伊氏锥虫对安锥赛抗药性机制中的TbTA1基因

摘要

为探讨伊氏锥虫对安锥赛抗药性的分子机理，以已报导的布氏锥虫对砷剂药物抗药性相关的TbTA1基因设计引物，以不同退火温度(55℃、57℃、60℃、63℃和65℃)和不同DNA聚合酶(C1ontech的50×Advantage Po1ymerase Mix和上海生物工程公司的Taq聚合酶)，分别从伊氏锥虫敏感株(C03)的cDNA和基因组DNA中分离出TbTA1基因的全长序列，而从抗药株(C7)的cDNA和基因组DNA中都没分离出TbTA1基因，这表明抗药株的TbTA1已发生改变；根据TbTA1的5’端和1041端设计引物，从敏感株和抗药株都分离到约1000bp的片段，这表明因安锥赛抗药性的产生而TbTA1的改变主要发生在TbTA1的1042-1415部分。由此确定TbTA1与伊氏锥虫的安锥赛抗药性有关。将伊氏锥虫敏感株的TbTA1克隆、测序，其序列与布氏锥虫TbTA1序列比较，它们有10个碱基不同，即第88位的G(T．e)-A(T．b)、第144位的T(T，e)-C(T．b)、第224位的C(T．e)-T(Tb)、第471位的C（T.e)-T(T.b)、第472位的A(T．e)-G(T．b)、第549位的G(T．e)-T(T．b)、第1008位的C(T．e)-T(T．b)、第1033位的A(T．e)-G(T．b)、第1293位的A（T．e)-G(T-b)和第1384位的T(T．e)-C(T．b)，其中有5个碱基所编码的氨基酸不同，即Va130(T．e)-Iie(T．b)、A1a75（T，e)-Va1（T．b)、Ile158(T．e)-Va1(T．b)、Thr345(T．e)-Ala(T.b)和Ser462(T．e)-Pro(T．b)，这表明伊氏锥虫与布氏锥虫的TbTA1差异可能是它们的种间差异。