杀象耳豆根结线虫Pro-21fa6克隆子产活性蛋白酶研究

摘要

本文提取土壤样品总DNA,以Fosmid为载体,构建宏基因组文库.以脱脂奶为底物,象耳豆根结线虫为靶标,筛选杀象耳豆根结线虫的产蛋白酶基因克隆子.以克隆子Pro-21fa6为研究对象,从酶活、蛋白含量变化、pH变化对发酵过程进行了研究.结果表明,构建31104个克隆子,库容1.067Gb,获得产蛋白酶阳性克隆子111株,其中9株对象耳豆根结线虫具有毒杀作用,Pro21fa6克隆子毒杀效果最好.培养条件温度35℃、转数200r/min、以及脱脂奶与诱导剂共同作用可以使酶活提高,是基础培养基的1.33倍.Pro-21fa6蛋白酶克隆子初步研究,为蛋白酶基因基因片段亚克隆、测序、活性蛋白酶分离纯化奠定了基础.