激光捕获显微切割和基因芯片技术用于肿瘤实质细胞转录组的构建

摘要

目的:联合应用激光捕获显微切割和基因芯片技术构建纯化肿瘤实质细胞转录组.方法:应用激光捕获显微切割技术从肿瘤组织冰冻切片中获取纯化肿瘤实质细胞,提取RNA并对其进行线性扩增得到aRNA,合成cRNA探针后与全基因组基因芯片Affymetrix HG-U133.Plus 2.0 Gene-Chip杂交构建全基因组表达谱.结果:从5例结肠癌组织样本中各获取了3 mm2细胞,抽提获得RNA 118.4～300.3 ng,混合后取100 ng进行线性扩增获得aRNA 7 μg.基因芯片各项质控标准符合基因表达谱芯片操作指南,共有18 205条转录本表达,代表15 276个基因.结论:联合应用激光捕获显微切割和全基因组基因芯片技术可构建纯化肿瘤实质细胞转录组.