反转录病毒介导的HPV16 E6-siRNA对SiHa细胞增殖及抗药性的影响

摘要

目的:探讨反转录病毒介导的靶向人乳头瘤病毒(human papillom avirus,HPV)16E6基因的小干扰RNA(small inter-fering RNA,siRNA)对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的影响。方法:收集产反转录病毒PA317细胞的病毒上清液感染SiHa细胞,G418筛选获得HPV16E6基因稳定沉默的细胞克隆(SiHa/16E6),同时设立载体对照(SiHa/pSUPER)和正常细胞对照(SiHa)。RT-PCR检测HPV16E6和E7mRNA的表达水平,Western印迹法检测p53、Rb、caspase3及其底物多聚ADP-核糖聚合酶(polyADP-ribose polymerase,PARP)蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖活性及细胞对顺铂的敏感性。结果:感染后与SiHa细胞对照组相比,各时间点的E6和E7mRNA表达水平均有所下降,p53和Rb蛋白表达水平增高,caspase-3和PARP剪切后的活性条带增加,感染后40d细胞的增殖活性下降;在同一药物浓度下,感染后20d的细胞存活率显著降低,顺铂的IC50值为(3.92±2.48)μg/mL。而SiHa/pSUPER组与SiHa细胞对照组相比,差异无统计学意义。结论:反转录病毒介导的HPV16E6-siRNA可有效沉默SiHa细胞中E6和E7基因的表达,抑制细胞增殖,并提高细胞对顺铂的敏感性。