沉默MK基因增强肝癌Bel/Fu细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性及可能的机制

摘要

目的:研究沉默中期因子（midkine,MK）基因表达后人肝癌氟尿嘧啶（uorouracil,Fu）耐药细胞株Bel/Fu对5-Fu敏感性的变化,并初步探讨可能的作用机制。方法:采用脂质体瞬时转染法将MK-siRNA转入Bel/Fu细胞,分别应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测MK mRNA及蛋白的表达水平。MKsiRNA联合5-Fu处理后,分别采用MTT及FCM法检测肝癌Bel/Fu细胞的增殖抑制率及凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,Akt）信号通路中相关蛋白磷酸化PI3K、磷酸化Akt和核因子-κB（nuclear factorkappa B,NF-κB）及凋亡相关蛋白Bcl-2、survivin和caspase-3的表达水平。结果:MK-siRNA转入Bel/Fu细胞后,MK mRNA和蛋白的表达水平均明显下调（P值均＜0.05）。MK-siRNA转染组5-Fu对Bel/Fu细胞的半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）为（472±21）μg/mL,明显低于空白对照组的（2 035±34）μg/mL（P＜0.05）;细胞凋亡率为（32.10±3.61）%,明显高于空白对照组的（7.90±0.91）%（P＜0.01）;PI3K/Akt信号通路中相关蛋白p-PI3K、p-AKT、NF-κB、Bcl-2和survivin蛋白的表达水平均明显下调（P值均＜0.05）,而凋亡蛋白caspase-3表达明显上调（P＜0.05）。结论:siRNA沉默MK基因表达后可增强肝癌Bel/Fu细胞对5-Fu的敏感性,其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路的活化相关。