六味地黄丸含药血清对Aβ诱导SH-SY5Y细胞的自噬影响及机制研究

摘要

目的研究六味地黄丸含药血清对Aβ诱导SH-SY5Y细胞的自噬影响及其机制,探讨阿尔茨海默病的病理机制及补肾填精法的作用机制。方法30只大鼠随机分成对照组和六味地黄丸组两组,分别予以等量的双蒸水和含六味地黄丸粉末水溶液进行灌胃,末次灌胃结束后取血并分离血清备用。将SHSY5Y细胞分为对照组、模型组和药物组,对照组和模型组给予含空白血清的完全培养液,药物组给予含含药血清的完全培养液,模型组和药物组加入Aβ1-42寡聚体,培养48 h。应用CCK-8法对各组进行细胞增殖率分析;免疫荧光法分析各组细胞内Aβ沉积情况;Western Blot法检测各组细胞BACE1、p62、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达情况。结果CCK-8结果显示,与对照组相比,模型组细胞增殖率显著降低(P<0.01);与模型组相比,药物组细胞增殖率显著增高(P<0.01)。与对照组相比,模型组细胞内Aβ的沉积显著增加(P<0.01);与模型组相比,药物组细胞内的Aβ沉积显著减少(P<0.01)。Western Blot结果显示,与对照组相比,模型组细胞的BACE1、Beclin1的蛋白表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值显著升高(P<0.01),p62的蛋白表达量显著降低(P<0.01);与模型组相比,药物组细胞的Beclin1的蛋白表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值显著升高(P<0.01),BACE1和p62的蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论六味地黄丸含药血清可以增加Aβ诱导的SH-SY5Y细胞自噬相关基因的表达,上调自噬水平,减轻细胞损伤,对细胞具有明显的保护作用。