环介导等温扩增技术快速检测猪传染性胃肠炎的方法

摘要

cqvip:为了建立一种便捷、灵敏而又特异的用于检测猪传染性胃肠炎病毒的反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)基因检测技术,本研究根据比对GenBank中TGEV N基因选取保守序列设计合成了内(FIP,BIP)、外(F3,B3)2对引物,其中外引物扩增片段的大小为200 bp,在Bst DNA聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反应.本研究对LAMP反应体系中内、外引物的比例、DNA聚合酶浓度、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、反应温度和时间等条件逐一优化,成功建立了猪传染性胃肠炎病毒RT-LAMP快速检测方法.结果表明该方法在61℃下保温45 min即可完成,每个反应可检测DNA至26.5个拷贝,与常规RT-PCR检测方法相比灵敏度高100倍;而且具有良好的特异性.LAMP扩增技术是一种检测程序简便、灵敏度和特异性较高的基因快速检测手段,适合基层和实验室的快速检测,具有一定的开发应用潜力.