铜绿假单胞菌环介导等温扩增技术检测方法在实验小鼠微生物控制中的应用

摘要

目的 建立铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法并初步应用于实验小鼠微生物控制.方法 根据铜绿假单胞菌oprL基因设计LAMP特异性引物,优化反应条件,确立LAMP的检测体系;再通过对小鼠血清样本的检测,与《GB/T 14926.17-2001实验动物绿脓杆菌检测方法》对比,阳性结果再用PCR方法验证.结果 新建立的LAMP方法特异性强,灵敏度比普通PCR高103倍;当反应温度为66℃,内引物和环引物的浓度分别为70 μmol·L-1和30 μmol·L-1时,LAMP反应体系最佳;利用建立的LAMP方法检测87份小鼠血清样本,铜绿假单胞菌检出率为11.5％ (10/87),比《GB/T 14926.17-2001实验动物绿脓杆菌检测方法》的高(0/87),阳性结果与PCR方法一致.结论 本研究建立的LAMP方法特异性强、灵敏度高、可重复率高、稳定性好,为检测铜绿假单胞菌提供了新的研究手段.