高强度聚焦超声通过TRIF介导的ERK通路增强乳腺癌的顺铂化疗敏感性

摘要

目的探究高强度聚焦超声(HIFU)通过β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)介导的细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路增强乳腺癌顺铂(DDP)化疗敏感性的作用机制。方法依次增加DDP浓度间歇作用的方法诱导乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)/DDP耐药细胞;将MDA-MB-231/DDP、MCF-7/DDP细胞分为control组、HIFU组、HIFU+二甲基亚砜(DMSO)组、HIFU+漆黄素(fisetin)组。CCK-8检测细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞TRIF蛋白、耐药相关蛋白及ERK通路蛋白表达;体内成瘤实验检测肿瘤生长情况;免疫组化染色法检测肿瘤组织Ki-67的表达。结果与亲本MDA-MB-231及MCF-7细胞相比,在相同浓度DDP处理下MDA-MB-231/DDP及MCF-7/DDP细胞活力更高,且半数抑制浓度(IC50)显著增加(P<0.05),成功建立了稳定的DPP耐药细胞系;与control组相比,HIFU组MDA-MB-231/DDP及MCF-7/DDP细胞IC50、OD450值、克隆细胞数、S期细胞百分比、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、TRIF、p-糖蛋白(p-gp)、多药耐药基因1(MDR1)、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著降低,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平显著增加(P<0.05);与HIFU组相比,HIFU+fisetin组细胞IC50、OD450值、克隆细胞数、S期细胞百分比、Bcl-2、TRIF、pgp、MDR1、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著增加,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、Bax表达水平显著降低(P<0.05)。与control组相比,HIFU组肿瘤体积、肿瘤质量、TRIF及p-ERK1/2/ERK1/2表达水平、Ki-67阳性表达显著降低(P<0.05);与HIFU组相比,HIFU+fisetin组肿瘤体积、肿瘤质量、TRIF及p-ERK1/2/ERK1/2表达水平、Ki-67阳性表达显著增加(P<0.05)。结论HIFU通过抑制TRIF表达来抑制其介导的ERK通路,从而增强乳腺癌DDP化疗敏感性。