2A肽介导的割手密ScNAC1、ScDREB融合基因表达载体构建

摘要

[目的]本研究旨在构建适合甘蔗遗传转化的双基因表达载体,用于提高甘蔗栽培品种的抗旱能力,并探讨基因表达规律及互作效应.[方法]本研究以前期课题组在割手密中克隆到的具有抗旱功能ScNAC1和ScDREB为目的基因,以对单子叶植物高效、专一的Ubiquitin为启动子,以适于单子叶植物遗传转化的表达载体pCAMBIA1300-nu为基础载体,利用改造后的FMDV2A多肽进行连接,采用重叠延伸PCR(简称SOE PCR)将ScNAC1和ScDREB基因相融合,利用同源重组的方法连接表达载体.[结果]经PCR验证获得约2000 bp的目的条带,利用BamH Ⅰ与Sac Ⅰ双酶切,切出了载体的1条大片段和连接目的基因的3条小片段,测序结果验证扩增产物的正确性,融合基因在扩增过程中无突变发生.[结论]本研究成功构建了符合需要的融合基因表达载体,为后期甘蔗的遗传转化研究奠定了基础.