二甲双胍诱导的干细胞样记忆性嵌合抗原受体-T细胞对小鼠多发性骨髓瘤移植瘤的治疗作用

摘要

目的:探讨体外培养过程中加入二甲双胍对靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)的嵌合抗原受体-T细胞(chimeric antigen receptor-T cells,CAR-T)分化及抗肿瘤能力的影响。方法:从健康人外周血单个核细胞中提取并活化T细胞,采用病毒感染法制备BCMA-BBZ CAR-T细胞。二甲双胍诱导组为CAR-T细胞扩增过程同时加入重组人白细胞介素7(recombinant human interleukin-7,rhIL-7)、rhIL-21和二甲双胍进行诱导,非二甲双胍诱导组为只使用细胞因子诱导的CAR-T细胞,空白对照组为未转导慢病毒的T细胞。采用FCM法检测CAR-T细胞中CAR的表达水平、记忆表型和凋亡情况,非放射性细胞毒性实验评价CAR-T细胞对人多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞的特异性免疫杀伤作用。用RPMI-8226细胞连续多轮刺激后,检测CAR-T细胞的记忆表型和对RPMI-8226细胞的毒性杀伤功能。构建RPMI-8226细胞小鼠移植瘤模型,输注各组CAR-T细胞后,记录小鼠的肿瘤体积、体质量、生存期,检测CAR-T输注14 d后小鼠外周血中淋巴细胞数量。结果:二甲双胍诱导后的CAR-T细胞,CD8~+T细胞中干细胞样记忆T细胞(stem-cell memory T cell,Tscm)(CD95high CD45RAhigh CCR7high)所占比例明显增多(P0.05)。进一步研究显示,相较于非二甲双胍诱导的CAR-T细胞治疗组二甲双胍诱导的CAR-T细胞治疗组小鼠外周血中CD8^(+)T细胞数明显更多(P<0.05),小鼠生存期也具有一定的存活受益。结论:二甲双胍具有维持CAR-T细胞低分化的作用,其诱导的Tscm富集可在连续培养和接受连续抗原刺激后维持。二甲双胍诱导的CAR-T细胞能够有效抑制肿瘤生长。