真核表达质粒pIRES-ST3GALⅠ的构建及其在大肠杆菌中的初步表达

摘要

构建β半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(ST3GⅠ)基因的真核表达载体pIRES-ST3GALⅠ,并诱导使其在大肠杆菌中高效表达.以pGEM-ST3GALⅠ质粒为模板,采用PCR技术特异性扩增ST3GALⅠ基因,通过酶切和连接,构建真核表达载体pIRES-ST3GALⅠ.经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,转化筛选阳性重组大肠杆菌(DH5α),用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,并用12％SDS-PAGE鉴定.结果表明,重组质粒pIRES-ST3GALⅠ中的ST3GALⅠ序列与原鸡的ST3GALⅠ氨基酸序列同源性98,8％,与猪的同源性达53.5％,与人的同源性达52.6％.β半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ在大肠杆菌中实现了良好的表达.本试验己成功构建了含有β半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(ST3GALⅠ)的真核表达载体pIRES-ST3GALⅠ,为其转染传代细胞建立重组传代细胞系奠定了基础.