噬菌体表面展示技术筛选抗血小板GPⅡb/Ⅲa复合物单链抗体

摘要

目的用噬菌体表面展示技术,直接从抗血小板表面蛋白全套单链抗体噬菌体展示文库中筛选能与糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa复合物高亲合力结合的单链抗体克隆,为开发有自主知识产权的抗栓药物奠定基础.方法从活化血小板免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,用抗体可变区混合引物扩增全套轻、重链可变区基因,经重叠延伸反应,装配成单链抗体(ScFv)基因,将其克隆到噬菌体载体pHEN1中,构建单链抗体噬菌体抗体库.对抗体库进行亲合筛选后, ELISA法鉴定抗GPⅡb/Ⅲa复合物单链抗体.结果经过4轮"吸附--竞争性洗脱--扩增"的富集过程,phage-ELISA得到一个ELISA活性较高的能与GPⅡb/Ⅲa结合的克隆.序列测定符合抗体可变区结构特点.结论成功构建了全套抗血小板表面蛋白单链抗体噬菌体展示文库,并筛选得到具有GPⅡb/Ⅲa结合能力的单链抗体基因.