Assessment of real-time PCR for diagnosis of Mycoplasma pneumoniae pneumonia in pediatric patients

摘要

We developed a real-time PCR to detect Mycoplasma pneumoniae with a primer set designed for the 16S rRNA gene. Clinical samples (n = 937) were collected from children with community-acquired pneumonia between April 2002 and March 2004 at 12 Japanese medical institutions. Sensitivity of real-time PCR was calculated as 10 colony-forming units per reaction tube using a pMP01 plasmid carrying a 225-bp target DNA fragment of the 16S rRNA gene in M. pneumoniae M129, a standard strain. Results, obtained within 2 h, were compared with those of conventional culture and serologic methods. Of all cases tested, 151 (16.4%) and 129 (13.8%) were positive for M. pneumoniae by real-time PCR and by culture, respectively. Among the 151 cases, almost all of those tested serologically by passive agglutination showed a rise in M. pneumoniae antibody titre between acute and convalescent sera. We conclude that this real-time PCR can identify M. pneumoniae rapidly and fulfills the need for rapid identification, high sensitivity, and high specificity.Key words: real-time PCR, Mycoplasma pneumoniae identification, pediatrics, community-acquired pneumonia, Mycoplasma pneumoniae culture.Nous avons élaboré un PCR en temps réel pour détecter Mycoplasma pneumoniae avec un jeu d'amorces conçues pour le gène de l'ARNr 16S. Des échantillons cliniques (n = 937) ont été recueillis d'enfants ayant contracté une pneumonie dans la communauté entre avril 2002 et mars 2004 dans 12 institutions médicales japonaises. La sensibilité du PCR en temps réel fut estimée à 10 UFC par tube de réaction en employant un plasmide pMP01 renfermant un fragment d'ADN cible de 225 pb du gène de l'ARNr 16S de M. pneumoniae M129, une souche courante. Les résultats, obtenus à l'intérieur de 2 h, ont été comparés à ceux de cultures conventionnelles et de méthodes sérologiques. Dans tous les cas analysés, 151 (16,4 %) et 129 (13,8 %) étaient positifs pour M. pneumoniae par PCR en temps réel et par culture, respectivement. Parmi les 151 cas, presque tous ceux qui furent testés par la méthode sérologique d'agglutination passive ont démontré une augmentation du titre d'anticorps contre M. pneumoniae entre les sérums aigus et convalescents. Nous concluons que ce PCR en temps réel peut identifier M. pneumoniae rapidement et remplit les critères pour une identification rapide, une sensibilité élevée et une spécificité élevée.Mots clés : PCR en temps réel, identification de Mycoplasma pneumoniae, pédiatrie, pneumonie contractée dans la communauté, culture de Mycoplasma pneumoniae.[Traduit par la Rédaction]