高速RT-PCR法检测手足口病肠道病毒效果评价

摘要

目的建立高速反转录PCR（RT-PCR）法,并探讨其在手足口病肠道病毒检测中的应用前景。方法采用Speed Star HS DNA polymerase和Hi Script II Reverse Transcriptase建立高速RT-PCR法,采用高速RT-PCR法和常规试剂盒法对不同浓度肠道病毒阳性基因标准品和112份手足口病核酸阳性样本进行检测,比较两种方法检测结果差异。结果高速RT-PCR法和常规试剂盒法整个PCR扩增时间分别为54和96 min。高速RT-PCR法的最低检出限为105拷贝/μL,常规试剂盒法的最低检出限为为106拷贝/μL;高速RT-PCR法的扩增效率为106.67%,高于常规试剂盒法的102.12%;两种方法的检测结果具有高度一致性（Kappa=0.755,P＜0.05）。高速RT-PCR法的批内变异系数为0.88%~1.37%,批间变异系数为1.04%~2.95%。结论所建立的高速RT-PCR法具有良好的检测效率、灵敏度、重复性和稳定性,适用于手足口病肠道病毒核酸快速检测。