c血清型变形链球菌抑龋相关基因/DNA片段的高通量筛选

摘要

目的筛选含抑龋相关基因/DNA片段的阳性克隆,为探究变形链球菌高、低毒力株致龋能力的差异奠定基础.方法将抑制消减杂交方法获得的低毒力株特异的消减PCR产物与T/A载体pCR2.1连接,将连接产物转化E.coli TOP10F'感受态细胞,进行蓝白筛选.对96个转化子进行Clony PCR,将PCR产物点样于同一尼龙膜上,分别与地高辛标记的变形链球菌高、低毒力株基因组DNA-AluI酶切产物杂交,高通量筛选阳性克隆.结果随机挑取了96个白色或白色中央有蓝色的菌落,经过Clony PCR,其中有4个转化子的扩增产物为双带,其余均为0.2～2.0kb之间的单一条带,由原转化平板上另外挑取4个白色菌落替代,其中1个未扩增出产物.经过杂交,以与低毒力株基因组有杂交信号,而与高毒力株基因组无杂交信号或信号明显弱的转化子为阳性克隆,筛选的阳性率为50%左右,阳性克隆中含有c血清型变形链球菌抑龋相关的基因/片段.结论对抑制消减杂交方法获得的变形链球菌低毒力株特异的消减PCR产物进行高通量筛选,获得了抑龋相关基因/DNA片段.