沉默NRF2基因表达及鸦胆子苦醇均可抑制人胆管癌RBE细胞增殖

摘要

目的:探讨核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,NRF2)在人胆管癌细胞株RBE细胞增殖中的作用,以及鸦胆子苦醇(brusatol)对RBE细胞增殖的影响。方法:利用UALCAN数据库检索NRF2在正常人胆道组织和胆管癌组织中的表达情况;分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测人胆管癌细胞株RBE和正常胆管上皮H69细胞中NRF2 m RNA和蛋白的表达水平。采用脂质体转染法将靶向NRF2基因的si RNA(si NRF2-1和si NRF2-2)转入RBE细胞,分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测RBE细胞中NRF2 m RNA和蛋白的表达情况。采用DCFH-DA探针法检测沉默NRF2表达对RBE细胞中活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)水平的影响。CCK-8法和平板克隆形成实验检测沉默NRF2表达对RBE细胞增殖的影响。最后,再用CCK-8法检测鸦胆子苦醇对RBE细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR和DC-FHDA探针法分别检测鸦胆子苦醇对RBE细胞中NRF2 m RNA表达水平的影响以及细胞内ROS水平的影响。结果:NRF2在胆管癌组织中的表达水平明显高于正常胆管组织(P<0.05)。人胆管癌细胞株RBE中NRF2 m RNA和蛋白的表达水平均较正常胆管上皮H69细胞明显上调(P<0.001和P<0.01)。si NRF2-1和si NRF2-2均能明显下调RBE细胞中NRF2 m RNA和蛋白的表达水平均(P均<0.01)。沉默NRF2表达能有效提高RBE细胞中的ROS含量(P均<0.05),而抑制RBE细胞的增殖能力(P均<0.01)。鸦胆子苦醇能够有效抑制RBE细胞的增殖能力(P<0.01),下调RBE细胞中NRF2 m RNA的表达水平(P<0.01)以及提高RBE细胞中的ROS含量(P<0.01)。结论:NRF2在胆管癌中表达增加,沉默NRF2基因表达以及鸦胆子苦醇均能有效提高人胆管癌RBE细胞内ROS的含量并抑制胆管癌细胞增殖,因此NRF2有望成为胆管癌治疗的一个重要靶点,而鸦胆子苦醇有望成为临床上治疗胆管癌的一个新药。