液氮冻融联合胰蛋白酶消化脱细胞法构建猪心脏瓣膜支架的研究

摘要

目的探讨液氮冻融联合胰蛋白酶消化脱细胞法构建猪心脏瓣膜支架的效果。方法将新鲜的猪心脏瓣膜剪成约1 cm×1 cm的小块,按随机数字表法分为实验组、对照组和未处理组,每组设5个重复标本。3组标本经液氮冻融后,实验组采用0.6%胰蛋白酶和5%十二烷基硫酸钠(SDS)各处理3 d;对照组采用5%SDS处理6 d;未处理组置于无菌0.9%氯化钠溶液中常温静置6 d。通过HE染色和丽春红-苦味酸染色、残留DNA定量及α-Gal抗原检测确定脱细胞效率。将脱细胞的猪心脏瓣膜在大鼠皮下包埋2周,通过茜素红染色观察其抗钙化潜能。结果实验组的猪心脏瓣膜标本细胞成分基本去除,细胞外基质结构完整;残留DNA含量、α-Gal抗原分别为(55.6±16.8)μg/g、0.02±0.01,明显低于对照组的(750.4±178.1)μg/g、0.14±0.02(均P<0.01)。大鼠皮下包埋2周后,实验组钙化结节明显少于对照组(P<0.01)。结论应用液氮冻融联合胰蛋白酶消化构建的脱细胞猪心脏瓣膜基质可能是组织工程瓣膜的良好支架。