沙棘枝枯病的定量检测体系构建和应用

摘要

【目的】找到一种灵敏度较高的定量检测沙棘枝干以及土壤中病原菌的方法,为沙棘枝枯病的早期诊断和防控提供参考。【方法】以17份沙棘枝条样本、4份沙棘根际土壤样本为材料,提取拟枝孢镰刀菌DNA,基于翻译延伸因子(EF-1α)设计特异性扩增拟枝孢镰刀菌的引物,检测PCR引物的特异性,检测拟枝孢镰刀菌实时荧光定量PCR的灵敏性,并采用实时荧光定量PCR技术检测沙棘枝条和根际土壤微生物DNA样品。【结果】建立了拟枝孢镰刀菌质粒检测标准曲线(R²=0.9849),使用该曲线得到的每微升DNA样本的检测拷贝数是10^(3)~10^(8)。拟枝孢镰刀菌实时荧光定量PCR检测结果表明,在17份枝条样品和4份土壤微生物DNA样品中,有7份样品出现荧光信号。【结论】与普通PCR扩增方法相比,建立的拟枝孢镰刀菌实时荧光定量PCR检测体系的检测结果更精确,其具有更强的实用性和可操作性,既可以用于定性检测病原菌,又可以用于定量检测沙棘枝干和土壤中病原菌密度。实时荧光定量PCR技术凭借其优异的特异性和灵敏性可以被广泛地应用于多种植物、空气和土壤中病原菌含量的测定。