哈茨木霉HP37-4纤维二糖水解酶Ⅰ基因的克隆及表达

摘要

从哈茨木霉(Trichoderma harzianum)HP37-4中克隆得到纤维二糖水解酶Ⅰ基因的全长DNA序列,并从HP37-4总RNA中通过RT-PCR扩增得到该基因全长cDNA序列.序列测定分析表明该基因含有3个外显子和2个内含子,编码含505个氨基酸的多肽.利用生物信息学方法对该蛋白质的结构进行了分析,推测了其主要功能区的位置及结构特征.将该基因cDNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET30a(+)中,在大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达该基因.SDS-PAGE分析表明该基因能在大肠杆菌中过量表达,但以不溶性的包涵体形式存在,经包涵体变性和多肽复性后,纯化得到了表达的重组蛋白.