制奶牛亚临床乳腺炎的常见病原体之一(Santos等人2011)。乳腺上皮细胞作为对乳腺炎的第一行防御,在抵抗致病微生物的过程中发挥着重要作用(Bougarn等,2011)。乳制品奶牛被感染乳酸奶牛后,受感染的乳腺细菌逐渐增加。在连续感染的情况下,牛奶中的体细胞计数增加,乳腺组织进一步受损。腺体中的acini终于失去了完整的结构,血乳屏障被破坏,引起炎症(Patil等,2015)。丰富的研究表明,S.Alactiae可以显着增加炎症因素的表达,例如TNF-α,IL-6和IL-8,这促进了炎症的进展(Adams Waldorf等,2011).soybean异黄酮是种类的豆类植物中存在的黄酮类化合物(Tsugami等人2017)。近年来,一些研究表明,Si在治疗人类疾病(如抗肿瘤,抗炎和抗氧化胁迫)中发挥了重要作用(Mortensen等,2009; Russo等,2016; Teixeira et al。2014)。此外,通过将Si添加到饮食中,乳制品奶牛血液中的胰岛素样生长因子(IGF-1)含量增加。 JAK-STAT和MTOR信号途径受IGF-I的影响,其调节乳蛋白相关基因的表达,以促进乳蛋白合成并增加牛奶率(Sigl等,2014)。然而,Si对BMECs的氨基酰胺诱导的BMECS诱导的炎症反应的影响。常见科技成为一种有效的方法,揭示了许多疾病的发生和预防机制(Vaccaro等,1993)。串联质量标签(TMT)可以共价结合赖氨酸的游离氨基酸和肽的N-末端,以标记样品中的各种多肽,以便更准确地进行定量分析。基于TMT的高灵敏度蛋白质组学技术可以显着提高实验通量,降低定量误差,并找到更细微的生物学差异。此外,它适用于具有多种加工方法或多次加工时间的样品的差异蛋白质分析。本研究的目的是评估Si的潜力,以保护BMEC免受S. AlAlactiae感染,并揭示潜在机制蛋白质组学水平。我们确定了Si对BMECs活性的影响,S.Alactiae生长和细菌侵袭细胞,以及分析DSEPS在保护Si的情况下使用TMT偶联的LC-MS / MS,鉴定了潜在的生化标志物从实验数据提供新方向,以防止由S.嗜醛诱导的BMEC炎症。材料和方法培养和治疗该实验,牛乳腺上皮细胞(来自动物生物化学实验室的礼物,东北农业大学)被使用。生长培养基由DMEM / F12培养基(Gibco,USA),10%澳大利亚胎儿血清(FBS,Gibco,USA)和1%青霉素 - 链霉素(Gibco,USA)组成。 BMEC在培养基中培养并保持潮湿的

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